本文關(guān)鍵詞：紅景天苷通過抑制ROS-NO通路對MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：帕金森�。≒arkinson’s disease，PD）是一種好發(fā)于中老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，其特征性病理變化是中腦炓質(zhì)致密部(substantia nigra pars compact，SNpc)含黑色素的多巴胺（dopamine，DA）能神經(jīng)元變性缺失，殘存的神經(jīng)元胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)以聚集化的α-突觸核蛋白（α-Synuclein，α-Syn）為主要成分的嗜酸性包涵體，即路易小體（Lewy body，LB），其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，可能與氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙和蛋白質(zhì)的錯誤折疊等有關(guān)。 1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyrid-ine，MPTP）是人工合成毒品的副產(chǎn)物，1-甲基-4苯基吡啶離子（1-methy-4-phenylpyridinium，MPP+）是其活性代謝產(chǎn)物，MPP+可以選擇性抑制線粒體復(fù)合物Ⅰ，誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。MPTP誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠是目前學(xué)術(shù)界廣泛運用并得到公認(rèn)的研究PD的經(jīng)典模型之一。 目前，PD的治療主要為以左旋多巴制劑為主的替代療法，但該方法僅能緩解臨床癥狀，并不能阻止或延緩PD的進(jìn)程，同時長期使用該法也存在療效衰減及運動障礙等副作用。近年來，植物藥的研究在一定程度上引起了一些學(xué)者的關(guān)注和興趣。 紅景天是一種傳統(tǒng)的中草藥，對衰老相關(guān)的疾病具有一定的治療作用。紅景天苷（Salidroside，Sal），又名2，4-羥基苯乙基-β-D-葡萄糖苷，是紅景天的主要活性成分之一。大量體內(nèi)外實驗研究表明，Sal具有抗氧化、抗衰老、抗增殖和抗癌等作用。研究發(fā)現(xiàn)Sal對谷氨酸誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元的損傷具有保護(hù)作用，并對過氧化氫、低血糖等誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞凋亡模型具有抗凋亡作用。我們以前的研究發(fā)現(xiàn)，Sal對MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡有一定的抑制作用，其機(jī)制可能與NO通路有關(guān)。為了進(jìn)一步研究Sal的神經(jīng)保護(hù)作用，本研究選擇MPTP誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠作為PD模型，觀察Sal對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠的影響，體內(nèi)驗證Sal是否通過調(diào)節(jié)ROS-NO通路對MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。 【目的】 1．建立MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠模型。 2．觀察Sal對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠行為學(xué)、形態(tài)學(xué)及生化方面的影響。 3．探討Sal是否通過調(diào)節(jié)ROS-NO通路對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠發(fā)揮神經(jīng) 保護(hù)作用。 【方法】 1.實驗動物的分組與造模：根據(jù)隨機(jī)數(shù)值表將實驗動物（由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供）隨機(jī)分為6組，每組20只。a組：正常組，腹腔注射生理鹽水0.3ml/次，1次/d，連續(xù)14d；b組：模型組，腹腔注射MPTP （購于Sigma，生理鹽水溶）30mg/kg，1次/d，連續(xù)7d，7d后腹腔注射等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)7d；c組和d組為Sal干預(yù)組，腹腔注射MPTP30mg/kg，1h后分別給予Sal（購于北京華邁科生物技術(shù)有限責(zé)任公司，純度98%）15mg/kg或45mg/kg，1次/d，連續(xù)7d，隨后7d停止注射MPTP，只給予腹腔注射Sal15mg/kg或45mg/kg。e組和f組，單純給予Sal (15mg/kg)或(45mg/kg)腹腔注射，1次/d，連續(xù)14d。每次給藥后觀察小鼠的行為學(xué)變化，判斷小鼠造模是否成功。實驗過程中對動物的飼養(yǎng)及取材均遵守第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物管理和保護(hù)的有關(guān)規(guī)定。給藥第二周開始用爬桿實驗和懸掛實驗觀察小鼠行為學(xué)變化。 2.行為學(xué)檢測完畢后第二天，每組隨機(jī)選取6只小鼠灌注取腦制作冰凍切片，采用免疫熒光組織化學(xué)方法觀察Sal對MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠SNpc的TH陽性細(xì)胞和多巴胺轉(zhuǎn)運體(Dopamine transporter，DAT)陽性神經(jīng)元數(shù)目的影響。 3.全波段自動酶標(biāo)儀檢測ROS和NO水平。 4. Elisa試劑盒檢測3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine，3-NT)蛋白含量。 5. Western Blot檢測iNOS和nNOS蛋白的表達(dá)。 6.全自動酶標(biāo)儀檢測MDA的水平和GSH、GSH-Px、SOD的活性。 7.高效液相色譜法檢測紋狀體中DA、DOPAC和5-HT的含量。 【結(jié)果】 1.行為學(xué)檢測結(jié)果：在爬桿實驗中，MPTP模型組小鼠運動協(xié)調(diào)能力明顯下降，與空白對照組組小鼠相比有顯著性差異，表現(xiàn)為爬桿時間明顯增加（P 0.01）。在給予不同劑量的Sal后，小鼠的運動協(xié)調(diào)能力明顯改善爬桿時間縮短，且呈劑量依賴性（P 0.05，P 0.01）。懸掛實驗中，模型組小鼠肢體協(xié)調(diào)能力與空白對照組相比明顯下降(P0.01)，表現(xiàn)為其后肢均不能抓住細(xì)線，容易掉下。給予不同劑量的Sal (15，45mg/kg)干預(yù)后，懸掛能力不同程度增強(qiáng)(P0.05，P0.01)。 2.免疫熒光染色結(jié)果：在光鏡下可見模型組小鼠黑質(zhì)內(nèi)TH陽性細(xì)胞的數(shù)量明顯較空白對照組減少，給予不同濃度Sal干預(yù)后，，TH陽性細(xì)胞數(shù)目的減少得到緩解。統(tǒng)計學(xué)結(jié)果表明：與空白對照組（71.3±2.11）相比，模型組小鼠TH陽性細(xì)胞數(shù)目明顯減少到（22.1±2.74）(P0.01)。與模型組相比，低劑量(15mg/kg)的Sal干預(yù)組為（37.7±1.87）（P 0.05），高劑量Sal (45mg/kg)的干預(yù)組TH陽性細(xì)胞為（62.1±1.53）(P0.01)。單純Sal組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 在光鏡下可見模型組小鼠黑質(zhì)內(nèi)DAT陽性神經(jīng)元的數(shù)量明顯較空白對照組減少，給予不同濃度Sal干預(yù)后，DAT陽性神經(jīng)元數(shù)目的減少得到緩解。對以上結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析表明，與空白對照組（64.4±1.76）相比，模型組DAT陽性神經(jīng)元減少為（21.5±2.11）（P 0.01）。與模型組相比，低劑量（15mg/kg）Sal干預(yù)組為（37.6±2.13）（P 0.05），高劑量（45mg/kg）Sal干預(yù)組為（59.3±1.74）（P 0.01）。單純Sal組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.全波段自動熒光酶標(biāo)儀檢測ROS和NO結(jié)果：與空白對照組內(nèi)ROS水平(107.4±2.1)%相比，模型組內(nèi)ROS水平增加到(269.3±2.7)%(P0.01)。不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，與模型組相比， ROS水平明顯下降，其值分別為(224.6±3.3)%(P0.05)和(154.7±3.4)%(P0.01)。單獨Sal組內(nèi)ROS水平分別為(105.3±2.0)%和（103.2±3.1）%。 與空白對照組內(nèi)NO水平(99.3±2.9)%相比，模型組內(nèi)NO水平增加到(179.6±3.3)%(P0.01)。不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，NO水平分別下降為(154.1±3.7)%(P0.05)和(133.1±4.1)%(P0.01)。單獨Sal處理組NO水平為(97.8±3.6)%和（95.4±2.9）%。 4. Elisa試劑盒檢測結(jié)果：空白對照組內(nèi)3-NT含量為(0.7±1.1)%，模型組內(nèi)3-NT含量增加到(3.1±1.7)%(P0.01)。不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，3-NT含量則分別下降為(2.7±1.6)%(P0.05)和(1.5±2.4)%(P0.01)。單獨Sal組內(nèi)3-NT含量為（0.7±0.3）%和(0.6±0.4)%。 5. Western Blot方法檢測結(jié)果：Sal（15和45mg/kg）干預(yù)組和單純Sal組iNOS和nNOS表達(dá)水平較模型組依次減弱。 6.全波段自動酶標(biāo)儀檢測MDA水平：與空白對照組(9.7±2.1)%相比，模型組MDA含量明顯升高(21.3±2.7)%(P0.01)，不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，MDA含量劑量依賴性降低(17.1±2.2)%(P0.05)和(13.6±2.8)%(P0.01)，單純Sal組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 GSH含量和GSH-Px、SOD活性檢測結(jié)果：與空白對照組相比，GSH含量和GSH-Px、SOD活性明顯降低(P0.01)，不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，GSH含量和GSH-Px、SOD活性劑量依賴性升高(P0.05，P0.01)，單純Sal組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 7.高效液相色譜結(jié)果：模型組內(nèi)DA、DOPAC和5-HT較空白對照組相比，含量明顯下降(P0.01)，在給予不同劑量Sal (15和45mg/kg)干預(yù)后，含量劑量依賴性上升(P0.05，P0.01)。單純Sal組與空白對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。 【結(jié)論】 1. Sal對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠具有神經(jīng)保護(hù)作用。 2. Sal可能通過抑制ROS-NO通路發(fā)揮對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 MPTP 紅景天苷 神經(jīng)保護(hù) 小鼠 ROS NO 3-NT nNOS iNOS DA DOPAC 5-HT
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-14
• 前言14-16
• 文獻(xiàn)回顧16-33
• 實驗一 紅景天苷對 MPTP 誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用33-39
• 1 材料33-34
• 2 方法34-36
• 3 結(jié)果36-37
• 4 討論37-39
• 實驗二 紅景天苷對 MPTP 誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的探討39-53
• 1 材料39-40
• 2 方法40-50
• 3 結(jié)果50-51
• 4 討論51-53
• 小結(jié)53-54
• 參考文獻(xiàn)54-83
• 附錄83-89

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王文武;何建成;;帕金森病的中醫(yī)文獻(xiàn)研究[J];新中醫(yī);2008年01期

  本文關(guān)鍵詞：紅景天苷通過抑制ROS-NO通路對MPTP誘導(dǎo)的帕金森病小鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：288863