目的:建立穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株并構(gòu)建適用于小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)觀察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通過(guò)基因重組的方式,將外源基因插入到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體上,以工具細(xì)胞293T包毒后得到病毒,將攜帶熒光素酶基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株CT26中,Puromycin篩選出穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的單克隆細(xì)胞株。擴(kuò)增后接種于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通過(guò)活體動(dòng)物成像系統(tǒng)監(jiān)測(cè)腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程。結(jié)果:獲得了高水平穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的結(jié)腸癌單克隆細(xì)胞株,該單克隆細(xì)胞株與母細(xì)胞系CT26具有相似的生長(zhǎng)特性。將穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的克隆接種于BALB/c鼠皮下可成瘤,小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)能準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)過(guò)程。結(jié)論:成功建立了穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的結(jié)腸癌單克隆細(xì)胞株。采用活體動(dòng)物成像系統(tǒng)構(gòu)建的BALB/c鼠皮下結(jié)腸癌移植瘤模型是拓展腫瘤體內(nèi)生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及治療相關(guān)研究的理想模型。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019,35(17)北大核心

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CT26細(xì)胞系中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)LUC的細(xì)胞株擴(kuò)增培養(yǎng)后復(fù)蘇驗(yàn)證(×100)

蟾此昭櫓?×100)Fig．1ConfirmationofresuscitationafterexpansionofCT26celllinestablyoverexpressingLUC(×100)Note:A.CT26-WT;B.CT26-LUC1.種開(kāi)始就能很好地反映腫瘤的生長(zhǎng)，由此成功建立熒光素酶標(biāo)記的小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞活體成像移植瘤模型。CT26-LUC1細(xì)胞移植瘤鏡下癌細(xì)胞排列呈團(tuán)索狀，大小形態(tài)各異，胞漿豐富，細(xì)胞核大深染，局部未染色可見(jiàn)壞死。與CT26-WT對(duì)照細(xì)胞沒(méi)有差別(圖4C)，符合結(jié)腸癌組織細(xì)胞特征，可見(jiàn)慢病毒轉(zhuǎn)染熒光素酶基因?qū)δ[瘤細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)無(wú)顯著影響。圖2CT26-LUC1細(xì)胞克隆體外熒光活性檢測(cè)Fig．2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.＊＊＊．P＜0.001.圖3CT26-LUC1細(xì)胞與CT26-WT細(xì)胞生長(zhǎng)特性的比較(x±s)Fig．3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.羅華灶等熒光素酶標(biāo)記小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞建立活體成像移植瘤模型第17期·9012·

4C)，符合結(jié)腸癌組織細(xì)胞特征，可見(jiàn)慢病毒轉(zhuǎn)染熒光素酶基因?qū)δ[瘤細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)無(wú)顯著影響。圖2CT26-LUC1細(xì)胞克隆體外熒光活性檢測(cè)Fig．2CT26-LUC1cellcloneinvitrofluorescenceacti-vityassayNote:A.DetectionofluciferasefluorescenceinvitroofCT26cells(x±s);B.BioluminescenceimagingofdifferentnumbersofCT26-LUC1livecellsinvitro;C.DetectionsensitivityofCT26-LUC1celllineinBALB/cmice;D.Correlationanalysisofluminescencesignalintensityandcellnumber.＊＊＊．P＜0.001.圖3CT26-LUC1細(xì)胞與CT26-WT細(xì)胞生長(zhǎng)特性的比較(x±s)Fig．3ComparisonofgrowthcharacteristicsbetweenCT26-LUC1cellsandCT26-WTcells(x±s)Note:A.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(cellscountingmethod);B.Comparisonofcellproliferationcurvesbetweentwogroups(CCK-8method);C.Detectionofcellcycledistributionbetweenthetwogroups;D.DetectionofcellmembranetypePD-L1expressionbe-tweenthetwogroups;NS.Notsignificant.羅華灶等熒光素酶標(biāo)記小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞建立活體成像移植瘤模型第17期·9012·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PD-L1在惡性腫瘤中的表達(dá)及研究進(jìn)展[J]. 高建華,王加營(yíng),葉曉鋒.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2017(12)



本文編號(hào)：2963014