發(fā)布時(shí)間：2017-04-08 07:18

  本文關(guān)鍵詞：彎曲菌的分離培養(yǎng)及分型分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：彎曲菌(Campylobacter)是主要的食源性致病菌,廣泛存在于家禽家畜的腸道和自然環(huán)境中。宿主的排泄物可以污染食物和水源,造成人類(lèi)和其他動(dòng)物感染彎曲菌。對(duì)人致病的彎曲菌中最常見(jiàn)的是空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,簡(jiǎn)寫(xiě)為C.jejuni)和結(jié)腸彎曲菌(Campylobacter coli,簡(jiǎn)寫(xiě)為C.coli),引起的最常見(jiàn)癥狀是腹瀉性腸炎,格林-巴利綜合征(Guillain-Barre syndrome, GBS)是彎曲菌感染后最嚴(yán)重的并發(fā)癥。在發(fā)達(dá)國(guó)家,彎曲菌感染引起的腹瀉病例數(shù)超過(guò)沙門(mén)菌和志賀菌,使彎曲菌成為最常見(jiàn)的腹瀉致病菌。在發(fā)展中國(guó)家,空腸彎曲菌是兒童腹瀉死亡的重要病原。腹瀉病人彎曲菌感染的檢測(cè)及鑒定方法較多,感染診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”是從糞便中分離到彎曲菌。國(guó)際國(guó)內(nèi)關(guān)于彎曲菌分離培養(yǎng)方案較多,但對(duì)于病人糞便中彎曲菌的分離鑒定未見(jiàn)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),因此優(yōu)化一種適用于病人糞便標(biāo)本中彎曲菌的常規(guī)分離培養(yǎng)方案對(duì)于彎曲菌感染的檢測(cè)具有重要意義。本研究通過(guò)模擬實(shí)驗(yàn),從培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件等方面對(duì)糞便中彎曲菌的分離培養(yǎng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化,選擇優(yōu)化方案對(duì)北京和河北兩家醫(yī)院腹瀉病人進(jìn)行標(biāo)本的收集及彎曲菌的檢測(cè)。 家禽作為彎曲菌貯存的主要宿主,其較高的感染率對(duì)人類(lèi)健康帶來(lái)很大威脅。國(guó)內(nèi)關(guān)于雞群中彎曲菌的攜帶率報(bào)導(dǎo)高低不一。為進(jìn)一步了解我國(guó)家禽中彎曲菌的攜帶情況,本研究組收集北京規(guī)�；B(yǎng)殖場(chǎng)不同品系雞的泄殖腔拭子進(jìn)行彎曲菌的分離培養(yǎng),結(jié)果提示因飼養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短不同而致不同品系雞彎曲菌攜帶率不同,蛋雞(8-12個(gè)月)彎曲菌的平均攜帶率為30%,短期養(yǎng)殖屠宰前肉雞糞便標(biāo)本中未檢出彎曲菌。隨機(jī)抽取部分短期飼養(yǎng)肉雞(42天)肛拭子標(biāo)本使用熒光定量PCR法直接檢測(cè)彎曲菌,也未發(fā)現(xiàn)感染。此外,2012年以來(lái),美國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家頻繁報(bào)道彎曲菌污染雞肝導(dǎo)致的彎曲菌病的暴發(fā),為了解我國(guó)雞肝中彎曲菌的污染情況,本研究收集北京和石家莊的雞肝進(jìn)行彎曲菌的分離培養(yǎng)。結(jié)果北京采樣雞肝彎曲菌的分離率為41%,石家莊雞肝中未檢出彎曲菌。雞肝標(biāo)本微需氧選擇性分離培養(yǎng)彎曲菌過(guò)程中分離到變形桿菌和雞螺桿菌,變形桿菌的污染、覆蓋可能是石家莊地區(qū)雞肝樣品彎曲菌檢出失敗的原因。研究證明,雞螺桿菌是導(dǎo)致腹瀉的病原菌之一,雞肝中雞螺桿菌的檢出提示污染的雞肝可能成為我國(guó)腹瀉患者食源性感染的危險(xiǎn)食品。 分子分型技術(shù)在食源性致病菌暴發(fā)識(shí)別、溯源調(diào)查、流行趨勢(shì)分析及耐藥相關(guān)背景研究中已經(jīng)廣泛應(yīng)用,脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)因分辨率高成為病原分型甄別的重要手段,而多位點(diǎn)序列分型方法(MLST)操作簡(jiǎn)單并有國(guó)際可比對(duì)的數(shù)據(jù)庫(kù)也已廣泛用于病原菌的進(jìn)化研究。已有大量文獻(xiàn)使用PFGE或(和)MLST技術(shù)進(jìn)行彎曲菌病暴發(fā)的識(shí)別、流行趨勢(shì)的預(yù)測(cè)及彎曲菌進(jìn)化、不同宿主來(lái)源菌株的遺傳相關(guān)性的研究。使用PFGE方法分型結(jié)果顯示不同宿主來(lái)源彎曲菌散布在不同組群中,沒(méi)有明顯的宿主特異性。但對(duì)32株雞肝來(lái)源彎曲菌聚類(lèi)分析,結(jié)果同一市場(chǎng)同一批次雞肝分離的彎曲菌有聚集性,提示雞肝在超市包裝或屠宰場(chǎng)加工過(guò)程中可能存在交叉污染。使用MLST技術(shù)對(duì)我國(guó)477株不同宿主來(lái)源的彎曲菌作最小生成樹(shù)分析菌株間的遺傳相關(guān)性,結(jié)果表明我國(guó)不同宿主來(lái)源空腸彎曲菌菌型多樣、分散,未見(jiàn)明顯聚集性,但腹瀉患者菌株與家禽來(lái)源菌株的菌型有高度一致性,而不同宿主來(lái)源結(jié)腸彎曲菌有明顯的聚集性,83%屬于ST-828complex。使用統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的7個(gè)管家基因的等位基因在宿主水平進(jìn)行分布差異的比較,結(jié)果人源和禽源空腸彎曲菌有4個(gè)管家基因的等位基因有差異,而人源、禽源及畜源結(jié)腸彎曲菌只有2個(gè)管家基因的等位基因有差異,尤其是特定等位基因只出現(xiàn)于特定的宿主,提示等位基因可能有宿主特異性。
【關(guān)鍵詞】：彎曲菌 分離鑒定 感染率 分子分型 遺傳多樣性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R378
【目錄】：

• 縮略詞5-7
• 論文摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一部分 糞便標(biāo)本中彎曲菌分離培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化12-23
• 前言12-14
• 材料方法14-17
• 結(jié)果17-21
• 討論21-22
• 小結(jié)22-23
• 第二部分 不同來(lái)源標(biāo)本彎曲菌的分離培養(yǎng)23-50
• 前言23-26
• 材料方法26-33
• 結(jié)果33-46
• 討論46-49
• 小結(jié)49-50
• 第三部分 彎曲菌的分子分型分析50-66
• 前言50-51
• 材料方法51-57
• 結(jié)果57-64
• 討論64-65
• 小結(jié)65-66
• 參考文獻(xiàn)66-79
• 綜述79-86
• 參考文獻(xiàn)82-86
• 論文發(fā)表情況86-87
• 致謝87

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：彎曲菌的分離培養(yǎng)及分型分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：292364