本文關(guān)鍵詞：抗安絲菌素單抗的制備及其ELISA檢測方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抗體藥物偶聯(lián)物（Antibody-drug conjugate）是一類正在進行臨床研究的、用于治療癌癥的日益重要的新型的靶向性藥物。在開發(fā)這類藥物的過程中，在研究藥物在體內(nèi)體外的穩(wěn)定性、藥物在體內(nèi)代謝的情況時，我們需要精確的測定小分子藥物從抗體上脫落的比例、偶聯(lián)上的小分子和抗體的摩爾比值變化、血液中脫落的小分子藥物的濃度。ELISA(酶聯(lián)免疫分析法enzyme-linked immunosorbent assay)檢測方法相對同位素標記法、LC-MS等檢測方法具有經(jīng)濟、快速、便捷等優(yōu)勢，而小分子藥物人工抗原和抗體的研制是建立酶聯(lián)免疫快速檢測的關(guān)鍵。鑒于此，本論文開展了以下研究： 設(shè)計合成了2種安絲菌素（Ansamitocin）衍生物DM1抗原,一種免疫抗原KLH-MCC-DM1，一種包被抗原trastuzumab-2A-DM1；通過測定抗體偶聯(lián)前后在波長252nm吸光值的變化，測定DM1偶聯(lián)到載體蛋白的情況。結(jié)果表明二種偶聯(lián)方式都成功將DM1偶聯(lián)到載體蛋白。 將制備的免疫抗原免疫BALB/C小鼠以制備抗DM1單克隆抗體，經(jīng)過多輪ELISA篩選，獲得1株可穩(wěn)定分泌抗DM1單克隆抗體的母克隆，經(jīng)過三輪亞克隆，獲得穩(wěn)定的雜交瘤細胞。制備腹水并進行了免疫特性分析。結(jié)果表明該雜交瘤細胞株分泌的抗體亞類為IgG1，輕鏈為lambda型。 利用獲得的單克隆抗體建立了DM1和抗體的ELISA檢測方法。ELISA檢測方法學驗證結(jié)果表明Trastuzumab-2A-DM1抗體部分的檢測不受bFGF、EGF、VEGF、TNF-α的干擾；高、中、低三個濃度樣品的平均回收率在85～95%之間，精密度小于10%；定量下限1.95ng/ml的準確度為93.95%，精密度為5.5%；板內(nèi)和板間的準確度都在80～100%范圍內(nèi)，，精密度15%。最后測定了trastuzumab-2A-DM1在大鼠體內(nèi)的代謝。
【關(guān)鍵詞】：安絲菌素 單克隆抗體 抗體藥物偶聯(lián)物 酶聯(lián)免疫分析
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 第一章 緒論9-18
• 1.1 本課題的立題背景9-10
• 1.2 抗體藥物偶聯(lián)物概述10-14
• 1.3 用免疫測定法分析抗體藥物偶聯(lián)物14-16
• 1.3.1 總抗體的 ELISA 檢測14-15
• 1.3.2 半均勻 ELISA 法15
• 1.3.3 競爭 ELISA 法15
• 1.3.4 用免疫測定法分析抗體藥物偶聯(lián)物面臨的挑戰(zhàn)15-16
• 1.4 本論文的研究目標及技術(shù)路線16-18
• 第二章 DM1 抗原設(shè)計、合成及鑒定18-23
• 2.1 引言18
• 2.2 材料與方法18-20
• 2.2.1 藥品與試劑18
• 2.2.2 主要儀器及設(shè)備18-19
• 2.2.3 試驗方法19-20
• 2.4 結(jié)果與分析20-21
• 2.4.1 免疫原 KLH-MCC-DM1 的鑒定20-21
• 2.4.2 檢測抗原 Trastuzumab-2A-DM1 的鑒定21
• 2.5 本章小結(jié)21-23
• 第三章 抗 DM1 單克隆抗體的制備與鑒定23-35
• 3.1 引言23
• 3.2 材料與方法23-29
• 3.2.1 藥品與試劑23
• 3.2.2 實驗動物和細胞23
• 3.2.3 主要儀器與設(shè)備23-24
• 3.2.4 實驗方法24-29
• 3.3 結(jié)果與分析29-34
• 3.3.1 免疫小鼠血清篩選29
• 3.3.2 雜交瘤細胞株的建立29-30
• 3.3.3 單克隆抗體的純化30-32
• 3.3.4 單克隆抗體特性鑒定32-33
• 3.3.5 ELISA 檢測方法的建立及 Trastuzumab-2A-DM1 在體外全血中的穩(wěn)定性33-34
• 3.4 本章小結(jié)34-35
• 第四章 ELISA 檢測方法測定 TRASTUZUMAB-2A-DM1 在大鼠體內(nèi)的代謝研究35-42
• 4.1 前言35
• 4.2 材料和儀器35-36
• 4.2.1 藥品與試劑35
• 4.2.2 實驗動物35-36
• 4.2.3 主要儀器及設(shè)備36
• 4.3 實驗方法36-39
• 4.3.1 制作標準曲線 ELISA 方法（見第三章 3.2.4.7）36
• 4.3.2 測定方法的驗證（ELISA 方法見第三章 3.2.4.7）36-38
• 4.3.3 實際樣品的測定（Trastuzumab-2A-DM1 穩(wěn)定性研究）38-39
• 4.4 結(jié)果與分析39-41
• 4.4.1 偶聯(lián)物抗體部分的標準曲線39
• 4.4.2 偶聯(lián)物 DM1 部分的標準曲線39-40
• 4.4.3 實際樣品的測定（Trastuzumab-2A-DM1 的穩(wěn)定性研究）40-41
• 4.5 本章小結(jié)41-42
• 結(jié)論與展望42-43
• 參考文獻43-46
• 攻讀碩士學位期間取得的研究成果46-47
• 致謝47-48
• 答辯委員會對論文的評定意見48

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本文編號：293566