發(fā)布時間：2017-04-08 14:26

  本文關鍵詞：MHC-I類似分子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：主要組織相容性復合體(Major Histocompatibility Complex, MHC)在免疫系統(tǒng)中的作用已經(jīng)得到了廣泛的研究。其中的MHC-I分子表達于全身所有有核細胞的表面，在免疫細胞的發(fā)育、抗原識別和T細胞免疫應答等方面起著重要的作用。此外，MHC-I還與NK細胞（natrural killer cell）的抑制性受體結(jié)合，抑制NK細胞對表達自身MHC-I分子的細胞的殺傷作用。另一方面，對于NK細胞而言，除了抑制性受體外，它們還表達一些激活性受體，其中的NKG2D可以被一些MHC-I類似分子激活，從而拮抗MHC-I對NK細胞的抑制作用。 目前已發(fā)現(xiàn)的NKG2D的配體(NKG2D ligand, NKG2DL)都是MHC-I的類似分子，鼠類包括三個家族：Rae-1（α, β, γ, δ和ε），Mult1和H60(a, bc)；人類包括兩個家族：MIC (A、B)和ULBP (1-6)。借由NKG2D受體，這些MHC-I類似分子在NK細胞中起著與MHC-I相反的作用，即對NK細胞的激活作用。這些MHC-I類似分子通常只在有問題的細胞，如轉(zhuǎn)化、病毒感染和有DNA損傷的細胞中表達。通過表達MHC-I類似分子(NKG2DL)，進而NKG2D受體激活NK細胞，使這些有問題的細胞得以清除。因此，MHC-I類似分子和NK細胞的NKG2D一起，形成一道防止有問題細胞在體內(nèi)存活的天然屏障。 MHC-I及其類似分子是否只在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用呢？對MHC-I的研究表明，它在神經(jīng)系統(tǒng)中同樣起著關鍵作用。MHC-I廣泛表達在胚胎、新生及成年小鼠及人腦中，其在神經(jīng)元中的表達具有時空特異性和可調(diào)節(jié)性。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，MHC-I對神經(jīng)功能的可塑性也起著重要作用。多種MHC-I的受體如Ly49等也在神經(jīng)元中表達。 那是否MHC-I類似分子的作用就只局限于免疫系統(tǒng)呢？實際上Rae-1在體內(nèi)的表達最初是在胚胎鼠的前腦中發(fā)現(xiàn)的，它的表達伴隨著胚胎神經(jīng)發(fā)育的關鍵時期（E13-E18），且Rae-1家族成員的表達有時空和量的差別。這之后意外發(fā)現(xiàn)其作為NKG2D的配體在免疫系統(tǒng)中的作用，而使Rae-1在神經(jīng)系統(tǒng)和神經(jīng)發(fā)育過程中可能作用的研究被忽略了，只有極少對于Rae-1的研究涉及神經(jīng)領域。鑒于已發(fā)現(xiàn)MHC-I分子在神經(jīng)中的表達及重要作用，以及多種神經(jīng)與免疫系統(tǒng)間的相似性，我們有理由相信MHC-I類似分子同樣在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮作用。 為了研究Rae-1等MHC-I類似分子在小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的可能作用，本課題的主要目標是系統(tǒng)研究這些分子及其受體在胚胎發(fā)育及成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達及其蛋白的定位，包括利用RT-PCR和原位分子雜交分析這些基因的表達，免疫組織化學分析這些蛋白在中樞神經(jīng)的分布，以及免疫熒光標記確定Rae-1蛋白在神經(jīng)細胞亞細胞結(jié)構上的定位。首先通過對Rae-1五種亞型的比對和引物設計方法，設計出能擴增全部Rae-1成員和Mult1、H60的三個成員、以及NKG2D的引物，利用RT-PCR分析這些基因的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)除H60外，這些基因全部在胚胎及成年中樞神經(jīng)系統(tǒng)有較高表達；此外，定量RT-PCR實驗的結(jié)果表明，胚胎10-18天小鼠的胚胎腦中這些基因的表達最高，出生前表達顯著降低，，但在成年腦中仍維持低水平表達。以上結(jié)果表明，與MHC-I分子一樣，MHC-I類似分子也都在發(fā)育中及成年后的中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達；此外，以上結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)NK細胞的NKG2D受體在神經(jīng)系統(tǒng)有高度表達。為了對這些分子在中樞神經(jīng)的表達進行定位，本研究還構建了原位分子雜交用的探針，并進行了初步的原位分子雜交實驗，以及初步的Western blot和免疫組織化學染色實驗。另外，為了確定Rae-1蛋白在神經(jīng)細胞的亞細胞結(jié)構上的分布，本研究在胚胎中提取了Rae-1RNA，逆轉(zhuǎn)錄后構建全長的真核表達質(zhì)粒，以及帶FLAG標簽的Rae-1表達質(zhì)粒，并在Neuro2a細胞中進行了表達。以上實驗為進一步研究MHC-I類似分子及其受體在中樞神經(jīng)發(fā)育及正常功能中的作用打下了基礎。
【關鍵詞】：主要組織相容性復合體 NKG2D配體 Rae-1 Mult1 H60 基因表達
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-21
• 1.1 MHC- I簡介13-16
• 1.1.1 MHC -I在免疫系統(tǒng)中的作用14-15
• 1.1.2 神經(jīng)系統(tǒng)中的作用15-16
• 1.2 NKG2D 及其配體16-21
• 1.2.1 NK 細胞的激活受體——NKG2D16-17
• 1.2.2 NKG2D 的配體——Rae-1，Mult1 和 H6017-21
• 第2章 帶有 FLAG 標簽的 RAE-1 表達載體的構建21-40
• 2.1 序言21-23
• 2.1.1 標簽的種類和應用21-22
• 2.1.2 重疊 PCR的原理22-23
• 2.2 材料及試劑23-25
• 2.3 實驗流程25-34
• 2.3.1 提取 RNA25-26
• 2.3.2 合成鼠胚 1st-cDNA26-27
• 2.3.3 RT-PCR27-28
• 2.3.4 瓊脂糖凝膠 DNA 回收28
• 2.3.5 Rae-1基因與載體連接并轉(zhuǎn)化28-29
• 2.3.6 陽性重組子的鑒定29
• 2.3.7 Overlap PCR29-32
• 2.3.8 雙酶切和表達載體連接32-34
• 2.4 討論34-39
• 2.5 本章結(jié)論39-40
• 第3章 ICR 小鼠中 RAE-1 亞型的表達40-44
• 3.1 序言40-41
• 3.1.1 引物的設計原則40-41
• 3.1.2 ICR 型小鼠41
• 3.2 材料與試劑41
• 3.3 實驗方法41-43
• 3.3.1 序列比對41-43
• 3.3.2 測序43
• 3.4 結(jié)果和討論43
• 3.5 本章結(jié)論43-44
• 第4章 MHC-Ⅰ類似分子和 NKG2D 在 ICR 鼠及細胞系的表達情況44-54
• 4.1 序言44
• 4.2 實驗材料44-46
• 4.2.1 材料44-45
• 4.2.2 試劑45
• 4.2.3 器材45
• 4.2.4 培養(yǎng)基配制45-46
• 4.3 實驗方法46-49
• 4.3.1 小鼠的飼養(yǎng)與繁殖46-47
• 4.3.2 細胞培養(yǎng)47-48
• 4.3.4 成年鼠的灌流取腦48
• 4.3.5 胚鼠腦 RNA提取及組織包埋48-49
• 4.3.6 T-A克隆與測序49
• 4.4 結(jié)果和討論49-53
• 4.4.1 Rae-1在胚胎鼠腦，成年鼠腦及細胞系中的表達情況50
• 4.4.2 Mult1在胚胎鼠腦，成年鼠腦及細胞系中的表達情況50-51
• 4.4.3 H60在胚胎鼠腦，成年鼠腦及細胞系中的表達情況51-52
• 4.4.4 NKG2D52-53
• 4.5 本章結(jié)論53-54
• 第5章 RAE-1 在胚鼠腦中的表達變化54-62
• 5.1 實時熒光定量 PCR原理54-57
• 5.1.1 常用的熒光定量 PCR技術54-56
• 5.1.2 實時定量 PCR的相對定量方法56-57
• 5.2 實驗材料57
• 5.3 實驗方法57-59
• 5.3.1 提取組織 RNA57-58
• 5.3.2 合成 1st-cDNA58
• 5.3.3 實時熒光相對定量 PCR（qPCR）58-59
• 5.4 結(jié)果與討論59-61
• 5.4.1 qPCR引物檢測59-60
• 5.4.2 結(jié)果分析60-61
• 5.5 本章結(jié)論61-62
• 第6章 原位分子雜交方法檢測 RAE-1 在胚胎中的表達位置62-70
• 6.1 序言62-63
• 6.1.1 原位分子雜交原理62
• 6.1.2 RNA探針的原理和特點62-63
• 6.2 材料與試劑63-64
• 6.3 實驗方法64-67
• 6.3.1 制作 RNA探針64-65
• 6.3.2 制作冰凍切片65-66
• 6.3.3 雜交66-67
• 6.4 結(jié)果與討論67-70
• 第7章 RAE-1 在神經(jīng)細胞中的表達位置70-74
• 7.1 序言70-72
• 7.1.1 免疫熒光原理70-71
• 7.1.2 細胞轉(zhuǎn)染71
• 7.1.3 N-2a 細胞的誘導分化71-72
• 7.2 實驗材料72
• 7.3 試驗方法72
• 7.3.1 細胞轉(zhuǎn)染72
• 7.3.2 G418篩選72
• 7.4 結(jié)果與討論72-74
• 第8章 結(jié)論74-76
• 參考文獻76-84
• 作者簡介84-85
• 致謝85

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1 戴鴻佐,李瑞秋;褐云瑪瑙螺(Achatina fulica F忮russac)嗅觸神經(jīng)中樞內(nèi)神經(jīng)元的分布[J];復旦學報(自然科學版);1989年01期

2 吳家紅,包懷恩;致倦庫蚊幼蟲中樞神經(jīng)系統(tǒng)的乙酰膽堿酯酶定位觀察[J];貴陽醫(yī)學院學報;2005年05期

3 邊文杰;陳曉萍;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的不對稱細胞分裂機制[J];生物學雜志;2007年05期

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5 陳杰;;女郎蜘蛛毒素的結(jié)構已闡明[J];國外醫(yī)學情報;1987年24期

6 張斌;;高校推廣太極拳運動優(yōu)越性初探[J];陰山學刊(自然科學版);1998年02期

7 ;神經(jīng)生理學[J];國外科技資料目錄(醫(yī)藥衛(wèi)生);2002年02期

8 李莉;郭媛;趙晏;;神經(jīng)肽Y參與痛覺調(diào)制的研究進展[J];生命科學;2007年05期

9 曾俊偉;阮懷珍;;神經(jīng)系統(tǒng)P2Y受體功能研究進展[J];神經(jīng)解剖學雜志;2008年01期

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2 傘勇智;付英子;付錦;俞春江;李兵;李峰;;急性播散性腦脊髓炎新進展[A];中華醫(yī)學會第十三次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2010年

3 黃大年;錢前;董國軍;李江;黃祥勇;任不凡;劉永南;蔣志秋;;γ-氨基丁酸的生理功能極其應用[A];浙江省生物化學與分子生物學學術交流會論文集[C];2005年

4 謝代鑫;鄭永玲;晏寧;;艾滋病中樞神經(jīng)系統(tǒng)機會性感染2例報道[A];第九次全國神經(jīng)病學學術大會論文匯編[C];2006年

5 周濤;張遠征;朱儒遠;;原始性神經(jīng)外胚層瘤及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)病[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第二屆全國代表大會論文匯編[C];2007年

6 朱海嘉;徐衛(wèi);洪鳴;繆扣榮;吳雨潔;范磊;李建勇;;慢性淋巴細胞白血病伴中樞神經(jīng)系統(tǒng)侵潤1例報道[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

7 張福林;汪寅;高進;黃鋒平;徐偉;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性惡性淋巴瘤——274例臨床病理分析[A];中華醫(yī)學會病理學分會2009年學術年會論文匯編[C];2009年

8 楊桂紅;雷治海;張國瑞;姚遠;;Neuromedin S及其受體NMU2R在豬中樞神經(jīng)系統(tǒng)的分布[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物解剖學及組織胚胎學分會第十六次學術研討會論文集[C];2010年

9 李平;李正莉;朱長庚;劉慶瑩;魏瑛;;雌激素受體和孕激素受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的分布[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

10 蘇炳銀;蔡文琴;張成崗;BPerbal;;結(jié)締組織生長因子在大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

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1 駐滬記者 魏峗;禮來深墾中樞神經(jīng)系統(tǒng)領地[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

2 麥國榮;泰能可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 ;立體防護“中樞神經(jīng)系統(tǒng)”[N];網(wǎng)絡世界;2003年

4 健康時報特約記者 莫鵬;用鎮(zhèn)靜藥過量喝點茶[N];健康時報;2008年

5 欒海;研究發(fā)現(xiàn)：母乳有利于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的完善[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2001年

6 王蘭 編譯;母乳喂養(yǎng)有利中樞神經(jīng)系統(tǒng)完善[N];大眾科技報;2001年

7 吳苡婷;勇闖“生命禁區(qū)” 攻克世界難題[N];上�？萍紙�;2008年

8 常珊珊;減肥就該先減肚子[N];科技日報;2000年

9 ;腦—腸作用機制[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2006年

10 陳葳;液態(tài)硅橡膠：護駕“中樞神經(jīng)系統(tǒng)”[N];中國化工報;2008年

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1 王磊;心理應激對腦鐵代謝的影響及其機制的探討[D];第二軍醫(yī)大學;2008年

2 黃濤;蛋白酪氨酸激酶受體B基因修飾骨髓基質(zhì)細胞的實驗研究[D];第一軍醫(yī)大學;2005年

3 金志剛;小鼠巢蛋白基因在神經(jīng)發(fā)育中的表達調(diào)控[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2006年

4 徐永平;山羊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的形成和發(fā)育[D];西北農(nóng)林科技大學;2002年

5 趙曜;中樞神經(jīng)系統(tǒng)海綿狀血管瘤的生物學特性和致病相關基因研究[D];復旦大學;2004年

6 許愿忠;促炎性細胞因子在老年嚙齒類動物腦內(nèi)誘導免疫應答增強及參與睡眠調(diào)節(jié)[D];中南大學;2007年

7 康惠;原發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤臨床特征及預后因素的研究[D];復旦大學;2012年

8 季淑梅;腎上腺髓質(zhì)素中樞作用的研究[D];河北醫(yī)科大學;2004年

9 鄧其躍;NgR和NEP1-35結(jié)合小肽的設計篩選及其促中樞神經(jīng)再生研究[D];第三軍醫(yī)大學;2006年

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1 史正華;中樞神經(jīng)系統(tǒng)原始神經(jīng)外胚層腫瘤的臨床、影像及病理學研究[D];第四軍醫(yī)大學;2013年

2 于暢;MHC-I類似分子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達的初步研究[D];吉林大學;2014年

3 于海霞;急性早幼粒細胞白血病發(fā)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)復發(fā)的危險因素的臨床分析[D];吉林大學;2006年

4 呂憲利;中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管網(wǎng)狀細胞瘤與von Hippel-Lindau病[D];吉林大學;2006年

5 宋先敏;P2Y4受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的表達[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

6 白云靜;人NRla膜蛋白M3-M4環(huán)靶片段免疫小鼠腦內(nèi)反應性觀察[D];大連醫(yī)科大學;2004年

7 趙贊梅;利用基因芯片技術篩選敵敵畏中毒腦損傷的相關基因[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2005年

8 劉楊;中樞神經(jīng)系統(tǒng)中樹突狀細胞在實驗性自身免疫性脊髓炎及免疫耐受中的作用[D];青島大學;2005年

9 何曉駿;伊達吡星為主聯(lián)合化療治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)血液腫瘤臨床觀察[D];浙江大學;2006年

10 于曉琳;原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管炎一例并文獻復習[D];山東大學;2011年

  本文關鍵詞：MHC-I類似分子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：293067