本文關(guān)鍵詞：內(nèi)蒙古地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株分子分型研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 對(duì)內(nèi)蒙古自治區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進(jìn)行分子分型研究，了解該地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的基因型構(gòu)成、主要流行株及其相關(guān)傳播流行特征，進(jìn)而為該地區(qū)結(jié)核病防治提供一定的基礎(chǔ)科學(xué)依據(jù)。 方法： 1.于2011年1月至2012年6月收集內(nèi)蒙古自治區(qū)結(jié)核病防治所從臨床診斷為結(jié)核病的病人分離獲得的500株分枝桿菌臨床分離株及其背景資料和標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv（ATCC27294），均由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室保藏并提供本研究使用。 2.采用L-J培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)，收集菌體，提取全基因組DNA用于菌種鑒定和基因分型。 3.用多位點(diǎn)PCR鑒定菌種。 4.分別采用21MIRU-VNTR位點(diǎn)的多位點(diǎn)串聯(lián)重復(fù)序列分析（MLVA）和間隔寡核苷酸分型（Spoligotyping）兩種基因分型方法對(duì)已鑒定為結(jié)核分枝桿菌的臨床分離株進(jìn)行基因分型研究，同時(shí)應(yīng)用BioNumerics5.0軟件對(duì)分型結(jié)果進(jìn)行聚類(lèi)分析，，并將Spoligotyping分型結(jié)果與國(guó)際SpolD4.0數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，而其中的北京家族菌株的遺傳特征則應(yīng)用核轉(zhuǎn)錄因子（nuclear transcription factorsor neuronot，NTF）和大片段多態(tài)性（large sequence polymorphism，LSP）進(jìn)一步分析探討。 5.采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件、卡方檢驗(yàn)（χ2test）分析內(nèi)蒙古地區(qū)北京家族菌株與主要民族、性別、年齡、結(jié)核病類(lèi)型及病例類(lèi)型間的關(guān)系，從而探討該地區(qū)北京家族菌株的流行傳播機(jī)制。P≤0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.共收集500株分枝桿菌分別分離于500例臨床診斷為結(jié)核病患者的痰標(biāo)本。經(jīng)多位點(diǎn)PCR鑒定，482株為結(jié)核分枝桿菌（MTB），用于進(jìn)一步基因分型研究；另外18株為非結(jié)核分枝桿菌（NTM）。 2.采用MLVA方法對(duì)482株結(jié)核分枝桿菌的21個(gè)VNTR位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，及BioNumerics軟件進(jìn)行聚類(lèi)，可分為349個(gè)VNTR基因型，其中279株菌表現(xiàn)為獨(dú)特基因型，203株表現(xiàn)為70簇，分別含有2或2株以上的菌株。成簇率為27.59%。 3.經(jīng)Spoligotyping分型，482株菌呈現(xiàn)出52個(gè)基因型，其中35株菌表現(xiàn)有獨(dú)特基因型，其余447株菌成簇分別為17個(gè)基因型。其北京家族菌株為主要流行株，所占比率達(dá)到86.72%（418/482）。 4. NTF分析北京家族菌株顯示，69.62%（291/418）菌株表現(xiàn)為在NTF區(qū)存在1～2個(gè)IS6110的插入，稱(chēng)之為“現(xiàn)代型”，剩下30.38%（127/418）菌株表現(xiàn)為NTF區(qū)完整，即屬于“古典型”。 5. LSP中RD105的分析結(jié)果與Spoligotyping分型結(jié)果一致，在RD105表現(xiàn)缺失的418株結(jié)核分枝桿菌，在Spoligotyping分型中的35到43間隔區(qū)存在3～9個(gè)雜交，即表現(xiàn)為北京家族。然而，RD181分析表現(xiàn)為6.46%（27/418）的菌株中RD181完整，93.54%（391/418）的菌株中RD181缺失。這27株（21.26%，27/127）RD181完整的北京家族菌株在NTF都表現(xiàn)為“古典型”，但其余100株（78.74%，100/127）“古典型”北京家族菌株表現(xiàn)為RD181缺失。 6. MLVA和Spoligotyping的比較，MLVA分辨率明顯高于Spoligotyping，而Spoligotyping對(duì)北京家族的鑒定有利于MLVA進(jìn)一步對(duì)該家族進(jìn)行株水平的分析。 7.內(nèi)蒙古地區(qū)北京家族菌株與主要民族、性別、年齡、結(jié)核類(lèi)型及病例類(lèi)型間的關(guān)系分析，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為P＞0.05）。 結(jié)論： 1.內(nèi)蒙古地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株存在明顯的基因多態(tài)性，且北京家族為該地區(qū)的主要流行株。 2. RD105與Spoligotyping二者鑒定北京家族菌株的能力一致。北京家族菌株中“現(xiàn)代型”占主要，且RD181的分析顯示其缺失發(fā)生早于NTF區(qū)IS6110的插入。 3.內(nèi)蒙古地區(qū)北京基因型菌株的傳播在主要民族、不同的年齡段、性別、結(jié)核病類(lèi)型及病例類(lèi)型中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此未能證明北京家族菌株在該地區(qū)的流行傳播與上述因素相關(guān)。 4. MLVA和Spoligotyping聯(lián)合應(yīng)用，對(duì)結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行株水平鑒定的能力明顯增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)核分枝桿菌 基因分型 MLVA Spoligotyping 北京家族
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R378.911
【目錄】：

• Abbreviation（縮略詞）4-5
• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-22
• 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 實(shí)驗(yàn)方法14-22
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-45
• 多位點(diǎn) PCR 鑒定結(jié)核分枝桿菌22-23
• 結(jié)核分枝桿菌 MLVA 分析結(jié)果23-39
• 間隔區(qū)寡核苷酸分型分析39-40
• NTF 和 LSP 分析北京家族菌株40-42
• 北京家族菌株與民族、性別、年齡、結(jié)核類(lèi)型及病例類(lèi)型的關(guān)系42-45
• MLVA 分型方法與 Spoligotyping 分型方法之間的比較45
• 討論45-50
• 結(jié)論50-51
• 附錄51-66
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 本研究基金資助項(xiàng)目70-71
• 已發(fā)文章71-72
• 文獻(xiàn)綜述72-86
• 參考文獻(xiàn)80-86
• 致謝86

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本文編號(hào)：289105