目的建立進展型實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）模型,觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）不同部位在病變不同階段的組織病理學變化以及M1型、M2型小膠質(zhì)細胞的動態(tài)變化。方法以C57BL/6為實驗小鼠,建立EAE模型,于不同發(fā)病時期對CNS各部位進行切片;髓鞘染色（luxol fast blue,LFB）檢測髓鞘脫失、蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin, HE）染色檢測炎細胞浸潤;免疫組織化學（immunohistochemistry,IHC）檢測M1型、M2型小膠質(zhì)細胞的動態(tài)變化;Real-Time PCR檢測腰髓段中iNOS,TNF-α,Arg-1以及IL-4的mRNA水平。結(jié)果 LFB和HE染色結(jié)果顯示EAE小鼠CNS各部位均于發(fā)病點出現(xiàn)髓鞘脫失和炎細胞浸潤,且隨疾病進展逐漸加重。IHC結(jié)果顯示,M1型小膠質(zhì)細胞浸潤隨疾病進展不斷增加;M2型浸潤先增加后減少。Real-Time PCR結(jié)果顯示,iNOS,TNF-α的mRNA水平隨疾病進展逐漸增加;A... 

【文章來源】：世界科學技術-中醫(yī)藥現(xiàn)代化. 2019,21(07)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

進展型EAE小鼠不同時間點CNS不同部位髓鞘染色結(jié)果（50×）

2019第二十一卷第七期★Vol.21No.7〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕應條件為：首先熱變性，95℃30s；擴增40個循環(huán)，95℃5s，60℃退火10s；溶解條件，95℃15s，60℃1min，95℃5s。1.3統(tǒng)計學分析用SPSS18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)表示為平均值±標準差，采用單向Anova分析組間差異。認為P<0.05差異具有統(tǒng)計學意義。2實驗結(jié)果2.1臨床評分臨床評分結(jié)果（圖1），EAE小鼠于造模后第14天開始發(fā)病，于Day24到達高峰期，隨后病情稍有好轉(zhuǎn)，進入慢性持續(xù)期，臨床評分維持在3分左右。2.2LFB染色結(jié)果LFB染色結(jié)果顯示正常小鼠脊髓白質(zhì)均勻呈深藍色，白質(zhì)與灰質(zhì)的界限清晰可見；在模型組中，脊髓白質(zhì)區(qū)域染色不均，出現(xiàn)白斑區(qū)域，髓鞘脫失（圖2）。隨著疾病的發(fā)展，小鼠脊髓不同部位的髓鞘脫落逐漸嚴重；同時期以腰髓段的髓鞘脫失最嚴重。2.3HE染色結(jié)果HE染色結(jié)果顯示，正常組小鼠CNS各部位著色均勻，組織排列正常，無炎細胞浸潤；在各模型組中，炎細圖2進展型EAE小鼠不同時間點CNS不同部位髓鞘染色結(jié)果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭頭所指表示髓鞘脫失部位圖1進展型EAE小鼠臨床評分1446

世界科學技術—中醫(yī)藥現(xiàn)代化★思路與方法〔WorldScienceandTechnology/ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica〕胞出現(xiàn)，并逐漸滲透至血管周圍，甚至灰質(zhì)部位出現(xiàn)血管“袖套樣”浸潤（圖3）。在進展型EAE的發(fā)病過程中，小鼠CNS各部位炎細胞浸潤均于發(fā)病點出現(xiàn)，隨疾病進展逐漸加重，于慢性持續(xù)期趨于穩(wěn)定。同一時期不同發(fā)病部位的炎細胞浸潤程度略有差異，相對于大腦和腦干，脊髓部位的炎細胞浸潤更為嚴重。2.4M1型小膠質(zhì)細胞變化以iNOS特異性標記小鼠CNS中M1型小膠質(zhì)細胞。IHC結(jié)果顯示，正常組小鼠CNS各部位有少量的M1型小膠質(zhì)細胞；模型組小鼠CNS各部位均發(fā)現(xiàn)大量M1型小膠質(zhì)細胞浸潤。在EAE發(fā)病后的四個時間點，M1型小膠質(zhì)細胞數(shù)量逐漸增加；相對大腦和腦干，脊髓部位的M1型小膠質(zhì)細胞數(shù)量更多，其中以腰髓段最多（圖4）。2.5M2型小膠質(zhì)細胞變化以Arg-1特異性標記小鼠CNS中M2型小膠質(zhì)細胞。IHC結(jié)果顯示，在EAE模型小鼠的發(fā)病過程中，CNS各部位的M2型小膠質(zhì)細胞數(shù)量先增加后減少，它在發(fā)病高峰時達到最大值，并在慢性持續(xù)時間內(nèi)顯著下降。從病變部位來看，脊髓中M2型小膠質(zhì)細胞數(shù)圖3進展型EAE小鼠不同時間點CNS不同部位HE染色結(jié)果（50×）注：n=10；*P<0.05，**P<0.01，箭頭所指表示炎細胞浸潤部位1447

【參考文獻】：
期刊論文
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[6]同步WI及脈象技術評估原發(fā)性高血壓不同病理階段血管彈性的研究[J]. 許軼君,肖滬生,徐芳.  上海中醫(yī)藥大學學報. 2015(02)
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碩士論文
[1]基于調(diào)控小膠質(zhì)細胞極化探討片仔癀對進展型EAE的治療作用[D]. 羅會.西南交通大學 2018
[2]C57BL/6小鼠EAE模型CNS中IBA1、IL-10及IL-1β的動態(tài)表達及其發(fā)病機制的探討[D]. 曾紅.南昌大學 2016



本文編號：2985411