目的 構建免疫球蛋白超家族補體受體（CRIg）的原核表達質粒pSmartⅠ-SUMO-CRIg,并通過大腸桿菌表達體系對其進行表達和純化,并檢測表達產(chǎn)物活性。方法 從人肝臟細胞HHMa中提取總RNA,采用反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）和DNA無縫克隆技術,將編碼人CRIg胞外段基因序列克隆至pSmart-Ⅰ載體上,選擇陽性菌落進行質粒提取和測序,用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和蛋白質印跡法（Western blot）對其表達產(chǎn)物進行檢測,預測SDS-PAGE檢測結果位于40 000處。最后通過補體旁路途徑溶血實驗檢測其活性。重復3次實驗取算術平均值繪制溶血曲線。結果 擴增出的人CRIg片段長度為819 bp,測序結果比對為人CRIg胞外段序列,提取質粒轉化至Rosetta菌株后通過IPTG誘導發(fā)現(xiàn)CRIg可以穩(wěn)定在上清中表達。溶血實驗證明25 μm蛋白濃度可以幾乎完全抑制溶血。結論 CRIg可以在原核表達體系中實現(xiàn)可溶性表達。 

【文章來源】：中華實驗外科雜志. 2019年07期 第1267-1269頁

【文章頁數(shù)】：3 頁


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