目的:建立穩(wěn)定表達熒光素酶的小鼠結腸癌細胞株并構建適用于小動物活體成像系統(tǒng)觀察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通過基因重組的方式,將外源基因插入到逆轉錄病毒載體上,以工具細胞293T包毒后得到病毒,將攜帶熒光素酶基因的質粒轉染到小鼠結腸癌細胞株CT26中,Puromycin篩選出穩(wěn)定表達熒光素酶的單克隆細胞株。擴增后接種于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通過活體動物成像系統(tǒng)監(jiān)測腫瘤的生長過程。結果:獲得了高水平穩(wěn)定表達熒光素酶的結腸癌單克隆細胞株,該單克隆細胞株與母細胞系CT26具有相似的生長特性。將穩(wěn)定表達熒光素酶的克隆接種于BALB/c鼠皮下可成瘤,小動物活體成像系統(tǒng)能準確監(jiān)測腫瘤細胞在體內(nèi)的生長過程。結論:成功建立了穩(wěn)定表達熒光素酶的結腸癌單克隆細胞株。采用活體動物成像系統(tǒng)構建的BALB/c鼠皮下結腸癌移植瘤模型是拓展腫瘤體內(nèi)生長、轉移及治療相關研究的理想模型。 

【文章來源】：中國免疫學雜志. 2019,35(17)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

CT26細胞系中穩(wěn)定過表達LUC的細胞株擴增培養(yǎng)后復蘇驗證(×100)

蟾此昭櫓?×100)Fig．1ConfirmationofresuscitationafterexpansionofCT26celllinestablyoverexpressingLUC(×100)Note:A.CT26-WT;B.CT26-LUC1.種開始就能很好地反映腫瘤的生長，由此成功建立熒光素酶標記的小鼠結腸癌細胞活體成像移植瘤模型。CT26-LUC1細胞移植瘤鏡下癌細胞排列呈團索狀，大小形態(tài)各異，胞漿豐富，細胞核大深染，局部未染色可見壞死。與CT26-WT對照細胞沒有差別(圖4C)，符合結腸癌組織細胞特征，可見慢病毒轉染熒光素酶基因對腫瘤細胞組織形態(tài)學無顯著影響。圖2CT26-LUC1細胞克隆體外熒光活性檢測Fig．2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.＊＊＊．P＜0.001.圖3CT26-LUC1細胞與CT26-WT細胞生長特性的比較(x±s)Fig．3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.羅華灶等熒光素酶標記小鼠結腸癌細胞建立活體成像移植瘤模型第17期·9012·

4C)，符合結腸癌組織細胞特征，可見慢病毒轉染熒光素酶基因對腫瘤細胞組織形態(tài)學無顯著影響。圖2CT26-LUC1細胞克隆體外熒光活性檢測Fig．2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.＊＊＊．P＜0.001.圖3CT26-LUC1細胞與CT26-WT細胞生長特性的比較(x±s)Fig．3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.羅華灶等熒光素酶標記小鼠結腸癌細胞建立活體成像移植瘤模型第17期·9012·

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PD-L1在惡性腫瘤中的表達及研究進展[J]. 高建華,王加營,葉曉鋒.  中國免疫學雜志. 2017(12)



本文編號：2963014