目的:用攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）報(bào)告基因的人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子121 （hVGF121）的真核質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMCs）,觀察其表達(dá),并檢測融合蛋白對細(xì)胞增殖和血管通透性的影響。方法:擴(kuò)增已構(gòu)建的pEGFP-N2-hVEGF121重組質(zhì)粒,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染BMCs;熒光顯微鏡下觀測綠色熒光蛋白的表達(dá);Western Blot檢測VEGF蛋白的表達(dá); MTT實(shí)驗(yàn)和miles試驗(yàn)分別檢測融合蛋白對細(xì)胞增殖和血管通透性的影響。結(jié)果:pEGFP-N2-hVEGF121成功轉(zhuǎn)染入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,在熒光顯微鏡下可見強(qiáng)綠色熒光蛋白的表達(dá), Westen Blot檢測到VEGF蛋白的表達(dá)。MTT試驗(yàn)證實(shí)融合蛋白刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖,與對照組相比有顯著性差異（P < 0.05）。Miles試驗(yàn)證實(shí)融合蛋白能夠增加血管壁的通透性。結(jié)論:重組質(zhì)粒pEGFP-N2-hVEGF121體外轉(zhuǎn)染入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后,目的基因能夠在細(xì)胞有效表達(dá),檢測方法簡便可靠。融合蛋白在體外具有野生型VEGF的功能。本實(shí)驗(yàn)為利用轉(zhuǎn)染該種目的基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行心血管疾病的研究提供了理論支持。 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物，CD29呈陽性表達(dá)－Ｄ３４ＣＦＩＴＣ１１０１００１０００1ＣＤ２９－ＰＥ

圖 1A 培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（×200）1B 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物，CD29 呈陽性－Ｄ３４ＣＦＩＴＣ１ １０ １００ １０００１０００100101ＣＤ２９－ＰＥ

空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MSCs


本文編號：2920929