本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠miR-29和IFN-γ的表達變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是人獸共患的胞內(nèi)寄生原蟲。剛地弓形蟲是一種機會性致病原蟲，在宿主免疫力正常的情況下，大多表現(xiàn)為隱性感染狀態(tài)，而當機體免疫功能下降或受抑制(如惡性腫瘤患者、器官移植者及AIDS患者等)時，處于隱性感染狀態(tài)的蟲體就會活化，迅速增生繁殖，破壞宿主細胞，引起多器官的損害，如弓形蟲腦炎，嚴重者可導(dǎo)致宿主死亡。孕婦感染弓形蟲后可引起流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、畸形或智能低下等。 從動物和人體分離的剛地弓形蟲均屬于同一個種。根據(jù)基因連鎖圖譜，剛地弓形蟲基因型可分為三個型，即typeI，typeII和typeIII。一般根據(jù)鼠感染后的毒力將弓形蟲分為鼠毒力株(murine viurlent，以RH株為代表)和無毒力株(murineavirulent，以Pru株為代表)。但是這些分型研究仍不能全面解釋不同弓形蟲分離株，在致病力、抗原種類、宿主免疫反應(yīng)等生物學(xué)特性方面存在的明顯差異。 IFN-γ具有抗病毒、抗胞內(nèi)寄生菌、抗胞內(nèi)寄生原蟲、抗細胞增殖的作用。急性弓形蟲感染階段，速殖子在體內(nèi)迅速增殖，機體對其免疫應(yīng)答主要為IFN-γ介導(dǎo)的細胞免疫。弓形蟲感染宿主IFN-γ來源于NK細胞和活化T細胞。已有研究證實，不同毒株弓形蟲感染，分泌表達不同水平的IFN-γ。近年的研究揭示，microRNA參與多種重要的生理和病理過程，在弓形蟲感染已有涉及。目前各種軟件預(yù)測發(fā)現(xiàn)，miR-29存在較多的可能靶基因，包括參與細胞增殖、分化、凋亡、遷移和免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)過程的相關(guān)基因和病毒基因等。最近研究證實，在胞內(nèi)菌李斯特菌感染中，miR-29能結(jié)合IFN-γ的3’UTR區(qū)域，參與IFN-γ基因的轉(zhuǎn)錄。那么，在不同毒株弓形蟲感染中miR-29是否也有表達？其表達是否有差異？以及和IFN-γ表達間是否存在聯(lián)系？綜合上述資料，，本研究旨在探討弓形蟲強、弱毒力株感染小鼠后，miR-29表達的差異及與IFN-γ間的關(guān)系。 我們首先建立剛地弓形蟲感染小鼠模型，并設(shè)立對照組。分別用分離的弓形蟲RH株速殖子和Pru株包囊感染C57BL/6小鼠，在感染后的不同時間點，采用ELISA法檢測血清IFN-γ表達水平，實時熒光定量PCR方法檢測血清miR-29表達，實時熒光定量PCR方法檢測NK細胞、CD4~+T細胞和CD8~+T細胞分泌IFN-γ水平及miR-29表達情況等。 本研究獲得如下主要結(jié)果： 1.弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠血清IFN-γ水平ELISA法檢測小鼠感染后2、4和6天及正常對照小鼠血清IFN-γ表達。與正常對照組相比，感染后2天血清IFN-γ水平開始上升，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。感染后4天和6天，血清IFN-γ水平顯著提高（P0.001），并且RH株感染組IFN-γ水平顯著高于Pru株感染組。 2.弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠NK細胞、CD4~+T細胞和CD8~+T細胞IFN-γ表達水平磁珠分選RH株和Pru株感染小鼠與正常小鼠NK細胞、CD4~+T細胞和CD8~+T細胞，提取各細胞總RNA，實時熒光定量PCR檢測IFN-γ mRNA表達情況。結(jié)果顯示，與正常對照組相比，RH株和Pru株感染小鼠NK細胞IFN-γ水平均于感染2天后開始增加，于感染后4天和6天進一步增加（P0.001）。CD4~+T細胞的IFN-γ表達水平均于感染2天后開始增加，感染后4天和6天也進一步增加（P0.01）。RH株CD8~+T細胞IFN-γ水平于感染2天后開始增加，感染后6天結(jié)果進一步增加。Pru株CD8~+T細胞IFN-γ水平于感染4天后才開始出現(xiàn)明顯增加，到感染后6天進一步增加（P0.01）。RH株IFN-γ增加的幅度高于Pru株。 3.弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠血清miR-29表達提取RH株和Pru株感染小鼠2、4和6天及正常小鼠血清總RNA，實時熒光定量PCR檢測血清miR-29表達。結(jié)果顯示，與同期對照組相比，感染組血清中miR-29表達下降，其中強毒株RH株感染后2、4和6天，小鼠血清miR-29水平均下降（P0.01），弱毒株P(guān)ru株感染后6天miR-29出現(xiàn)降低（P0.05）。 4.弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠NK細胞、CD4~+T細胞和CD8~+T細胞miR-29表達情況實時熒光定量PCR結(jié)果顯示，與正常對照組相比，感染組NK細胞miR-29表達均下降，RH株感染組miR-29表達于感染后2天即出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）；隨著感染天數(shù)增加，miR-29表達水平進一步下降（P0.001）。而Pru株感染組miR-29表達水平于感染后4天呈現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01）。CD4~+T細胞miR-29表達總體呈下降趨勢，RH株感染組miR-29a表達水平于感染后2天即出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.01），而miR-29b于感染后6天才出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；Pru株感染組miR-29a和miR-29b表達水平均于感染后4天出現(xiàn)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。RH株感染組CD8~+T細胞miR-29a和miR-29b表達水平，于感染后4天出現(xiàn)下降，差異有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.001），感染后第2和第6天，miR-29a和miR-29b表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而Pru株感染組miR-29a未見明顯變化，miR-29b于感染后2d卻略呈上升趨勢。
【關(guān)鍵詞】：弓形蟲 毒力株 IFN-γ miR-29
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R382.5
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 一 前言11-14
• 二 材料和方法14-33
• 三 結(jié)果33-46
• 四 討論46-51
• 五 小結(jié)51-52
• 參考文獻52-69
• 附錄69-70
• 致謝70

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 殷國榮;劉成芳;劉娟娟;管志玉;石蓉;張宇斌;銀晶晶;;可溶性弓形蟲速殖子抗原聯(lián)合蜂膠和IFN-γ鼻內(nèi)免疫小鼠誘導(dǎo)的細胞免疫應(yīng)答[J];中國病原生物學(xué)雜志;2006年01期

2 ;Biological role of surface Toxoplasma gondii antigen in development of vaccine[J];World Journal of Gastroenterology;2006年15期

  本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲RH株和Pru株感染小鼠miR-29和IFN-γ的表達變化，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：292420