本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞向功能性肝細(xì)胞定向分化方法的優(yōu)化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干細(xì)胞技術(shù)是當(dāng)今再生醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域最為前沿的科學(xué)，特別是人類的胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells，簡(jiǎn)稱“ES細(xì)胞”），自1998年建系以來，因其優(yōu)越的分化潛能和高度的自我更新，受到世界范圍內(nèi)研究人員的廣泛關(guān)注，在臨床疾病治療方面，也具有著優(yōu)越的應(yīng)用前景。 ES細(xì)胞向成熟功能性肝細(xì)胞分化的過程，共分為4個(gè)階段：內(nèi)胚層的誘導(dǎo)分化階段、肝特異性細(xì)胞的誘導(dǎo)分化階段、成肝細(xì)胞的擴(kuò)增階段和肝細(xì)胞的成熟階段。每個(gè)階段都依靠不同的細(xì)胞分化因子進(jìn)行誘導(dǎo)。在本課題中，課題組在細(xì)胞分化的起始及擴(kuò)增階段，加入了B27作為優(yōu)化誘導(dǎo)因子。同時(shí)，在分化的肝細(xì)胞成熟階段，改變了經(jīng)典的抑瘤素M（OSM）、地塞米松（Dex）等因子的誘導(dǎo)方式，直接采用HCMTMSingleQuots培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)分化。然后，對(duì)于分化各個(gè)階段，從形態(tài)變化、特異蛋白表達(dá)、基因表達(dá)等方面進(jìn)行了檢測(cè)，特別是對(duì)ES細(xì)胞衍生的成熟肝細(xì)胞進(jìn)行了功能學(xué)評(píng)價(jià)，從糖原合成、吲哚菁綠代謝能力以及低密度脂蛋白吸收功能三個(gè)方面進(jìn)行了檢測(cè)，從而全面評(píng)價(jià)本課題中分化方法在臨床治療方面的可應(yīng)用性。 研究結(jié)果顯示：應(yīng)用本方法可以成功地將人源ES細(xì)胞分化為成熟的功能性肝細(xì)胞。在分化的終末階段，細(xì)胞呈現(xiàn)典型的肝細(xì)胞狀態(tài)；在內(nèi)胚層細(xì)胞的誘導(dǎo)分化階段，細(xì)胞表達(dá)內(nèi)胚層特異性蛋白FOXA2和SOX17；在成肝細(xì)胞的擴(kuò)增階段，ES細(xì)胞分化的肝細(xì)胞，，也具備了一定肝前體細(xì)胞的特性，表達(dá)AFP和HNF4α；在最后肝細(xì)胞成熟階段，ES細(xì)胞分化的成熟肝細(xì)胞的特異蛋白ALB和HNF4α均呈陽性表達(dá)，而且表達(dá)的效率在90%以上。在功能檢測(cè)方面，研究結(jié)果表明：在功能學(xué)上，ES細(xì)胞分化的成熟功能性肝細(xì)胞與真正的人體成熟肝細(xì)胞具有較高的一致性。具體來講，ES細(xì)胞分化的肝細(xì)胞具有糖原合成和儲(chǔ)備的能力。同時(shí)，具有代謝吲哚菁綠的能力，以及吸收低密度脂蛋白的功能。更為重要的是，在基因檢測(cè)方面，與原有的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法相比，盡管在多能性基因（POU5F1、SOX2和NANOG）的表達(dá)調(diào)控方面，未見明顯的區(qū)別。但是，在肝細(xì)胞特異性基因（SOX17、HNF4α和ALB）的表達(dá)調(diào)控方面，本課題的誘導(dǎo)分化方法可以顯著提高中后階段部分肝細(xì)胞特異性基因（HNF4α和ALB）的表達(dá)水平，從而達(dá)到了優(yōu)化ES細(xì)胞向功能性肝細(xì)胞定向分化的目的。 總的來講，本課題以人源ES細(xì)胞的肝向分化技術(shù)研究為核心，以現(xiàn)有的分化平臺(tái)為基礎(chǔ)，通過細(xì)胞分化過程中誘導(dǎo)因子的優(yōu)化，改善人源ES細(xì)胞向成熟功能性肝細(xì)胞的分化效率，從而建立一種高效誘導(dǎo)人源ES細(xì)胞分化為功能性肝細(xì)胞的方法。所以，本課題為肝細(xì)胞的發(fā)生發(fā)育研究和肝臟疾病藥物篩選建立了一種新的體外模型，同時(shí)，也為人源ES細(xì)胞在臨床肝臟疾病的治療應(yīng)用方面提供一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。
【關(guān)鍵詞】：胚胎干細(xì)胞 肝細(xì)胞 分化 功能
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 中英文對(duì)照表10-11
• 第1章 緒論11-18
• 1.1 ES 細(xì)胞技術(shù)的誕生11-12
• 1.2 ES 細(xì)胞的生物學(xué)特性12-13
• 1.3 ES 細(xì)胞技術(shù)存在的問題13-15
• 1.4 ES 細(xì)胞向肝細(xì)胞定向分化的誘導(dǎo)方法15-17
• 1.5 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路17-18
• 第2章 材料與試劑18-23
• 2.1 細(xì)胞株18
• 2.2 儀器18-19
• 2.3 試劑19-20
• 2.4 引物序列20-21
• 2.5 培養(yǎng)基的配制21-23
• 第3章 實(shí)驗(yàn)部分23-29
• 3.1 ES 細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)23-24
• 3.2 ES 細(xì)胞向肝細(xì)胞的定向分化24
• 3.3 ES 細(xì)胞衍生肝細(xì)胞的鑒定和評(píng)價(jià)24-29
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-37
• 4.1 ES 細(xì)胞的形態(tài)觀察29
• 4.2 ES 細(xì)胞在分化過程中的形態(tài)學(xué)變化29-30
• 4.3 ES 細(xì)胞在分化過程中特異蛋白的表達(dá)情況30-32
• 4.4 ES 細(xì)胞衍生肝細(xì)胞的功能性檢測(cè)結(jié)果32-34
• 4.5 ES 細(xì)胞定向分化過程中的基因表達(dá)變化結(jié)果34-37
• 第5章 討論37-40
• 5.1 本課題分化方法的優(yōu)勢(shì)37
• 5.2 ES 細(xì)胞與 iPS 細(xì)胞在分化方法上的共通性37-38
• 5.3 現(xiàn)階段 ES 細(xì)胞肝向分化方法的存在問題38-40
• 小結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 作者簡(jiǎn)介44-47
• 致謝47

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李紫聰;黃曉靈;劉德武;吳珍芳;;轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物反應(yīng)器研究進(jìn)展[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2013年04期

2 常勝合;徐立;李敬陽;孫威;王甲水;許桂鶯;孫佩光;吳瓊;金志強(qiáng);舒海燕;;提高香蕉胚性愈傷誘導(dǎo)成功率的可能途徑[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年19期

3 Min Yao;Jian Chen;Xiao-Xi Yang;Xiao-Ling Zhang;Qing-Shan Ji;Qing Zhou;Jin-Tang Xu;;Differentiation of human amniotic epithelial cells into corneal epithelial-like cells in vitro[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2013年05期

4 姜英浩;張菊;盧茲凡;;干細(xì)胞倫理之爭(zhēng)的“終結(jié)者”——談諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)獲得者山中伸彌[J];醫(yī)學(xué)爭(zhēng)鳴;2013年05期

5 徐麗萍;龍大宏;校對(duì);;誘導(dǎo)多能干細(xì)胞及其在神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)的應(yīng)用前景[J];解剖學(xué)研究;2013年05期

6 Jian Shu;Hongkui Deng;;Lineage Specifers:New Players in the Induction of Pluripotency[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 Xiao-Bing Zhang;;Cellular Reprogramming of Human Peripheral Blood Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

8 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 Yi-ye Zhou;Fanyi Zeng;;Integration-free Methods for Generating Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

10 Menghua Wu;Guilai Chen;Baoyang Hu;;Induced Pluripotency for Translational Research[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 周燦權(quán);李宇彬;;研究中的生殖醫(yī)學(xué)技術(shù)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)生殖醫(yī)學(xué)分會(huì)第二次全國生殖臨床學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

2 張可華;袁寶珠;;治療性干細(xì)胞產(chǎn)品相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)因素[A];2012年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賈蓓;A型血友病人非整合誘導(dǎo)多能干細(xì)胞建系及其細(xì)胞疾病模型的建立[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

2 申晶;骨髓源間充質(zhì)干細(xì)胞輸注促進(jìn)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠胰腺內(nèi)α細(xì)胞向β細(xì)胞的轉(zhuǎn)變：糖尿病治療的新模式[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2013年

3 朱玉德;膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其與膠質(zhì)瘤血管發(fā)生的關(guān)系[D];蘇州大學(xué);2013年

4 叢義梅;豬原始生殖細(xì)胞體內(nèi)跟蹤、體外培養(yǎng)及遺傳印記的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 陳雪梅;人胚胎干細(xì)胞傳代培養(yǎng)和神經(jīng)誘導(dǎo)分化過程中基因組遺傳變異的動(dòng)態(tài)變化[D];鄭州大學(xué);2013年

6 李遠(yuǎn);雜合型重編程Oct4聯(lián)合多能干細(xì)胞因子表現(xiàn)重編程人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的研究[D];鄭州大學(xué);2013年

7 靳木子;阿爾巴斯白絨山羊與綿羊胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

8 袁建龍;利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因絨山羊的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

9 梅宇欽;黃酮類化合物庫內(nèi)小分子4a經(jīng)由PPAR-β-Mfn2-[Ca~(2+)]_M信號(hào)調(diào)控胚胎干細(xì)胞神經(jīng)分化[D];浙江大學(xué);2013年

10 楊梅;NAIF1基因在胃癌細(xì)胞中的功能與機(jī)理研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王振;造血系統(tǒng)關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的慢病毒載體構(gòu)建及表達(dá)[D];山東師范大學(xué);2013年

2 陳明;骨髓單個(gè)核細(xì)胞在腦缺血大鼠腦內(nèi)受損區(qū)域的定向分化[D];鄭州大學(xué);2013年

3 孫博;人廢棄胚胎群體培養(yǎng)及胚胎干細(xì)胞系的建立[D];鄭州大學(xué);2013年

4 費(fèi)璇;KLF4在大鼠晶狀體損傷促進(jìn)視神經(jīng)再生過程中的表達(dá)[D];鄭州大學(xué);2013年

5 雷學(xué)華;重編程因子對(duì)小鼠組蛋白H3K4/27甲基化酶基因啟動(dòng)子活性的影響[D];安徽大學(xué);2013年

6 鄧玉金;應(yīng)用小鼠ESCs體外誘導(dǎo)己分化體細(xì)胞為iPSCs的異性來源鑒別體系研究[D];西南大學(xué);2013年

7 趙龍彪;烏司他丁對(duì)急性心肌梗死大鼠心臟的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 曹玲玲;Hemin誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系細(xì)胞分化和胞質(zhì)雜交體的蛋白質(zhì)組學(xué)及NPM1功能的初步研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

9 孟泳圳;卵巢上皮癌側(cè)群細(xì)胞（side population,Sp）研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

10 郝向偉;家蠶Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)基因的克隆、鑒定及其功能分析[D];西南大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：人胚胎干細(xì)胞向功能性肝細(xì)胞定向分化方法的優(yōu)化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：290590