本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細胞向功能性肝細胞定向分化方法的優(yōu)化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干細胞技術(shù)是當今再生醫(yī)學研究領(lǐng)域最為前沿的科學，特別是人類的胚胎干細胞（embryonic stem cells，簡稱“ES細胞”），自1998年建系以來，因其優(yōu)越的分化潛能和高度的自我更新，受到世界范圍內(nèi)研究人員的廣泛關(guān)注，在臨床疾病治療方面，也具有著優(yōu)越的應(yīng)用前景。 ES細胞向成熟功能性肝細胞分化的過程，共分為4個階段：內(nèi)胚層的誘導分化階段、肝特異性細胞的誘導分化階段、成肝細胞的擴增階段和肝細胞的成熟階段。每個階段都依靠不同的細胞分化因子進行誘導。在本課題中，課題組在細胞分化的起始及擴增階段，加入了B27作為優(yōu)化誘導因子。同時，在分化的肝細胞成熟階段，改變了經(jīng)典的抑瘤素M（OSM）、地塞米松（Dex）等因子的誘導方式，直接采用HCMTMSingleQuots培養(yǎng)基進行誘導分化。然后，對于分化各個階段，從形態(tài)變化、特異蛋白表達、基因表達等方面進行了檢測，特別是對ES細胞衍生的成熟肝細胞進行了功能學評價，從糖原合成、吲哚菁綠代謝能力以及低密度脂蛋白吸收功能三個方面進行了檢測，從而全面評價本課題中分化方法在臨床治療方面的可應(yīng)用性。 研究結(jié)果顯示：應(yīng)用本方法可以成功地將人源ES細胞分化為成熟的功能性肝細胞。在分化的終末階段，細胞呈現(xiàn)典型的肝細胞狀態(tài)；在內(nèi)胚層細胞的誘導分化階段，細胞表達內(nèi)胚層特異性蛋白FOXA2和SOX17；在成肝細胞的擴增階段，ES細胞分化的肝細胞，，也具備了一定肝前體細胞的特性，表達AFP和HNF4α；在最后肝細胞成熟階段，ES細胞分化的成熟肝細胞的特異蛋白ALB和HNF4α均呈陽性表達，而且表達的效率在90%以上。在功能檢測方面，研究結(jié)果表明：在功能學上，ES細胞分化的成熟功能性肝細胞與真正的人體成熟肝細胞具有較高的一致性。具體來講，ES細胞分化的肝細胞具有糖原合成和儲備的能力。同時，具有代謝吲哚菁綠的能力，以及吸收低密度脂蛋白的功能。更為重要的是，在基因檢測方面，與原有的經(jīng)典實驗方法相比，盡管在多能性基因（POU5F1、SOX2和NANOG）的表達調(diào)控方面，未見明顯的區(qū)別。但是，在肝細胞特異性基因（SOX17、HNF4α和ALB）的表達調(diào)控方面，本課題的誘導分化方法可以顯著提高中后階段部分肝細胞特異性基因（HNF4α和ALB）的表達水平，從而達到了優(yōu)化ES細胞向功能性肝細胞定向分化的目的。 總的來講，本課題以人源ES細胞的肝向分化技術(shù)研究為核心，以現(xiàn)有的分化平臺為基礎(chǔ)，通過細胞分化過程中誘導因子的優(yōu)化，改善人源ES細胞向成熟功能性肝細胞的分化效率，從而建立一種高效誘導人源ES細胞分化為功能性肝細胞的方法。所以，本課題為肝細胞的發(fā)生發(fā)育研究和肝臟疾病藥物篩選建立了一種新的體外模型，同時，也為人源ES細胞在臨床肝臟疾病的治療應(yīng)用方面提供一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。
【關(guān)鍵詞】：胚胎干細胞 肝細胞 分化 功能
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文對照表10-11
• 第1章 緒論11-18
• 1.1 ES 細胞技術(shù)的誕生11-12
• 1.2 ES 細胞的生物學特性12-13
• 1.3 ES 細胞技術(shù)存在的問題13-15
• 1.4 ES 細胞向肝細胞定向分化的誘導方法15-17
• 1.5 實驗設(shè)計思路17-18
• 第2章 材料與試劑18-23
• 2.1 細胞株18
• 2.2 儀器18-19
• 2.3 試劑19-20
• 2.4 引物序列20-21
• 2.5 培養(yǎng)基的配制21-23
• 第3章 實驗部分23-29
• 3.1 ES 細胞的常規(guī)培養(yǎng)23-24
• 3.2 ES 細胞向肝細胞的定向分化24
• 3.3 ES 細胞衍生肝細胞的鑒定和評價24-29
• 第4章 實驗結(jié)果29-37
• 4.1 ES 細胞的形態(tài)觀察29
• 4.2 ES 細胞在分化過程中的形態(tài)學變化29-30
• 4.3 ES 細胞在分化過程中特異蛋白的表達情況30-32
• 4.4 ES 細胞衍生肝細胞的功能性檢測結(jié)果32-34
• 4.5 ES 細胞定向分化過程中的基因表達變化結(jié)果34-37
• 第5章 討論37-40
• 5.1 本課題分化方法的優(yōu)勢37
• 5.2 ES 細胞與 iPS 細胞在分化方法上的共通性37-38
• 5.3 現(xiàn)階段 ES 細胞肝向分化方法的存在問題38-40
• 小結(jié)40-41
• 參考文獻41-44
• 作者簡介44-47
• 致謝47

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李紫聰;黃曉靈;劉德武;吳珍芳;;轉(zhuǎn)基因動物生物反應(yīng)器研究進展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2013年04期

2 常勝合;徐立;李敬陽;孫威;王甲水;許桂鶯;孫佩光;吳瓊;金志強;舒海燕;;提高香蕉胚性愈傷誘導成功率的可能途徑[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2013年19期

3 Min Yao;Jian Chen;Xiao-Xi Yang;Xiao-Ling Zhang;Qing-Shan Ji;Qing Zhou;Jin-Tang Xu;;Differentiation of human amniotic epithelial cells into corneal epithelial-like cells in vitro[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年05期

4 姜英浩;張菊;盧茲凡;;干細胞倫理之爭的“終結(jié)者”——談諾貝爾生理學與醫(yī)學獎獲得者山中伸彌[J];醫(yī)學爭鳴;2013年05期

5 徐麗萍;龍大宏;校對;;誘導多能干細胞及其在神經(jīng)再生醫(yī)學的應(yīng)用前景[J];解剖學研究;2013年05期

6 Jian Shu;Hongkui Deng;;Lineage Specifers:New Players in the Induction of Pluripotency[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 Xiao-Bing Zhang;;Cellular Reprogramming of Human Peripheral Blood Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

8 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 Yi-ye Zhou;Fanyi Zeng;;Integration-free Methods for Generating Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

10 Menghua Wu;Guilai Chen;Baoyang Hu;;Induced Pluripotency for Translational Research[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 周燦權(quán);李宇彬;;研究中的生殖醫(yī)學技術(shù)[A];中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會第二次全國生殖臨床學術(shù)研討會論文匯編[C];2012年

2 張可華;袁寶珠;;治療性干細胞產(chǎn)品相關(guān)的風險因素[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導多能干細胞建系及其細胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學;2012年

2 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細胞輸注促進STZ誘導的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細胞向β細胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2013年

3 朱玉德;膠質(zhì)瘤干細胞的生物學特性及其與膠質(zhì)瘤血管發(fā)生的關(guān)系[D];蘇州大學;2013年

4 叢義梅;豬原始生殖細胞體內(nèi)跟蹤、體外培養(yǎng)及遺傳印記的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學;2013年

5 陳雪梅;人胚胎干細胞傳代培養(yǎng)和神經(jīng)誘導分化過程中基因組遺傳變異的動態(tài)變化[D];鄭州大學;2013年

6 李遠;雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質(zhì)瘤細胞的研究[D];鄭州大學;2013年

7 靳木子;阿爾巴斯白絨山羊與綿羊胚胎干細胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2013年

8 袁建龍;利用體細胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因絨山羊的研究[D];內(nèi)蒙古大學;2013年

9 梅宇欽;黃酮類化合物庫內(nèi)小分子4a經(jīng)由PPAR-β-Mfn2-[Ca~(2+)]_M信號調(diào)控胚胎干細胞神經(jīng)分化[D];浙江大學;2013年

10 楊梅;NAIF1基因在胃癌細胞中的功能與機理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王振;造血系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的慢病毒載體構(gòu)建及表達[D];山東師范大學;2013年

2 陳明;骨髓單個核細胞在腦缺血大鼠腦內(nèi)受損區(qū)域的定向分化[D];鄭州大學;2013年

3 孫博;人廢棄胚胎群體培養(yǎng)及胚胎干細胞系的建立[D];鄭州大學;2013年

4 費璇;KLF4在大鼠晶狀體損傷促進視神經(jīng)再生過程中的表達[D];鄭州大學;2013年

5 雷學華;重編程因子對小鼠組蛋白H3K4/27甲基化酶基因啟動子活性的影響[D];安徽大學;2013年

6 鄧玉金;應(yīng)用小鼠ESCs體外誘導己分化體細胞為iPSCs的異性來源鑒別體系研究[D];西南大學;2013年

7 趙龍彪;烏司他丁對急性心肌梗死大鼠心臟的保護作用[D];河北醫(yī)科大學;2013年

8 曹玲玲;Hemin誘導K562細胞向紅系細胞分化和胞質(zhì)雜交體的蛋白質(zhì)組學及NPM1功能的初步研究[D];浙江理工大學;2013年

9 孟泳圳;卵巢上皮癌側(cè)群細胞（side population,Sp）研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

10 郝向偉;家蠶Hedgehog信號通路相關(guān)基因的克隆、鑒定及其功能分析[D];西南大學;2013年

  本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細胞向功能性肝細胞定向分化方法的優(yōu)化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：290590