發(fā)布時間：2020-12-05 12:53

　　目的研究一種國產(chǎn)膠原酶在小鼠胰島分離中的分離效果,探索該膠原酶在胰島分離中應(yīng)用的可行性。方法將國產(chǎn)膠原酶分別配成不同濃度的膠原酶溶液和含中性蛋白酶的膠原酶的溶液,經(jīng)胰管逆行灌注膠原酶的方法進(jìn)行小鼠胰島分離,采用Ficoll液對胰島進(jìn)行純化,計(jì)數(shù)所得的胰島細(xì)胞團(tuán),培養(yǎng)6 h后檢測活性,對最佳分離結(jié)果的胰島做同系糖尿病小鼠的腎被膜下移植,監(jiān)測術(shù)后血糖和進(jìn)行組織學(xué)檢查,以進(jìn)口Sigma膠原酶V為對照。結(jié)果國產(chǎn)膠原酶在小鼠胰腺消化時間、所得胰島數(shù)量和活性效果上跟進(jìn)口膠原酶V有一定差距(P<0.01),但含中性蛋白酶的國產(chǎn)膠原酶組在小鼠胰島分離數(shù)量和當(dāng)量上與進(jìn)口膠原酶組無差異(P>0.05),分離的胰島在體內(nèi)移植后降血糖效果與進(jìn)口膠原酶組無差異(P>0.05)。結(jié)論國產(chǎn)膠原酶結(jié)合中性蛋白酶可用于小鼠胰島的分離。 

【文章來源】：肝膽胰外科雜志. 2019年10期 第616-619頁

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

圖1分離得到的小鼠胰島細(xì)胞團(tuán)（×100）ABCA：國產(chǎn)膠原酶分離得到的小鼠胰島；B：含中性蛋白酶的國產(chǎn)膠原酶分離得到的小鼠胰島；C：Sigma膠原酶V分離得到的小鼠胰島

±33114.3±15.581.0±5.4國產(chǎn)膠原酶+中性蛋白酶1.0+1363U/mL6.7±0.3消化較完全130±34159.5±19.686.1±5.31.0+2726U/mL5.1±0.3消化較完全143±22171.3±12.587.2±4.8Sigma膠原酶V1.03.6±0.2消化完全149±26176.4±13.692.6±3.72.2移植后小鼠的血糖變化結(jié)果本次胰島移植采用1.0mg/mL國產(chǎn)膠原酶+2726U/mL中性蛋白酶為消化液分離的小鼠胰島，和進(jìn)口膠原酶V分離的小鼠胰島進(jìn)行同系糖尿病小鼠胰島腎被膜下胰島移植。由圖2可見，國產(chǎn)膠原酶分離的小鼠胰島移植后，糖尿病小鼠的血糖可在24h內(nèi)降至正常，48h內(nèi)部分小鼠的血糖值有波動。移植成功后的小鼠血糖控制穩(wěn)定，并可長時間維持血糖在正常水平（＞30d），與進(jìn)口Sigma膠原酶分離的小鼠胰島腎被膜下移植的結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。2.3移植后胰島的組織學(xué)檢查結(jié)果胰島移植后第14天，取含胰島的小鼠腎組織，經(jīng)固定、包埋、切片后，進(jìn)行HE染色和胰島素免疫組化染色。由圖3結(jié)果可知，糖尿病小鼠胰島移植14d后，Insulin免疫組化染色顯示腎被膜下較多陽性組織，說明該含中性蛋白酶的國產(chǎn)膠原酶組和Sigma膠原酶V組的胰島細(xì)胞團(tuán)在小鼠腎被膜下形態(tài)均較完整，活性良好，胰島素分泌旺盛。3討論膠原酶是溶組織梭菌的發(fā)酵產(chǎn)物，基于底物特異性和氨基酸分析，膠原酶的主要成分包括ColG和圖2胰島移植后小鼠的血糖變化結(jié)果3530-2302622181410622520151050血糖值(mmol/L)Sigma膠原酶V組國產(chǎn)膠原酶組移植后時間(d)糖尿病未移植組

混合，結(jié)合中性蛋白酶用于進(jìn)行人胰島的分離等，在胰島分離的數(shù)量和完整度上均取得了很好的結(jié)果[15]。本實(shí)驗(yàn)研究了一種國產(chǎn)膠原酶，并結(jié)合中性蛋白酶，獲得了數(shù)量較多、活性較好的小鼠胰島細(xì)胞團(tuán)，且體內(nèi)移植的降血糖結(jié)果與Sigma膠原酶V的結(jié)果無差異。本研究可為該國產(chǎn)膠原酶的質(zhì)量提升和替代進(jìn)口膠原酶用于后續(xù)大動物胰島分離的研究提供參考。參考文獻(xiàn)：[1]LiX,MengQ,ZhangL,etal.Overcomingimmunobiologicalbarriersagainstporcineisletxenografts:whatshouldbedone?[J].Pancreas,2019,48(3):299-308.圖3腎被膜下胰島HE染色（×100）與免疫組化染色（×100）結(jié)果[2]PepperAR,BruniA,ShapiroAMJ.Clinicalislettransplanta-tion:isthefuturefinallynow?[J].CurrOpinOrganTrans-plant,2018,23(4):428-439.[3]ShapiroAM,PokrywczynskaM,RicordiC.Clinicalpancre-aticislettransplantation[J].NatRevEndocrinol,2017,13(5):268-277.[4]李玥,楊永強(qiáng).胰島分離純化研究進(jìn)展[J].中國修復(fù)重建外科志,2010,24(11):1392-1396.[5]FuHX,QiuKY,JiangX,etal.Isletdistributionindecellular-izedliverbioscaffoldsbyinfusionthroughtheportalvein[J].JBiomaterTissueEng,2017,7(5):348-354.[6]FuHX,WuLL,QiuKY,etal.Constructionandevaluationofislettransplantationunderkidneycapsuleinmouse[J].JBio-materTissueEng,2016,6(3):208-215.[7]葉叢叢,傅紅興,江玲,等.一種快速分離純化小鼠胰島的方法[J].肝膽胰外科雜志,2014,26(5):403-405.[8]LembertN,WescheJ,PetersenP,etal.Arealdensitymeasure-mentisaconvenientmethodforthedeterminationofporcineisletequivalentw

【參考文獻(xiàn)】：
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