本文關(guān)鍵詞：IL-6對滋養(yǎng)細胞侵襲力的影響及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人類妊娠的成功建立由胚胎著床、胎盤形成及發(fā)育等多因素參與調(diào)控。滋養(yǎng)細胞是構(gòu)成胎盤組織的主要成分，在胚胎植入、胎盤形成和成功妊娠過程中起重要作用。滋養(yǎng)細胞來自妊娠初期的胚胎外胚層，隨著妊娠的進行形成絨毛滋養(yǎng)層和絨毛外滋養(yǎng)層（EVTs）。絨毛滋養(yǎng)層細胞可形成絨毛膜絨毛，其作用為運輸營養(yǎng)物質(zhì)給胎兒；而絨毛外滋養(yǎng)細胞侵入蛻膜組織、侵入血管內(nèi)皮、重建螺旋動脈，引起螺旋動脈收縮性的喪失，使足夠的母體血流進入絨毛間，其作用為維持胎盤正常的生理功能。滋養(yǎng)細胞與腫瘤細胞的侵襲轉(zhuǎn)移具有相似性，不同的是滋養(yǎng)細胞的侵襲性受到精細調(diào)控，具有嚴格的時空限制。研究表明，胎盤形成過程中滋養(yǎng)細胞侵襲功能障礙會引起各種產(chǎn)科并發(fā)癥包括：流產(chǎn)、胎兒生長受限、子癇前期等。 白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）具有多種生物學(xué)作用，其表達失調(diào)與諸多產(chǎn)科疾病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，并且對腫瘤細胞的侵襲性也有重要的調(diào)節(jié)作用。IL-6與白細胞介素-11（interleukin-11，IL-11）、白血病抑制因子（leukemiainhibitory factor，LIF）均屬于IL-6超家族成員。IL-11、LIF被證實可以通過激活STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的侵襲功能。然而，IL-6對滋養(yǎng)細胞侵襲性的調(diào)節(jié)作用一直沒有定論。眾所周知，細胞侵襲功能的實質(zhì)是蛋白酶對組織的水解作用�；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）是一類鋅依賴性蛋白水解酶，經(jīng)激活可降解細胞外基質(zhì)的多數(shù)成分。在妊娠過程中，子宮基底膜是阻礙細胞侵襲的主要結(jié)構(gòu)屏障，而MMP-2和MMP-9能分解基底膜的主要成分（Ⅳ型膠原），因此被認為是胎盤植入子宮過程中的關(guān)鍵酶，可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的侵襲、遷移功能。然而目前調(diào)控滋養(yǎng)細胞侵襲力的具體機制尚未被完全闡明，其中涉及復(fù)雜的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，如JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路等。最近研究顯示，在乳腺癌細胞和黑色素瘤細胞的研究中，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子-3（signal transducer and activator of transcription3，STAT3）可能作為信號通路的上游因子，通過調(diào)節(jié)細胞MMP-2的表達來參與調(diào)控其侵襲功能。 人絨毛膜癌滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞具有與滋養(yǎng)細胞相似的分子結(jié)構(gòu)，可作為研究滋養(yǎng)細胞侵襲功能的模型。本文在研究IL-6對滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞侵襲力的影響及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的基礎(chǔ)上，探討IL-6作用于滋養(yǎng)細胞的分子機制，為明確部分妊娠期相關(guān)疾病的發(fā)病機制奠定基礎(chǔ)，對疾病預(yù)防、診斷、治療進行全方位指導(dǎo)，保護母嬰健康。 目的 本研究通過分析人絨毛膜癌滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞在IL-6和SD-1008處理前后STAT3、p-STAT3、MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白表達的差異，利用transwell和MTT實驗分析不同濃度的IL-6對滋養(yǎng)細胞侵襲力的調(diào)節(jié)作用，，初步探討IL-6是否通過STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控MMP-2、MMP-9的表達或者激活，而影響滋養(yǎng)細胞的侵襲功能。 材料和方法 1研究對象 從北京鼎國昌盛生物科技購入JEG-3細胞系，使用高糖完全培養(yǎng)基（DMEM-H、10%FBS、100U/ml青霉素、100U/ml鏈霉素）在37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，選擇對數(shù)生長期的JEG-3細胞進行干擾試驗。 2方法 利用含10%FBS、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的DMEM-H完全培養(yǎng)液，將JEG-3細胞懸浮后放進37°C、5%CO2飽和濕度的恒溫培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。通過分析細胞的生長曲線，將對數(shù)生長期細胞按照1.5×106/孔的濃度，接種于6孔細胞培養(yǎng)板，放置于培養(yǎng)箱孵育24h。然后，按照不同凍存批次將JEG-3細胞進行配對分組：對照組、STAT3磷酸化抑制劑（5μM SD-1008）處理組和IL-6處理組，采用transwell實驗和MTT實驗檢測細胞的侵襲力、增殖力的變化。同時提取相應(yīng)細胞的mRNA和蛋白，采用免疫印跡實驗（Western Blot）和實時熒光定量PCR實驗（Real time-PCR）檢測細胞中磷酸化STAT3（p-STAT3）、MMP-2、MMP-9表達水平的變化。按照配對設(shè)計原則，分析IL-6對JEG-3細胞侵襲功能的調(diào)控作用并探索其分子機制。 3統(tǒng)計學(xué)處理 本研究中所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0版本軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析處理，數(shù)據(jù)均以x s的方式表示。當(dāng)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布時采用配對設(shè)計定量資料的t檢驗，不符合正態(tài)分布時采用配對設(shè)計定量資料的符號秩和檢驗，以α=0.05為檢驗水準。 結(jié)果 1IL-6對滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞侵襲、增殖行為的影響 Transwell實驗結(jié)果顯示：經(jīng)10ng/ml IL-6孵育36h的JEG-3細胞的侵襲數(shù)量（72.41±17.35）高于對照組（49.17±13.15）（P0.05），并采用10ng/ml作為研究IL-6作用機制的后續(xù)實驗的最佳濃度。采用MTT實驗對JEG-3細胞的增殖變化進行檢測，結(jié)果顯示：IL-6（10ng/ml）處理組JEG-3細胞與對照組相比，無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 2p-STAT3抑制劑對滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞MMPs表達的影響 本研究采用STAT3磷酸化抑制劑（SD-1008）抑制JEG-3細胞中STAT3磷酸化，探索JAK/STAT3信號通路對MMPs表達的影響。與對照組（0.17±0.02）相比，經(jīng)SD-1008處理后的JEG-3細胞中pSTAT3的表達水平（0.06±0.02）明顯降低（P0.05），而STAT3蛋白的表達量無明顯差異（P0.05）。SD-1008處理組JEG-3細胞MMP-2mRNA水平（0.42±0.24，P0.05）低于對照組（1.03±0.12）；同樣，SD-1008處理組JEG-3細胞中MMP-9mRNA水平（0.48±0.21，P0.05）也明顯低于對照組（1.05±0.09）。在免疫印跡實驗中，SD-1008處理組中MMP-2和MMP-9蛋白水平與mRNA一致，均明顯低于對照組（P0.05）。 3IL-6對滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞中p-STAT3表達水平的影響 基于p-STAT3抑制劑處理組JEG-3細胞的MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白水平明顯降低，本研究在不同時間點檢測了IL-6（10ng/ml）對JEG-3細胞（預(yù)先在無血清培養(yǎng)基中饑餓培養(yǎng)6h）中STAT3磷酸化水平的影響。結(jié)果顯示：IL-6處理組JEG-3細胞中STAT3磷酸化水平與對照組之間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 4IL-6對滋養(yǎng)細胞系JEG-3細胞中MMPs表達的影響 Real-time PCR實驗顯示：與對照組相比，經(jīng)IL-6（10ng/ml）孵育處理24h的JEG-3細胞中MMP-2和MMP-9mRNA的表達水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。在免疫印跡實驗中，采用的兔抗人MMP-2單克隆抗體可特異性地檢測MMP-2的活性形式（66kDa）和酶原前體形式（72kDa），采用的小鼠抗人MMP-9多克隆抗體特異性地檢測MMP-9（92kDa）的酶原形式和活性形式（84kDa）。結(jié)果顯示：與對照組細胞相比，JEG-3經(jīng)IL-6（10ng/ml）孵育處理24h后，proMMP-2、proMMP-9的表達水平均無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）；但與對照組（0.5±0.11）相比，IL-6處理組細胞中MMP-2的活化形式水平（0.78±0.18）明顯增加（P0.05），因MMP-9活化形式的灰度值過低而無法對其表達進行分析。 結(jié)論 STAT3作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的上游因子參與調(diào)控滋養(yǎng)細胞中MMP2、MMP-9的表達水平，但是IL-6并未通過此通路調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細胞的侵襲力，而是可能通過刺激MMP-2的活化增強滋養(yǎng)細胞的侵襲功能。
【關(guān)鍵詞】：滋養(yǎng)細胞 侵襲力 IL-6 JEG-3 MMP
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-15
• 中英文縮略詞對照表15-16
• 1 引言16-18
• 2 材料和方法18-32
• 2.1 實驗材料18-22
• 2.2 實驗方法22-31
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)分析方法31-32
• 3 結(jié)果32-46
• 3.1 IL-6 對滋養(yǎng)細胞系 JEG-3 細胞侵襲、增殖行為的影響32-35
• 3.2 SD-1008 對滋養(yǎng)細胞系 JEG-3 細胞中 MMPs 表達的影響35-41
• 3.3 IL-6 對滋養(yǎng)細胞系 JEG-3 細胞中 p-STAT3 表達水平的影響41-42
• 3.4 IL-6 對滋養(yǎng)細胞系 JEG-3 細胞中 MMPs 表達水平的影響42-46
• 4 討論46-50
• 4.1 滋養(yǎng)細胞中 STAT3 信號通路與 MMPs 的相關(guān)性46-47
• 4.2 IL-6 對滋養(yǎng)細胞侵襲力的影響47-48
• 4.3 IL-6 調(diào)控滋養(yǎng)細胞侵襲功能的分子機制48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-54
• 綜述 滋養(yǎng)細胞侵襲性調(diào)控因素的研究現(xiàn)狀54-69
• 參考文獻64-69
• 個人簡歷69-70
• 致謝70

【共引文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：IL-6對滋養(yǎng)細胞侵襲力的影響及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：288761