目的:獲得A/B血型抗原的模擬多肽,并將其與夾心化學(xué)發(fā)光免疫分析（chemiluminescence immunoassay, CLIA）相結(jié)合,以開(kāi)發(fā)更有效的方法來(lái)測(cè)量A/B抗體的效價(jià)。方法:分別用NaM87-1F6和HEB-29對(duì)噬菌體12肽庫(kù)進(jìn)行三輪淘選。對(duì)經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）確定的陽(yáng)性菌斑進(jìn)行測(cè)序分析,根據(jù)其氨基酸組成合成模擬多肽,并通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性ELISA、凝集抑制等方法檢測(cè)其抗原性。隨后將獲得的模擬多肽與CLIA結(jié)合,檢測(cè)A、B抗體效價(jià),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)以及與現(xiàn)有的微柱凝膠法（CAT）進(jìn)行相關(guān)性對(duì)比。結(jié)果:經(jīng)過(guò)三輪淘選和相關(guān)鑒定后得到13個(gè)與抗A抗體和19個(gè)與抗B抗體特異性相互作用的噬菌體克隆,其中分別有9個(gè)（MTRIQLRMMRLH）和12個(gè)（PQMSRHRMRMLP）展示相同的氨基酸序列,據(jù)此合成的多肽分別命名為MTR和PQM。競(jìng)爭(zhēng)性ELISA結(jié)果表明,MTR能夠特異性拮抗A抗體和A抗原的替代多肽的免疫結(jié)合;PQM能夠特異性拮抗B抗體和B抗原的替代多肽的免疫結(jié)合。凝集抑制實(shí)驗(yàn)表明MTR/PQM可以特異性抑制A/B型紅細(xì)胞與抗A/B之間的相互作用。結(jié)合模擬肽的夾心CL... 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019年15期 第2822-2828頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 噬菌體展示Ph.D.-12肽庫(kù)的生物淘選
        1.2.2 選擇和擴(kuò)增陽(yáng)性噬菌體克隆
        1.2.3 ELISA檢測(cè)陽(yáng)性噬菌體克隆
        1.2.4 DNA測(cè)序以及多肽合成
        1.2.5 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)合成多肽
        1.2.6 紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)
        1.2.7 化學(xué)發(fā)光免疫分析
        1.2.8 微柱凝膠法
        1.2.9 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)
    1.3 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 特異性噬菌體淘選的富集率
    2.2 噬菌體克隆與對(duì)應(yīng)單抗的親和力
    2.3 測(cè)序結(jié)果
    2.4 合成多肽與天然A,B抗原具有相同的抗原性
    2.5 合成抗原能夠抑制紅細(xì)胞與對(duì)應(yīng)抗體的結(jié)合
    2.6 化學(xué)發(fā)光方法
    2.7 CLIA與CAT結(jié)果的相關(guān)性
3 討論



本文編號(hào)：2904432