發(fā)布時(shí)間：2021-01-18 18:15

　　目的建立進(jìn)展型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）不同部位在病變不同階段的組織病理學(xué)變化以及M1型、M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化。方法以C57BL/6為實(shí)驗(yàn)小鼠,建立EAE模型,于不同發(fā)病時(shí)期對(duì)CNS各部位進(jìn)行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）檢測(cè)髓鞘脫失、蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色檢測(cè)炎細(xì)胞浸潤(rùn);免疫組織化學(xué)（immunohistochemistry,IHC）檢測(cè)M1型、M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化;Real-Time PCR檢測(cè)腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。結(jié)果 LFB和HE染色結(jié)果顯示EAE小鼠CNS各部位均于發(fā)病點(diǎn)出現(xiàn)髓鞘脫失和炎細(xì)胞浸潤(rùn),且隨疾病進(jìn)展逐漸加重。IHC結(jié)果顯示,M1型小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)隨疾病進(jìn)展不斷增加;M2型浸潤(rùn)先增加后減少。Real-Time PCR結(jié)果顯示,iNOS,TNF-α的mRNA水平隨疾病進(jìn)展逐漸增加;A... 

【文章來源】：世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2019,21(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

進(jìn)展型EAE小鼠不同時(shí)間點(diǎn)CNS不同部位髓鞘染色結(jié)果（50×）

2019第二十一卷第七期★Vol.21No.7〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕應(yīng)條件為：首先熱變性，95℃30s；擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)，95℃5s，60℃退火10s；溶解條件，95℃15s，60℃1min，95℃5s。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS18.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差，采用單向Anova分析組間差異。認(rèn)為P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1臨床評(píng)分臨床評(píng)分結(jié)果（圖1），EAE小鼠于造模后第14天開始發(fā)病，于Day24到達(dá)高峰期，隨后病情稍有好轉(zhuǎn)，進(jìn)入慢性持續(xù)期，臨床評(píng)分維持在3分左右。2.2LFB染色結(jié)果LFB染色結(jié)果顯示正常小鼠脊髓白質(zhì)均勻呈深藍(lán)色，白質(zhì)與灰質(zhì)的界限清晰可見；在模型組中，脊髓白質(zhì)區(qū)域染色不均，出現(xiàn)白斑區(qū)域，髓鞘脫失（圖2）。隨著疾病的發(fā)展，小鼠脊髓不同部位的髓鞘脫落逐漸嚴(yán)重；同時(shí)期以腰髓段的髓鞘脫失最嚴(yán)重。2.3HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果顯示，正常組小鼠CNS各部位著色均勻，組織排列正常，無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)；在各模型組中，炎細(xì)圖2進(jìn)展型EAE小鼠不同時(shí)間點(diǎn)CNS不同部位髓鞘染色結(jié)果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭頭所指表示髓鞘脫失部位圖1進(jìn)展型EAE小鼠臨床評(píng)分1446

世界科學(xué)技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化★思路與方法〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕胞出現(xiàn)，并逐漸滲透至血管周圍，甚至灰質(zhì)部位出現(xiàn)血管“袖套樣”浸潤(rùn)（圖3）。在進(jìn)展型EAE的發(fā)病過程中，小鼠CNS各部位炎細(xì)胞浸潤(rùn)均于發(fā)病點(diǎn)出現(xiàn)，隨疾病進(jìn)展逐漸加重，于慢性持續(xù)期趨于穩(wěn)定。同一時(shí)期不同發(fā)病部位的炎細(xì)胞浸潤(rùn)程度略有差異，相對(duì)于大腦和腦干，脊髓部位的炎細(xì)胞浸潤(rùn)更為嚴(yán)重。2.4M1型小膠質(zhì)細(xì)胞變化以iNOS特異性標(biāo)記小鼠CNS中M1型小膠質(zhì)細(xì)胞。IHC結(jié)果顯示，正常組小鼠CNS各部位有少量的M1型小膠質(zhì)細(xì)胞；模型組小鼠CNS各部位均發(fā)現(xiàn)大量M1型小膠質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)。在EAE發(fā)病后的四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，M1型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量逐漸增加；相對(duì)大腦和腦干，脊髓部位的M1型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量更多，其中以腰髓段最多（圖4）。2.5M2型小膠質(zhì)細(xì)胞變化以Arg-1特異性標(biāo)記小鼠CNS中M2型小膠質(zhì)細(xì)胞。IHC結(jié)果顯示，在EAE模型小鼠的發(fā)病過程中，CNS各部位的M2型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量先增加后減少，它在發(fā)病高峰時(shí)達(dá)到最大值，并在慢性持續(xù)時(shí)間內(nèi)顯著下降。從病變部位來看，脊髓中M2型小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)圖3進(jìn)展型EAE小鼠不同時(shí)間點(diǎn)CNS不同部位HE染色結(jié)果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭頭所指表示炎細(xì)胞浸潤(rùn)部位1447

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型小鼠脾和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中CD4+T細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化[J]. 羅會(huì),郭晴晴,呂愛平,何小鵑,馬超英.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2018(07)
[2]基于極速成像技術(shù)的原發(fā)性高血壓患者脈象客觀化研究[J]. 許軼君,高東雯,肖滬生,徐芳.  世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2018(07)
[3]C57BL/6J小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎模型建立的關(guān)鍵性問題[J]. 吳彥青,郭玉紅,劉清泉.  世界中醫(yī)藥. 2017(04)
[4]小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)多發(fā)性硬化發(fā)病的機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 梁湘輝,朱文浩,高穎.  現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2015(27)
[5]超聲極速成像技術(shù)評(píng)價(jià)維持性血液透析患者頸動(dòng)脈脈搏波傳導(dǎo)速度的臨床研究[J]. 張蕾,勇強(qiáng),程虹,卞維靜,王明月,張依然.  中國(guó)血液凈化. 2015(04)
[6]同步WI及脈象技術(shù)評(píng)估原發(fā)性高血壓不同病理階段血管彈性的研究[J]. 許軼君,肖滬生,徐芳.  上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(02)
[7]實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎鼠模型建立及其病理特點(diǎn)[J]. 張健,曾育琦,張靜,康德勇,黃天文,陳曉春.  福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(01)
[8]極速成像技術(shù)檢測(cè)的脈搏波傳導(dǎo)速度與頸動(dòng)脈硬化相關(guān)性的研究[J]. 邱蘭燕,錢林學(xué),劉冬,張宏,胡向東,任曉轉(zhuǎn),梁思.  中華超聲影像學(xué)雜志. 2014 (03)
[9]超聲無(wú)創(chuàng)技術(shù)評(píng)價(jià)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的研究進(jìn)展[J]. 朱宇,卓忠雄.  臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志. 2012(09)
[10]頸動(dòng)脈粥樣斑塊及內(nèi)中膜厚度與冠心病的關(guān)系[J]. 周慧青,孫寧玲,楊松娜,王偉民,劉美貞,胡恒慧.  高血壓雜志. 2000(04)

碩士論文
[1]基于調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞極化探討片仔癀對(duì)進(jìn)展型EAE的治療作用[D]. 羅會(huì).西南交通大學(xué) 2018
[2]C57BL/6小鼠EAE模型CNS中IBA1、IL-10及IL-1β的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其發(fā)病機(jī)制的探討[D]. 曾紅.南昌大學(xué) 2016



本文編號(hào)：2985411