蛋白質(zhì)的磷酸化修飾是最重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一。蛋白質(zhì)的磷酸化和去磷酸化過程是細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達(dá)等諸多生命過程中最普遍也是最重要的調(diào)控手段之一[1],在生物學(xué)功能研究領(lǐng)域受到廣泛的關(guān)注。以質(zhì)譜技術(shù)為核心的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)研究的方法可以系統(tǒng)、規(guī)�；貙�(fù)雜體系中的磷酸化蛋白質(zhì)進(jìn)行定性及定量分析,從而為與蛋白質(zhì)磷酸化相關(guān)的各種生物學(xué)功能研究提供通量化的技術(shù)平臺和極有價值的數(shù)據(jù)集。但由于蛋白質(zhì)的磷酸化修飾含量少、化學(xué)計量值低、質(zhì)譜檢測離子化效率低,使得磷酸肽的質(zhì)譜檢測較為困難,且在復(fù)雜生物樣本中大量高豐度、非磷酸化肽段的存在進(jìn)一步抑制了磷酸肽的質(zhì)譜信號,若對生物樣品直接進(jìn)行質(zhì)譜分析,磷酸肽的檢出率較低,因此在質(zhì)譜檢測前,對磷酸化肽段進(jìn)行相對的分離富集是必不可少的步驟之一。金屬氧化物富集法,特別是二氧化鈦富集法,由于對磷酸肽富集效果好,且價格低廉,操作簡便,是使用最為廣泛的磷酸肽富集方法之一。但是由于二氧化鈦除了可以吸附磷酸基團,對天冬氨酸(D)及谷氨酸(E)這樣的酸性氨基酸也有一定的吸附作用。因而在富集磷酸肽的同時,富含天冬氨酸及谷氨酸殘基的非磷酸肽也常常隨著磷酸肽一起被富集,對磷酸... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

樣本復(fù)雜程度及抑制劑對二氧化鈦富集選擇性的影響

L/6J 小鼠肝臟磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)各個步驟所需樣本量及不可蛋白作為起始上樣量。何能在可信度較高的條件多有研究意義數(shù)據(jù)的基本條圖譜數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫對比進(jìn)中，數(shù)據(jù)檢索參數(shù)設(shè)置的究中，研究者大多使用同，而鮮有人針對不同的數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)庫檢索中的幾個重要配數(shù)、鑒定蛋白數(shù)等進(jìn)行了據(jù)集最佳的數(shù)據(jù)檢索參數(shù)設(shè)

圖 4 母離子質(zhì)量精度和三種酶切方式組合搜索結(jié)果示意圖離子質(zhì)量誤差參數(shù)的選擇母離子質(zhì)量誤差參數(shù)與酶切方式最佳組合之后，我們又對行了最優(yōu)選擇。在使用最優(yōu)母離子質(zhì)量參數(shù)與酶切方式質(zhì)量誤差為 0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 Da 及 1.2 Da 的比較。圖 5 為各種子離子設(shè)置下的圖譜及蛋白鑒定數(shù)分到，在 1% FDR、相同的母離子參數(shù)設(shè)置條件下，0.4、所獲得的圖譜鑒定數(shù)相仿，而在 0.8 Da 的參數(shù)設(shè)置下鑒多。因此我們選擇了相對可以鑒定更多磷酸化蛋白結(jié)果差的設(shè)置參數(shù)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]高通量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中一種基于GO的蛋白質(zhì)功能分析策略(英文)[J]. 李棟,荔建琦,歐陽曙光,吳松鋒,王建,徐筱杰,朱云平,賀福初.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(11)
[2]利用一種新的網(wǎng)上工具Scansite進(jìn)行蛋白質(zhì)磷酸化預(yù)測[J]. 唐穎,張令強,賀福初.  生物工程學(xué)報. 2004(04)



本文編號：2900693