發(fā)布時(shí)間：2017-04-08 15:14

  本文關(guān)鍵詞：不同狂犬疫苗免疫后血清交叉保護(hù)作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：狂犬病是一種由狂犬病毒引起的致死性疾病，，注射狂犬病疫苗是預(yù)防發(fā)病的重要手段。我國(guó)存在多種狂犬病毒流行株，這就要求疫苗能刺激機(jī)體產(chǎn)生對(duì)不同流行株具有交叉保護(hù)的廣譜中和抗體。目前對(duì)我國(guó)市售的狂犬病疫苗的廣譜保護(hù)性的研究較少，因此本研究將進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)這些狂犬疫苗對(duì)不同株病毒的保護(hù)性。此外，研究表明多種包膜病毒（如HIV-1，流感病毒，丙型肝炎病毒）膜蛋白的糖基化會(huì)使病毒逃避抗體的中和作用，而狂犬病毒包膜蛋白G蛋白這方面的研究比較少，本研究也將探索狂犬病毒G蛋白的糖基化對(duì)病毒感染能力和抗體中和作用的影響。 方法：本研究使用假病毒系統(tǒng)對(duì)我國(guó)狂犬疫苗的廣譜保護(hù)性進(jìn)行驗(yàn)證。選用四種不同株病毒制備的狂犬病疫苗對(duì)balb/c小鼠進(jìn)行分組免疫并收獲血清。制備幾種具有HIV-1核衣殼和狂犬病毒G蛋白的假病毒，該假病毒攜帶熒光素酶報(bào)告基因，具有單輪感染能力，感染細(xì)胞可以表達(dá)熒光素酶。將假病毒與免疫血清共孵育后感染BHK-21細(xì)胞，根據(jù)熒光素酶表達(dá)量確定免疫血清對(duì)不同株狂犬假病毒中和能力。另一方面，通過定點(diǎn)突變的方法增加或減少病毒G蛋白上的糖基化位點(diǎn)，檢測(cè)突變株病毒的感染能力以及免疫血清對(duì)病毒的中和能力。 結(jié)果：成功包裝了能夠感染BHK-21細(xì)胞并表達(dá)熒光素酶的CVS-11株、CTN株、aG株假病毒，免疫了不同狂犬疫苗的小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的抗體對(duì)上述假病毒均具有中和能力。病毒G蛋白204位和247位氨基酸的糖基化對(duì)病毒的感染能力產(chǎn)生一定影響，單獨(dú)增加204位糖基化使病毒感染能力增強(qiáng)，單獨(dú)去除247位糖基化位點(diǎn)使病毒感染能力降低，同時(shí)進(jìn)行上述兩種變化則病毒感染能力下降。但改變上述糖基化位點(diǎn)，免疫血清對(duì)病毒的中和能力沒有改變。 結(jié)論：本研究證明了我國(guó)狂犬病疫苗免疫后血清對(duì)不同流行株具有中和能力，說明市售的四種狂犬疫苗能產(chǎn)生廣譜中和抗體�？袢《綠蛋白204位和247位糖基化位點(diǎn)對(duì)病毒的感染能力具有一定的影響，但不能使病毒逃避抗體的中和作用，說明盡管不同毒株的抗原性和糖基化有所差異，但不影響中和抗體對(duì)這些病毒的中和能力。本研究中采用的假病毒檢測(cè)方法還可以對(duì)其他狂犬病疫苗的適用性和質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。
【關(guān)鍵詞】：狂犬病毒 疫苗 交叉保護(hù) G蛋白糖基化 假病毒
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語表11-12
• 第1章 前言12-26
• 1.1 狂犬病介紹12-24
• 1.1.1 狂犬病毒形態(tài)特征14-15
• 1.1.2 狂犬病毒基因組結(jié)構(gòu)15
• 1.1.3 狂犬病毒的蛋白結(jié)構(gòu)15-16
• 1.1.4 狂犬病毒的 G 蛋白16-19
• 1.1.5 狂犬病毒的生活周期19-20
• 1.1.6 病毒分型20-22
• 1.1.7 我國(guó)狂犬病流行病學(xué)22
• 1.1.8 狂犬病毒疫苗22-23
• 1.1.9 狂犬病毒中和抗體檢測(cè)方法23-24
• 1.2 本文的研究目的和設(shè)計(jì)思路24-26
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方法26-39
• 2.1 試劑和材料26-28
• 2.1.1 質(zhì)粒菌株細(xì)胞26
• 2.1.2 主要儀器26-27
• 2.1.3 主要試劑27
• 2.1.4 溶液配制27-28
• 2.1.5 引物及測(cè)序28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-39
• 2.2.1 動(dòng)物免疫方案28-29
• 2.2.2 獲得目的基因所需引物設(shè)計(jì)29
• 2.2.3 提取總 RNA29-30
• 2.2.4 目的基因的擴(kuò)增30-32
• 2.2.5 片段連接、質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及小提、測(cè)序鑒定32-33
• 2.2.6 片段與真核表達(dá)載體連接并克隆33
• 2.2.7 假病毒包裝33-34
• 2.2.8 Western-Blot34
• 2.2.9 假病毒滴度的測(cè)定34-35
• 2.2.10 中和抗體檢測(cè)35-36
• 2.2.11 構(gòu)建突變病毒質(zhì)粒36-39
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-51
• 3.1 質(zhì)粒構(gòu)建39-40
• 3.1.1 目的基因的擴(kuò)增39
• 3.1.2 表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建39-40
• 3.2 假病毒包裝40-41
• 3.3 假病毒感染性檢測(cè)41-42
• 3.3.1 帶有 GFP 報(bào)告基因的假病毒41-42
• 3.3.2 帶有 Luc 報(bào)告基因的假病毒42
• 3.4 假病毒中和抗體檢測(cè)42-43
• 3.5 小鼠血清對(duì)病毒的中和活性43-45
• 3.6 G 蛋白基因改造45-51
• 3.6.1 定點(diǎn)突變及 overlap PCR45-49
• 3.6.2 突變病毒感染性檢測(cè)49-51
• 第4章 討論51-54
• 第5章 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 作者簡(jiǎn)介61

【共引文獻(xiàn)】

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