乙腦病毒，屬黃病毒科黃病毒屬成員�；蚪Y(jié)構(gòu)為單股正鏈RNA，全長11kb。本病毒主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，且患者以兒童居多，在黃病毒中乙腦病毒引起的乙型腦炎病死率最高，年病死人數(shù)超過1萬人。隨著對該病毒病原學(xué)研究的深入，從基因水平探討病毒的生物學(xué)特性，是研究其致病機(jī)理與構(gòu)建新型疫苗的必由之路。 但是乙腦病毒為RNA病毒，和其它非逆轉(zhuǎn)錄RNA病毒一樣，在復(fù)制過程中不形成DNA中間體。要利用分子生物學(xué)技術(shù)通過對病毒RNA直接進(jìn)行重組、突變等方法在基因水平研究病毒的分子生物學(xué)特性存在著一定的困難，因?yàn)橥蛔�、重組、克隆等分子生物學(xué)技術(shù)都是在DNA水平上的操作。體外轉(zhuǎn)錄制備感染性RNA(感染性轉(zhuǎn)錄體)技術(shù)為RNA病毒的分子生物學(xué)研究開辟了新路。該技術(shù)是將病毒的RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，把全長的cDNA置于RNA聚合酶啟動(dòng)子的下游，在RNA聚合酶的作用下在體外轉(zhuǎn)錄出全長的正鏈RNA，經(jīng)轉(zhuǎn)染易感細(xì)胞后即可復(fù)制出子代病毒顆粒。由于這種子代病毒是來自cDNA，這樣人們就可以在DNA水平上進(jìn)行操作。重組或突變將被轉(zhuǎn)錄到子代病毒的RNA中，從而實(shí)現(xiàn)人為改造病毒達(dá)到研究其復(fù)制、表達(dá) 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

長模板RT一PeR擴(kuò)增JEv全長coNA

圖7.Cl克隆體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞。a:BHK細(xì)胞轉(zhuǎn)染后第6天病只轉(zhuǎn)染Cl克隆DNA的對照細(xì)胞;Fig.7.BHKeelltransfeetedwithRNAtranseriptsderivedrfomCI6daysafterBHKeelltransfeetedwithtranseriPts:b:ControltransfeetewitDNofleone

10.長模板RT一CPR產(chǎn)物體外轉(zhuǎn)錄后轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞第6天的病變結(jié)果(10)a，染PCR產(chǎn)物的對照細(xì)胞。.10.6daysafterBHKeelltransfeetedwiththetranseriPtsderivedflieonoflongtemplateRT一PCR(10a).10b:ControlBHKeelltransfeetedwfull一lengtheDNA

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]逆轉(zhuǎn)錄-半套式-聚合酶鏈反應(yīng)在乙腦早期診斷中的應(yīng)用[J]. 黃慶生,馬文煜,姜紹諄,張富泉,李別虎,肖毅,劉利兵.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 1998(04)
[2]RNA病毒感染性轉(zhuǎn)錄體的制備[J]. 蘭水云.  國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊). 1998(02)



本文編號：2910301