目的 構(gòu)建免疫球蛋白超家族補(bǔ)體受體（CRIg）的原核表達(dá)質(zhì)粒pSmartⅠ-SUMO-CRIg,并通過(guò)大腸桿菌表達(dá)體系對(duì)其進(jìn)行表達(dá)和純化,并檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物活性。方法 從人肝臟細(xì)胞HHMa中提取總RNA,采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和DNA無(wú)縫克隆技術(shù),將編碼人CRIg胞外段基因序列克隆至pSmart-Ⅰ載體上,選擇陽(yáng)性菌落進(jìn)行質(zhì)粒提取和測(cè)序,用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）對(duì)其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),預(yù)測(cè)SDS-PAGE檢測(cè)結(jié)果位于40 000處。最后通過(guò)補(bǔ)體旁路途徑溶血實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其活性。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)取算術(shù)平均值繪制溶血曲線(xiàn)。結(jié)果 擴(kuò)增出的人CRIg片段長(zhǎng)度為819 bp,測(cè)序結(jié)果比對(duì)為人CRIg胞外段序列,提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至Rosetta菌株后通過(guò)IPTG誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)CRIg可以穩(wěn)定在上清中表達(dá)。溶血實(shí)驗(yàn)證明25 μm蛋白濃度可以幾乎完全抑制溶血。結(jié)論 CRIg可以在原核表達(dá)體系中實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)。 

【文章來(lái)源】：中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2019年07期 第1267-1269頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：3 頁(yè)


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