目的:研究內(nèi)源性IL-10對炎癥細胞因子產(chǎn)生的影響及其機制。方法:沙眼衣原體感染人外周血單個核細胞,ELISA檢測細胞上清IL-10分泌量;抗人IL-10中和抗體中和內(nèi)源性IL-10的作用,ELISA檢測細胞上清IL-6和TNF-α分泌量,Western blot檢測細胞STAT3活性變化;化學抑制劑Ruxolitinib抑制STAT3蛋白活性,ELISA檢測細胞上清IL-6和TNF-α分泌量。結(jié)果:沙眼衣原體感染的人外周血單個核細胞IL-10產(chǎn)生量增多;加入抗人IL-10中和抗體時,IL-6和TNF-α產(chǎn)生量明顯增多且STAT3蛋白活性明顯降低;當STAT3蛋白活性被抑制時,IL-6和TNF-α產(chǎn)生量明顯增多。結(jié)論:沙眼衣原體可能通過誘導IL-10的產(chǎn)生活化STAT3蛋白從而抑制炎癥因子的產(chǎn)生。
【部分圖文】：

體感染下，IL-10分泌增加，且隨沙眼衣原體感染滴度的增加，產(chǎn)生IL-10的量也逐漸增多。圖1B所示，3MOI衣原體感染后8hIL-10的產(chǎn)生量明顯增加，且隨著感染時間的延長，產(chǎn)生IL-10的量也逐漸增多，在48h達到頂峰，然后下降。不同滴度的衣原體感染組和3MOI感染8h后各時間點的IL-10產(chǎn)生量與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(t=8.342、9.631，均P＜0.05)。2.2內(nèi)源性IL-10對IL-6和TNF-α分泌影響如圖2所示，在沙眼衣原體的作用下，外周血單個核細圖1沙眼衣原體誘導外周血單個核細胞IL-10分泌Fig．1ChlamydiatrachomatisinducesIL-10secretioninperipheralbloodmononuclearcellsNote:*.P＜0.05.圖2抗IL-10抗體上調(diào)沙眼衣原體感染細胞IL-6和TNF-α分泌Fig．2AntiIL-10antibodyincreasesIL-6andTNF-αse-cretioninChlamydiatrachomatisinfectedcellsNote:*.P＜0.05.·8812·中國免疫學雜志2019年第35卷

0產(chǎn)生如圖1A所示，外周血單個核細胞在沙眼衣原體感染下，IL-10分泌增加，且隨沙眼衣原體感染滴度的增加，產(chǎn)生IL-10的量也逐漸增多。圖1B所示，3MOI衣原體感染后8hIL-10的產(chǎn)生量明顯增加，且隨著感染時間的延長，產(chǎn)生IL-10的量也逐漸增多，在48h達到頂峰，然后下降。不同滴度的衣原體感染組和3MOI感染8h后各時間點的IL-10產(chǎn)生量與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(t=8.342、9.631，均P＜0.05)。2.2內(nèi)源性IL-10對IL-6和TNF-α分泌影響如圖2所示，在沙眼衣原體的作用下，外周血單個核細圖1沙眼衣原體誘導外周血單個核細胞IL-10分泌Fig．1ChlamydiatrachomatisinducesIL-10secretioninperipheralbloodmononuclearcellsNote:*.P＜0.05.圖2抗IL-10抗體上調(diào)沙眼衣原體感染細胞IL-6和TNF-α分泌Fig．2AntiIL-10antibodyincreasesIL-6andTNF-αse-cretioninChlamydiatrachomatisinfectedcellsNote:*.P＜0.05.·8812·中國免疫學雜志2019年第35卷

圖3抗IL-10抗體抑制沙眼衣原體感染細胞STAT3蛋白磷酸化Fig．3AntiIL-10antibodyinhibitsSTAT3proteinphos-phorylationinChlamydiatrachomatisinfect-edcells圖4抑制STAT3蛋白磷酸化導致IL-6和TNF-α分泌增多Fig．4InhibitionofphosphorylatedSTAT3expressionin-creasesproductionofIL-6andTNF-αNote:*.P＜0.05.胞IL-6和TNF-α產(chǎn)生量均增多，但當加入抗人IL-10抗體時，細胞IL-6和TNF-α產(chǎn)生量明顯增多，與沙眼衣原體感染但未加抗人IL-10抗體組比較，IL-6和TNF-α的表達差異均有統(tǒng)計學意義(t=10.326、11.231，均P＜0.05)。2.3內(nèi)源性IL-10對STAT3蛋白活性影響如圖3A所示，外周血單個核細胞在沙眼衣原體感染下，STAT3蛋白發(fā)生磷酸化，且隨沙眼衣原體感染滴度的增加，磷酸化的STAT3蛋白也逐漸增多，呈劑量依賴性。圖3B所示，當感染細胞中加入抗人IL-10抗體時，磷酸化的STAT3蛋白明顯減少。2.4STAT3蛋白對IL-6和TNF-α產(chǎn)生影響如圖4A所示，1μmol/L化學抑制劑Ｒuxolitinib能明顯抑制沙眼衣原體感染細胞STAT3蛋白的磷酸化。在1μmol/L化學抑制劑Ｒuxolitinib作用下，沙眼衣原體感染的外周血單個核細胞產(chǎn)生的IL-6和TNF-α明顯增多，與沙眼衣原體感染的未加抑制劑處理的細胞組相比，IL-6和TNF-α的表達差異均有統(tǒng)計學意義(t=12.301，P＜0.05，圖4B)。3討論抗炎癥細胞因子IL-10在病原體入侵時對機體的免疫應答起到重要的調(diào)節(jié)作用［12］。以往的研究證實衣原體能誘導單核-巨噬細胞、樹突狀細胞、成纖維細胞等產(chǎn)生IL-10
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