目的構(gòu)建大鼠程序性細(xì)胞死亡因子4（programmed cell death 4,Pdcd4）基因在體干擾模型,為進(jìn)一步研究該基因的功能提供條件。方法通過給予抗原誘導(dǎo)肺部炎癥模型大鼠,鼻腔滴入Pdcd4的干擾質(zhì)粒,以下調(diào)其體內(nèi)Pdcd4的表達(dá)。收集大鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞,提取總RNA,RT-qPCR檢測Pdcd4基因mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果在模型大鼠鼻腔滴入Pdcd4的干擾質(zhì)粒,大鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞中的Pdcd4的mRNA表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論成功構(gòu)建了Pdcd4基因的在體干擾大鼠模型,為進(jìn)一步研究Pdcd4基因的功能和作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2019年05期 北大核心

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【部分圖文】：

圖１大鼠在體干擾流程示意圖

。１．７統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)以珔ｘ±ｓ表示，采用Ｇｒａｐｈｐａｄｐｒｉｓｍ５統(tǒng)計(jì)軟件分析，多組均數(shù)間比較采用Ｏｎｅ－ｗａｙＡＮＯＶＡ。Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。２結(jié)果２．１肺組織切片的ＨＥ染色與病理學(xué)計(jì)數(shù)結(jié)果與對照組相比，ＡＩＰＩ模型組、無關(guān)質(zhì)粒組及Ｐｄｃｄ４干擾組大鼠的ＨＥ染色顯示，肺組織切片中可見支氣管周圍及肺泡中有大量炎癥細(xì)胞浸潤。對支氣管周圍滲出的細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，后３組的病理學(xué)計(jì)數(shù)值均較對照組明顯升高（圖２），表明成功誘導(dǎo)肺部炎癥模型。但是，Ｐｄｃｄ４干擾組與無關(guān)質(zhì)粒組的病理學(xué)計(jì)數(shù)沒有差異，提示Ｐｄｃｄ４的在體干擾對于肺組織炎癥滲出沒有明顯影響。２．２ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４的ｍＲＮＡ表達(dá)變化ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測結(jié)果顯示，Ｐｄｃｄ４ｓｈＲＮＡ干擾組大鼠ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４的ｍＲＮＡ表達(dá)明顯下調(diào)（圖３），提示大鼠Ｐｄｃｄ４基因干擾模型的構(gòu)建是成功的。圖２ＡＩＰＩ大鼠肺組織的病理學(xué)改變Ｆｉｇ．２ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆＡＩＰＩｒａｔｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓＡ～Ｄ：ＨＥ染色（×２００）；Ｅ：肺組織病理計(jì)分的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（珔ｘ±ｓ，ｎ＝８），＊Ｐ＜０．０５。圖３各組大鼠ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４ｍＲＮＡ的表達(dá)變化Ｆｉｇ．３Ｐｄｃｄ４ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＡＬＦｃｅｌｌｓｏｆｒａｔｓｉｎｇｒｏｕｐｓｎ＝８，珔ｘ±ｓ。＊Ｐ＜０．０５。２．３ＢＡＬＦ細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果分別計(jì)數(shù)各組ＢＡＬＦ中總細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示

顯示，肺組織切片中可見支氣管周圍及肺泡中有大量炎癥細(xì)胞浸潤。對支氣管周圍滲出的細(xì)胞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，后３組的病理學(xué)計(jì)數(shù)值均較對照組明顯升高（圖２），表明成功誘導(dǎo)肺部炎癥模型。但是，Ｐｄｃｄ４干擾組與無關(guān)質(zhì)粒組的病理學(xué)計(jì)數(shù)沒有差異，提示Ｐｄｃｄ４的在體干擾對于肺組織炎癥滲出沒有明顯影響。２．２ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４的ｍＲＮＡ表達(dá)變化ＲＴ－ｑＰＣＲ檢測結(jié)果顯示，Ｐｄｃｄ４ｓｈＲＮＡ干擾組大鼠ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４的ｍＲＮＡ表達(dá)明顯下調(diào)（圖３），提示大鼠Ｐｄｃｄ４基因干擾模型的構(gòu)建是成功的。圖２ＡＩＰＩ大鼠肺組織的病理學(xué)改變Ｆｉｇ．２ＰａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｏｆＡＩＰＩｒａｔｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｓＡ～Ｄ：ＨＥ染色（×２００）；Ｅ：肺組織病理計(jì)分的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（珔ｘ±ｓ，ｎ＝８），＊Ｐ＜０．０５。圖３各組大鼠ＢＡＬＦ細(xì)胞中Ｐｄｃｄ４ｍＲＮＡ的表達(dá)變化Ｆｉｇ．３Ｐｄｃｄ４ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＡＬＦｃｅｌｌｓｏｆｒａｔｓｉｎｇｒｏｕｐｓｎ＝８，珔ｘ±ｓ。＊Ｐ＜０．０５。２．３ＢＡＬＦ細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果分別計(jì)數(shù)各組ＢＡＬＦ中總細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，結(jié)果顯示，Ｐｄｃｄ４干擾組與無關(guān)質(zhì)粒組的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)有明顯差異，表明Ｐｄｃｄ４干擾可以減少肺泡嗜酸性粒細(xì)胞的浸潤。但兩組的總細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等計(jì)數(shù)沒有明顯差異（圖４）。２．４血清中一氧化氮、總ＩｇＥ、ＯＶＡ特異性ＩｇＧ的檢測結(jié)果Ｐｄｃｄ４在體干擾后，大鼠血清一氧化氮、總ＩｇＥ、ＯＶＡ特異性ＩｇＧ等指


本文編號：2928795