本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化過(guò)程中的miRNA差異性表達(dá)的模式分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的: 本研究課題旨從脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSC）向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的角度入手，通過(guò)應(yīng)用miRNA微列陣及qRT-PCR對(duì)分化過(guò)程中差異性表達(dá)的miRNA進(jìn)行篩選及證實(shí)，從而對(duì)這些miRNA的目的基因和所參與的細(xì)胞信號(hào)通路進(jìn)行推測(cè)與分析。 方法: 1對(duì)hADSC傳代、培養(yǎng)，應(yīng)用ADSC定向血管內(nèi)皮細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。 2對(duì)誘導(dǎo)分化前后的ADSC及血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行流式檢測(cè)表面抗原標(biāo)記，應(yīng)用顯微光鏡和透射電鏡對(duì)誘導(dǎo)前后細(xì)胞的組織學(xué)形態(tài)進(jìn)行觀察，比較，以保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。 3對(duì)誘導(dǎo)前的ASDCs及誘導(dǎo)后形成的血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行miRNA的提取，然后對(duì)誘導(dǎo)前后細(xì)胞的差異性表達(dá)miRNA進(jìn)行miRNA微陣列分析 4根據(jù)miRNA微列陣的分析結(jié)果，選取誘導(dǎo)前后差異性表達(dá)倍數(shù)較高的miRNA，對(duì)其進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證，以近一步明確其差異性表達(dá)。 5應(yīng)用生物信息學(xué)軟件David6.7對(duì)miRNA微列陣篩查出的差異性表達(dá)miRNA進(jìn)行GO、Pathway分析； 6通過(guò)使用TargetScan，Miranda，PITA，RNAhybrid，及microTar等五個(gè)miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)miRNA微列陣和qRT-PCR分析同時(shí)篩查出的差異性表達(dá)miRNA進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)，，選出在三個(gè)以上（包括三個(gè)）數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)重復(fù)出現(xiàn)的miRNA的預(yù)測(cè)靶基因，整理成表，以供進(jìn)一步分析。 結(jié)果： 1流式鑒定： 誘導(dǎo)前hADSC細(xì)胞CD31、HLA-DR呈陰性表達(dá)；CD44、CD105呈陽(yáng)性表達(dá)；誘導(dǎo)后CD44、HLA-DR呈陰性表達(dá)，CD31呈陽(yáng)性表達(dá)，CD105呈弱陽(yáng)性表達(dá)。 2光鏡及透射電鏡細(xì)胞組織學(xué)分析： 光鏡：細(xì)胞誘導(dǎo)前呈長(zhǎng)梭形，渦旋狀排列；誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，梭形變短，大部分細(xì)胞呈橢圓形。 電鏡：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞-誘導(dǎo)前：胞內(nèi)無(wú)W-P小體；人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞-誘導(dǎo)成血管內(nèi)皮細(xì)胞后：胞漿內(nèi)可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞特有的電子密度較高的W-P小體，胞漿內(nèi)可見(jiàn)血管內(nèi)皮細(xì)胞具有的吞飲小泡。 3miRNA微陣列分析及qRT-PCR驗(yàn)證： miRNA微列陣：P值〈0.05，30種miRNA在誘導(dǎo)分化前后表達(dá)差異性顯著：其中16種分化后較分化前表達(dá)上調(diào)，而14種則表達(dá)下調(diào)。 qRT-PCR：從miRNA微列陣的分析結(jié)果中選取6種分化前后差異性表達(dá)倍數(shù)較高的miRNA，驗(yàn)證出四種顯著的差異性表達(dá)的miRNA，其中包括分化后較分化前表達(dá)上調(diào)的has-miR-29b-3p，has-miR-5096；表達(dá)下調(diào)的has-miR-143-3p，has-miR145-5p。 4差異性表達(dá)miRNA的靶基因預(yù)測(cè)及pathway分析： 差異性表達(dá)miRNA的靶基因所參與的大部分細(xì)胞信號(hào)途徑腫瘤細(xì)胞形成的細(xì)胞信號(hào)通路相關(guān)。 結(jié)論： 1ADSC在定向分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的過(guò)程中存在差異性表達(dá)的miRNA，其差異性表達(dá)方式為上調(diào)或下調(diào)。 2ADSC在定向分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的過(guò)程中差異性表達(dá)miRNA的靶基因所參與細(xì)胞信號(hào)途徑與腫瘤生成參與的細(xì)胞信號(hào)途徑相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 定向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化 差異性表達(dá)miRNA 靶基因 細(xì)胞信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-10
• 材料與方法10-18
• 結(jié)果18-29
• 討論29-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-40
• 綜述40-47
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及參加課題情況47-48
• 英文縮略詞表48-49
• 致謝49-50

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孔德海;劉萬(wàn)軍;;同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞輔助自體骨軟骨鑲嵌成形術(shù)修復(fù)骨軟骨缺損的研究[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2011年03期

2 宋嘉哲;孫福伯;莊開歌;薛愷;;基于實(shí)時(shí)熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)的動(dòng)物miRNA表達(dá)分析策略[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年09期

3 Tianzhi Huang;Angel Alvarez;Bo Hu;Shi-Yuan Cheng;;Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期

4 于瀟華;郭小芳;田智;粟敏;劉立鵬;;微核糖核酸對(duì)血管生成相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用[J];長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年03期

5 徐麗萍;龍大宏;校對(duì);;誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及其在神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用前景[J];解剖學(xué)研究;2013年05期

6 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 安麗娜;董斐斐;王國(guó)坤;單冬凱;荊清;;MicroRNA與動(dòng)脈粥樣硬化[J];國(guó)際心血管病雜志;2013年04期

8 張世芳;魏彩虹;陸健;張小寧;周鑫磊;張淑珍;王光凱;曹家雪;趙福平;張莉;杜立新;;深度測(cè)序鑒定綿羊microRNA轉(zhuǎn)錄組[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2013年09期

9 陳焱;汪軍;;微小RNA-124及其相關(guān)疾病研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2013年05期

10 Juan Liu;Chang-Ping Wu;Bin-Feng Lu;Jing-Ting Jiang;;Mechanism of T cell regulation by microRNAs[J];Cancer Biology & Medicine;2013年03期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 Ruiwen Fan;Shanshan Yang;Zhanquan Shi;Kaiyuan Ji;Xiaoyun Jia;Jianbo Yao;George W Smith;Changsheng Dong;;Identification of a novel miRNA important for melanogenesis in alpaca(Lama Pacos)[A];2013中國(guó)駝業(yè)進(jìn)展[C];2013年

2 趙光強(qiáng);雷玉潔;王昆;;miR-10b、miR-18b及miR-130b在肺癌中的表達(dá)[A];第十六屆中國(guó)科協(xié)年會(huì)——分3環(huán)境污染及職業(yè)暴露與人類癌癥學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2014年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 陳劍;BMP2和BMP7基因共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 劉偉;bFGF和BMP12基因聯(lián)合修飾BMSCs后向韌帶成纖維細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

3 郝磊;人臍血源基質(zhì)細(xì)胞對(duì)MHC半相合造血干細(xì)胞移植小鼠GVHD調(diào)節(jié)作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 周嘉梁;MicroRNA-142-3p對(duì)結(jié)直腸癌生物學(xué)行為的影響及作用機(jī)制的初步研究[D];蘇州大學(xué);2013年

5 邵紅芳;基于知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的腫瘤學(xué)衍生與發(fā)展研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

6 閆實(shí);低劑量放療誘導(dǎo)宮頸癌上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2013年

7 張偉杰;三氧化二砷恢復(fù)雌激素受體α陰性乳腺癌細(xì)胞對(duì)內(nèi)分泌治療敏感性的研究[D];鄭州大學(xué);2012年

8 李奕;不同強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)mTOR信號(hào)對(duì)心肌肥大的作用研究[D];北京體育大學(xué);2013年

9 黃愛(ài)優(yōu);三角褐指藻miRNA篩選、作用機(jī)制及代謝流量分析[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2013年

10 周必勝;幾個(gè)血管、淋巴管相關(guān)基因的調(diào)控與功能研究[D];華中科技大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐秋嵐;人胎盤組織中間充質(zhì)干細(xì)胞的定位及其生物學(xué)特性[D];蘇州大學(xué);2007年

2 趙曉非;組織工程化生物活性骨膜凍存后生物學(xué)特性的研究[D];蘭州大學(xué);2008年

3 麻丹丹;牙髓干細(xì)胞與牙乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)分化調(diào)控因素的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 孫廣杰;牛腺垂體傾向表達(dá)miR-7與miR-375靶基因的識(shí)別[D];吉林大學(xué);2013年

5 李夢(mèng)姣;藍(lán)萼甲素對(duì)人肺癌A549細(xì)胞的抑制作用及其機(jī)制[D];蘇州大學(xué);2013年

6 張尚武;CEA聯(lián)合miR-17-3p在結(jié)腸癌中的診斷作用研究[D];蘇州大學(xué);2013年

7 張敏;miR-106a致去卵巢小鼠認(rèn)知功能減退的機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

8 朱啟_g;毛蘭素誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制[D];西南交通大學(xué);2013年

9 侯歌;胃癌組織中PCNA、Ki-67、Nanog、Oct-4的表達(dá)與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

10 賈要麗;P16、RASSF1A和FHIT基因啟動(dòng)子甲基化在肺癌輔助診斷中的價(jià)值[D];鄭州大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化過(guò)程中的miRNA差異性表達(dá)的模式分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：292762