本文關(guān)鍵詞：Cdx1在心臟發(fā)育過程中轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：Cdx1(caudal type homeobox1)基因編碼的是一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,在小鼠中于胚胎發(fā)育的E7.5在原條區(qū)(primitive streak)開始表達(dá),在早期胚胎發(fā)育過程中對多種組織器官的形成具有重要的調(diào)控作用。3Hox基因在胚胎早期發(fā)育過程中于第二心區(qū)以及心臟神經(jīng)脊細(xì)胞中有表達(dá),對心血管的發(fā)育具有一定的調(diào)控作用。最近,我們發(fā)現(xiàn)Cdx1在小鼠E11.5的心外膜(epicardium)中有短暫的表達(dá),并且對心外膜細(xì)胞的EMT (Epithelial Mesenchymal Transition)有促進(jìn)作用。本文研究的內(nèi)容包括：(1)在原代心外膜細(xì)胞中過表達(dá)Cdx1,通過RNA-seq篩查到下游340個明顯差異表達(dá)的基因,并用RT-PCR對部分受Cdx1調(diào)控的下游基因進(jìn)行了驗(yàn)證,Cdx1敲低(knock down)后大部分下游基因出現(xiàn)相反的變化趨勢,功能歸類分析發(fā)現(xiàn)對心臟及血管形成有影響的靶基因如Figf, Vcam1、Fgf8等均有明顯的變化。其中Figf受Cdxl調(diào)控作用最為明顯,通過熒光素酶報告實(shí)驗(yàn)證實(shí)Cdxl對Figf的具有負(fù)調(diào)控作用。(2)利用ESC/EB體外分化模型,嘗試對Cdx/Hox在早期心臟細(xì)胞分化過程中的作用做了初步探索,在心臟細(xì)胞發(fā)育的不同階段過表達(dá)Cdx1發(fā)現(xiàn)心臟細(xì)胞分化受到抑制,在293T中熒光素酶報告檢測發(fā)現(xiàn)Cdx1對Hoxa1和Hoxb1有負(fù)調(diào)控的作用。然而過表達(dá)Hoxa1對心臟細(xì)胞分化僅有輕微的促進(jìn)作用。Cdx/Hox在心臟發(fā)育過程的這種作用需要進(jìn)一步在體內(nèi)進(jìn)行驗(yàn)證。本文對早期心臟發(fā)育Cdxl下游靶基因做了初步的探索,為闡釋Cdxl的在早期心臟發(fā)育中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究提供了可能的線索。
【關(guān)鍵詞】：Cdx1 3'Hox 心臟發(fā)育 轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q78;R321.5
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-10
• 1 前言10-26
• 1.1 Cdx1基因的發(fā)現(xiàn)及其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與表達(dá)10-12
• 1.2 Cdx1基因的功能12-16
• 1.2.1 在胚胎形體發(fā)生過程中的功能12-14
• 1.2.2 在神經(jīng)發(fā)育中的功能14-15
• 1.2.3 在腸發(fā)育中的功能15
• 1.2.4 在血發(fā)生過程中的功能15-16
• 1.3 Cdx1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控16-18
• 1.4 心臟發(fā)育的基本過程18-20
• 1.5 心臟發(fā)育的轉(zhuǎn)錄調(diào)控20-23
• 1.6 Hox基因與心臟發(fā)育23-25
• 1.7 Cdx1在心臟發(fā)育過程中研究現(xiàn)狀25-26
• 2 材料與方法26-42
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料26-30
• 2.1.1 細(xì)胞系26
• 2.1.2 培養(yǎng)基及配制和常用制劑26-28
• 2.1.3 常用試劑配制28-29
• 2.1.4 主要儀器及試劑29-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法30-42
• 2.2.1 基因組DNA(gDNA)提取30-31
• 2.2.2 RNA提取與反轉(zhuǎn)、RT-PCR31-32
• 2.2.3 分子克隆32-33
• 2.2.4 雙重?zé)晒馑孛笀蟾鏅z測實(shí)驗(yàn)(Dual-luciferase reporter assay)33-35
• 2.2.5 支原體檢測35
• 2.2.6 基本細(xì)胞培養(yǎng)35-36
• 2.2.7 磷酸鈣轉(zhuǎn)染法36-37
• 2.2.8 病毒包裝與感染37-38
• 2.2.9 mES培養(yǎng)與EB分化38-40
• 2.2.10 流式細(xì)胞分析(Fluorescence-Activated Cell Sorting,FACS)40
• 2.2.12 細(xì)胞免疫熒光(Immunofluorescence,IF)40-41
• 2.2.13 siRNA基因抑制實(shí)驗(yàn)41-42
• 3. 結(jié)果與分析42-60
• 3.1 Cdx1在心外膜細(xì)胞中的靶基因42-48
• 3.1.1 Cdx1在心外膜細(xì)胞中下游靶基因的篩查42-45
• 3.1.2 siRNA抑制Cdx1后其下游靶基因的變化45-46
• 3.1.3 Luciferase assay證實(shí)CDX1對靶基因的調(diào)控作用46-48
• 3.2 Cdx/Hox通路對心臟細(xì)胞分化的調(diào)控作用48-60
• 3.2.1 Cdx1抑制早期心臟細(xì)胞的分化50-54
• 3.2.2 3'Hox基因與早期心臟細(xì)胞分化的聯(lián)系54-59
• 3.2.3 CDX1對3'Hox的調(diào)控作用59-60
• 4. 總結(jié)與討論60-63
• 參考文獻(xiàn)63-74
• 附錄Ⅰ 引物序列74-75
• 附錄Ⅱ 縮略詞表75-76
• 攻讀碩士學(xué)位期間參與的科研課題與成果76-77
• 致謝77-78

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：293629