目的:細(xì)菌會隨著人類或航天器部件進(jìn)入太空，有研究表明細(xì)菌在空間環(huán)境作用下毒力增強(qiáng)，然而，關(guān)于這一效應(yīng)的普遍性及機(jī)制尚未完全闡明。粘質(zhì)沙雷氏菌是一種常見的臨床條件致病菌，曾在空間站多次檢出。本研究利用神舟八號飛船搭載的機(jī)會，采用表型研究相關(guān)實驗，并利用比較基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)以及蛋白質(zhì)組學(xué)的生物信息學(xué)方法探索粘質(zhì)沙雷氏菌經(jīng)歷了空間飛行環(huán)境作用后的變化，并初步探討其機(jī)制。方法：（1）粘質(zhì)沙雷氏菌通過神舟八號飛船搭載獲得空間飛行實驗組，地面設(shè)同步溫度對照組,實驗組及對照組均經(jīng)過16SrDNA進(jìn)一步驗證。（2）通過革蘭氏染色、紙片法耐藥實驗、溶血實驗、生長曲線測定，Biolog法對空間飛行粘質(zhì)沙雷氏菌株和地面對照菌株進(jìn)行形態(tài)、耐藥性、溶血性、生長速率、生化代謝譜的觀察比較，明確空間飛行株的生物學(xué)特性，并獲得粘質(zhì)沙雷氏菌變異株LCT-SM166、LCT-SM262、地面對照株為LCT-SM213。（3）采用高通量Illumina測序技術(shù)對樣品LCT-SM166、LCT-SM262、LCT-SM213進(jìn)行Paired-End測序。對產(chǎn)出的數(shù)據(jù)進(jìn)行De novo組裝,并進(jìn)行基因預(yù)測及注釋分析。對空間變... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

搭載裝置

圖 2 搭載樣品包.菌株的培養(yǎng)和保存.1.培養(yǎng)基配制：配制 LB 固體培養(yǎng)基 6L，調(diào)節(jié) PH 7.0~7.2，121℃高壓蒸汽滅菌 20min。滅后，從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，冷卻至 50~60℃，開始在生物安全柜中倒平板約 20ml 培養(yǎng)基 個平板，總共倒 300 個平板用于稀釋涂布。在生物安全柜置 1d，備用。*LB 配方：胰蛋白胨 10g，酵母粉 5g，氯化鈉 10g，瓊脂 17g。.2.稀釋涂布：對原樣品進(jìn)行從 10-1到 10-6梯度稀釋，選擇 10-2、10-4，10-6進(jìn)行涂布，每釋度п個重復(fù)，分別取 100ul 各稀釋度菌懸液涂布于 LB 平板р，于 37℃培中倒置培養(yǎng)。培養(yǎng)至 20h 后，取出平板，選出菌落分布比較合適的平板，每品選擇 2~5 個平板，每個平板選擇п同形態(tài)的菌落（相同形態(tài)的菌落選擇 3

面：好號的平板按順序擺放，同時將平板р單菌落的編號 式п份的竹簽挑取對應(yīng)編號的單菌落在斜面р進(jìn)行劃線，每個單菌，化完斜面后將其放置在 37℃培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng) 18~24h，每 支進(jìn)行 16s rDNA 擴(kuò)增測序，另外兩支放在 4℃冰箱保藏。 16s rDNA 鑒定實驗流程增 16S rDNA：DNA 是 16S rRNA 序列的基因，長約 1.5kb。將已分純的單菌直16S rDNA，部分通過菌液 PCR 較難擴(kuò)增的單菌經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后提擴(kuò)增所用引物序列如н： AGAGTTTGATCATGGCTCAG TAGGGTTACCTTGTTACGACTT的高保真 LA Taq 酶擴(kuò)增得到高質(zhì)量 PCR 產(chǎn)物。如圖 3：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]空間生命科學(xué)研究與展望[J]. 郭英華,劉長庭.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2011(04)
[2]模擬微重力對肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞窖蛋白-1和內(nèi)皮型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J]. 康春燕,袁明,鄒琳,章燁,李天志,王俊鋒,劉長庭.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2010(11)
[3]模擬微重力對人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[J]. 康春燕,劉長庭,鄒琳,袁明,章燁,李天志,王洋,王德龍,劉巖.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2010(11)



本文編號：2918041