高變區(qū)1（HVR1）是位于丙型肝炎病毒（HCV）被膜蛋白E2氨基端的高度異質(zhì)性的一段序列，被認(rèn)為是宿主體液免疫中和抗體的重要靶位，但其株特異性可導(dǎo)致部分病毒逃避宿主的免疫識(shí)別和感染的持續(xù)。雖然如此，HVR1序列中存在較保守的位點(diǎn)，通過(guò)合適的HVR1免疫程序，仍可能誘生出保護(hù)性抗體。本研究對(duì)來(lái)自中國(guó)不同地區(qū)的HCV HVR1進(jìn)行了序列特性分析，在綜合考慮地域因素和基因型的差別、親水性和免疫原性的基礎(chǔ)上，首先在大腸桿菌中表達(dá)了四種DHFR-HVR1融合蛋白，檢測(cè)了它們與HCV感染者血清反應(yīng)性，其中SH1b的反應(yīng)率最高，為66.67%；初步分析提示患者免疫反應(yīng)的強(qiáng)度可能與干擾素療效有關(guān)。所得融合蛋白純化后免疫家兔獲得了相應(yīng)的抗體。將其中三個(gè)HVR1片段分別連接至乙型肝炎病毒表面抗原片段的羧端，表達(dá)了HBs-HVR1融合蛋白。為進(jìn)一步提高HVR1序列的交叉反應(yīng)性，采用DNA shuffling的方法體外重組31株從丙肝患者血清中獲得的HVR1 cDNA自然序列，構(gòu)建HVR1模擬序列噬菌體展示文庫(kù)，通過(guò)抗HVR1多克隆抗體的親和篩選， 其反應(yīng)性從46.7%-66.7% 提高到 53.3%-80%... 

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【部分圖文】：

HCV基因組結(jié)構(gòu)示意圖

圖 2 pGEM-T 質(zhì)粒結(jié)構(gòu)圖�！啊北硎� HCV 片段插入部位。2.6 序列分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法序列同源性比較采用 GCG（10.0）軟件包中的 gap 程序。疏水性分析采用 Ky& Doolittle 方法(51)。多肽序列抗原性預(yù)測(cè)采用 EMBOSS 軟件包中的 antigen程序(52)。復(fù)旦大學(xué)聯(lián)合基因科技集團(tuán)協(xié)助分析。結(jié)果與討論1. HVR1 克隆株序列測(cè)定從13名患者血清標(biāo)本中隨機(jī)挑選31株HCV克隆，其中II(1b)型26株和III(型 5 株。 HVR1cDNA 測(cè)序結(jié)果及其推導(dǎo)的相應(yīng)氨基酸序列見(jiàn)圖 3-1 及 3-2。

圖 4 HCV 株 E1、E2/NS1 區(qū)氨基酸序列疏水性預(yù)測(cè)圖。橫軸代表HCV 株E1 及部E2/NS1 區(qū)氨基酸位置，圖中位置 0－330 相當(dāng)于實(shí)際氨基酸位置 aa191－521；H位于圖中 193－220 之間�？v軸代表氨基酸的疏水性，0 以上的正值代表氨基酸有疏水性，0 以下的負(fù)值代表氨基酸具有親水性。HCV-SH2 即為以下文中的 SH1HCV-BJ2 即為 BJ1b，HCV-SD2 即為 SD1b，HCV-SD3 即為 SD2a。3. HVR1 區(qū)推導(dǎo)的氨基酸序列免疫原性預(yù)測(cè)結(jié)果采用計(jì)算機(jī)軟件預(yù)測(cè)部分 HCV 株 HVR1 區(qū)氨基酸序列的免疫原性，具有免疫性的區(qū)域如下(其免疫原性按從大到小順序排列)：HCV-SH1b： aa408－414，aa394－406HCV-SH1b’：aa408－414，aa399－406HCV-SH2a： aa399－406

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Expression of hepatitis C virus hypervariable region 1 and its clinical significance[J]. Xin-Xin Zhang Jing Liu Yuan Wang State Key Laboratory of Molecular Biology,Institute of Biochemistry and Cell Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences,Shanghai,200031,China Xin-Xin Zhang Shen-Ying Zhang Zhi-Meng Lu Department of Infectious Diseases,Rui Jin Hospital,Shanghai Second Medical University,Shanghai,200025,China.  World Journal of Gastroenterology. 2003(05)
[2]DNA immunization with fusion genes encoding different regions of hepatitis C virus E2 fused to the gene for hepatitis B surface antigen elicits immune responses to both HCV and HBV[J]. Jing Jin Jian-Ying Yang Jing Liu Yu-Ying Kong Yuan Wang Guang-Di Li,Institute of Biochemistry and Cell Biology. Shanghai Institutes for Biological Seiences,Chinese Academy of Science,Shanghai 200031,China.  World Journal of Gastroenterology. 2002(03)
[3]中國(guó)地區(qū)HCV株包膜區(qū)cDNA序列變異性分析[J]. 蔡倩,邱紀(jì)慧,張欣欣,陸志檬.  肝臟. 1999(04)
[4]北京地區(qū)46例Ⅱ/1b型HCV高變區(qū)1的序列變異研究[J]. 趙軍,程云,張鴻飛,李伯安,劉茂昌,李靜,曹陽(yáng),張建宗,付體權(quán),韓鳳連,施紅.  中華肝臟病雜志. 1999(02)



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