抗腫瘤免疫和抗感染免疫的關(guān)鍵點之一是誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗原特異性的Th1型免疫應(yīng)答。利用免疫佐劑調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)使其向Th1型免疫應(yīng)答偏向是一種可行的方式。傳統(tǒng)佐劑以福氏佐劑為代表，主要誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生，以Th2型免疫應(yīng)答為主。隨著免疫學研究的進展，一些新的具有佐劑作用的物質(zhì)不斷被發(fā)現(xiàn)，并逐步形成新一代的佐劑。新一代佐劑主要是一些免疫刺激物質(zhì)和細胞因子，其中包括IFN-γ、IL-12、LPS、lipid A和CpG等。佐劑輔助抗原激發(fā)機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，幾乎都與抗原遞呈細胞（Antigen-presenting cells,APC）尤其是樹突狀細胞（Dendritic cells,DC）的作用有關(guān)。近年來，大量研究發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白（Heat shockprotein,HSP）家族的許多成員具有佐劑效應(yīng)，而且主要誘導(dǎo)機體產(chǎn)生抗原特異性的細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL，以Th1型應(yīng)答為主。HSP由于具有獨特的佐劑效應(yīng)而受到免疫學界的廣泛關(guān)注。 HSP-DC（HSP derived from DC,HSP-DC）是我們從人外周血單核細胞來源的DC cDNA文庫通... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

原核表達載體pQE30Fig.1IllustrationofveetorPQE30

925月21圖3Fig.3重組表達質(zhì)粒pQE30一HSP一Dc的酶切鑒定VeetorPQE30一HSP一DCeuttedbyBamHIandSmallane1.PQE30一HSP一DC:lane2.PQE30p以·30/Hs卜oeSma9工旦旦歹〔coRI/RBS}A下曰八G該GC人下CG6幼伯5...._么omHI_】GG八TcCG丁036HSP~DC八丁口GCGOCC八TCGG人GTTCACCTO口GCTGC^CCTC人GCATGTGAGGCCGTCt氏t八八GG八丁GGCCGGGCC^G^TCCTGGGC^G人八GCTCC八仔TG八了CC八C八AGCTC^G八八八T氏CATCGCGGAA^GTAAATGTTTAGT八八G八丁OTTGCCAGACT口AT八TTTAGTAAAATGA八AG八八八CGGC人CATTCTG認TTGGGCTCAGATGCJ過叫GTD57乙江以腸衛(wèi)二刀兇生蛆工巧刀戈CGTTTG八忿TTTG仔人GA人入八仔CA八八八八人人TGCTCTTGG八G八八GCAGC認GAGCTGCTGG八TTTAATGTTTTGC仔從TT八八TTCACG八入CC仔TCT仔CAGCTCTTCTTGCTTATGGAATTGGAC八八GACTCCCCI民CT仔G人八燕人^OC八AT八TTTTGGTGTTT八八GCTTGGAGGAAC八TCCTI氏TCTCTCAGCGTCATGGA八GTTA八CAGTGGAATA亡汀CG仔GTTCT了TC八八CA八ACACTG八TGAI八AC八TC仔GTGGTGCACATTTCACAGA^AccT“GcAC^GTATc認。CTTcTG^OTTCc~GATCcTTc^MC^TG竺竺竺些三生。Tos。GGAA八了GCGCGAGCCATGA丁GA八八T認ACGAAC八GTGC趙翻以巨及屹口山側(cè)準山比刀江工山CCTTGGG八入GTGCC八八CTGTTTTCTTGACTCATT八T民TG八八GGTCAAGATTTTG八TTGCA八TGTGTCC^6八GC^AGATTTG人ACTTCTTTGTTCTCCACTTTTt八八t氏^GTGt八TAGAAGC八八TCA6八GGACTCT丁次G八TC八A八入TGG人TTT叭CAGCAG八TG八TATC八AC八AGGTTGTCCTTTGTGGAGGGTCTTCTCGA八丁CCC八滿A仔Cl民CA‘C^^cTG^T一

重組pQE3o一HSP一oe質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達宿主菌M15，在ZYT中用lmMIPTo誘導(dǎo)表達4小時，出現(xiàn)明顯的一條重組表達蛋白帶，分子量約為56kD，而經(jīng)同樣誘導(dǎo)的pQE30空載體轉(zhuǎn)化的M巧沒有這一蛋白條帶(圖5)。HsP一Dc的理論分子量為54.8kD，加上pQE30表達框編碼的引導(dǎo)膚(序列為MRGSHHHHHHGS，計算分子量1.4kD)。因此，表達的重組蛋白與預(yù)測的His一HSP一DC目的蛋白的分子量相近。表達HSP一DC重組蛋白的細菌經(jīng)超聲破菌，發(fā)現(xiàn)目的蛋白主要在包涵體中。由于一些HSP能結(jié)合LPS，為得到無LPS污染的重組HSP一DC蛋白，我們選擇充分洗滌包涵體，然后從包涵體通過變性復(fù)性獲得目的蛋白的純化路線。97ko66koHSP一DCMW:56ko43ko31ko2。k。蘸{矍翼靴叱口蕊然粼圖5重組HSP一DC蛋白的誘導(dǎo)表達Fig.5ExPressionofreeombinantHSP一DCProteininM15byIPTGM:Proteinmarker:l:inelusionbodiesfromindueedPQE30一HSP一DC/M15:2:refoldedHSP一DCProteinonNi一NTAeo]umn:3


本文編號：2903094