目的:構(gòu)建能穩(wěn)定表達膜錨定Gaussia熒光素酶(GLuc)的載體,以實現(xiàn)細胞自發(fā)光成像。方法:采用人源表皮生長因子受體(EGFR)、巨噬細胞集落刺激因子受體(MCSFR)、白細胞介素-4受體α鏈(IL4Rα)信號肽將GLuc的信號肽替換掉,并在GLuc后分別加上EGFR、MCSFR及IL4Rα的跨膜結(jié)構(gòu)域,構(gòu)建表達膜錨定的GLuc的載體,用慢病毒感染的方法將其導入永生化的小鼠外周血來源巨噬細胞(iBloodMC),通過在細胞和培養(yǎng)上清中加入GLuc底物檢測發(fā)光,從而檢測GLuc的表達。結(jié)果:iBloodMCGLuc-EGFR和iBloodMCGLuc-IL4Rα均能穩(wěn)定表達熒光素酶,且iBloodMCGLuc-EGFR的GLuc表達量較高,EGFR將GLuc錨定在膜上效果較好。結(jié)論:表達膜錨定GLuc的載體構(gòu)建成功,將其導入細胞,加入底物可實現(xiàn)細胞自發(fā)光成像。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 儀器與試劑
    1.2 表達膜錨定熒光素酶慢病毒載體構(gòu)建
    1.3 表達膜錨定熒光素酶的慢病毒包裝
    1.4 永生化外周血來源巨噬細胞培養(yǎng)及感染
    1.5 細胞體外成像檢測
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒感染永生化小鼠外周血來源巨噬細胞結(jié)果
    2.2 發(fā)光成像結(jié)果
3 結(jié)論

【參考文獻】

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1 樸春梅;邱淑蘭;劉颯;王綠婭;杜杰;;小動物活體成像生物發(fā)光穩(wěn)定細胞株的構(gòu)建[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2014年06期

2 董磊;劉娟;馬紅雨;全首禎;朱美財;;熒光素酶光學成像技術研究進展[J];國際生物醫(yī)學工程雜志;2012年06期

【共引文獻】

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1 馬友才;劉燕;樸春梅;王綠婭;杜杰;;利用小動物活體成像技術檢測心肌梗死后炎癥的進程[J];心肺血管病雜志;2015年06期

【二級參考文獻】

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1 李珂;趙光;何偉華;高春芳;;活體動物成像光學技術的應用研究[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學院學報;2011年06期

2 劉靜;張國君;;光學分子影像技術及其在藥物研發(fā)領域的應用[J];生物物理學報;2011年08期

3 黃偉;呂明;李保衛(wèi);王玉麗;邵榮光;高鐘鎬;;大鼠腦膠質(zhì)瘤熒光素酶動物模型建模細胞株C6-Luc的構(gòu)建[J];解放軍醫(yī)學雜志;2011年01期

4 李艷;張海燕;王喆;張必良;;通過活體動物光學成像系統(tǒng)建立乳腺癌動物模型[J];腫瘤;2009年01期

5 黃新新;何苗;施漢昌;蔡強;;用于環(huán)境污染物遺傳毒性評價的重組發(fā)光細菌載體的構(gòu)建[J];環(huán)境科學;2008年11期

6 蔣謙;陳環(huán)球;周曉明;何曉松;戴美紅;俞軍;;多西紫杉醇對人胃癌細胞BGC-823 hTERT啟動子轉(zhuǎn)錄活性及其調(diào)控基因c-myc表達的研究[J];中華腫瘤防治雜志;2007年20期

7 姚文娟;刁振宇;鄧小昭;孔晶;周宗安;高健;張云;;以報告基因熒光素酶研究HPRE功能元件與IFN-α應答的關系[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年05期

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1 陸琤;張硌;張鵬;;構(gòu)建表達膜錨定熒光素酶的載體實現(xiàn)細胞自發(fā)光成像[J];中國醫(yī)學裝備;2019年10期

2 楊平;戴五星;劉朔捷;郭萍;馬彥彬;唐成武;程繼忠;;血吸蟲Sj26膜錨定表達DNA疫苗的構(gòu)建、表達及其免疫原性[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2007年02期

3 唐建蓉;抗JEV質(zhì)粒DNA免疫:膜錨定和分泌性包膜蛋白的免疫原性[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;2003年02期

4 王爽;許堅吉;劉曉霓;陳德喜;;熒光素酶生物發(fā)光報告體系的優(yōu)化及在肝癌荷瘤裸鼠模型中的應用[J];實用肝臟病雜志;2019年04期

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1 王鑫;分枝桿菌同源膜錨定表達載體的構(gòu)建與細胞定位分析[D];蘇州大學;2011年

2 鄒鎮(zhèn);日本血吸蟲23KD膜蛋白的原核表達與純化及雙價膜錨定型和分泌型表達疫苗抗感染效果的比較研究[D];華中科技大學;2009年

3 楊平;人結(jié)核桿菌Hsp65和Ag85B雙價膜錨定表達DNA疫苗pIRES-MTHsp65-Ag85B的構(gòu)建和日本血吸蟲pIRES-Sj26膜錨定表達疫苗免疫原性的研究[D];華中科技大學;2007年

4 郭萍;血吸蟲Sj14FABP和Sj26GST雙價膜錨定表達DNA疫苗pIRES-Sj26-Sj14的構(gòu)建和表達[D];華中科技大學;2006年

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