目的:探討Nucleostemin(NS)在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化中的機(jī)制及作用。 方法:取材選用的是4～6周齡雄性S-D大鼠的雙側(cè)脛骨和股骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞,并進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)至第3代設(shè)置對(duì)照組,分別將混合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞用普通培養(yǎng)液和礦化培養(yǎng)液培養(yǎng)。依次通過(guò)相差倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)、MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶(AKP)和茜素紅鈣染色共同分析細(xì)胞的成骨活性。免疫組化SABC法及免疫熒光法檢測(cè)NS在細(xì)胞中的表達(dá)情況,在普通培養(yǎng)基和成骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下比較NS分別的表達(dá)情況。 結(jié)果:在礦化培養(yǎng)基誘導(dǎo)下大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞其NS的表達(dá)較普通培養(yǎng)基培養(yǎng)下的表達(dá)明顯減弱,且呈時(shí)間依賴性衰減。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在礦化液作用下可誘導(dǎo)為團(tuán)狀分布的成骨細(xì)胞。成骨細(xì)胞的NS表達(dá)則為陰性。MTT檢測(cè)顯示礦化液培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)潛伏期長(zhǎng),對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期較對(duì)照組延長(zhǎng)。 結(jié)論:①此方法可以獲得大量骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。②骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)礦化誘導(dǎo)液作用可分化為成骨細(xì)胞。③NS作為核干細(xì)胞因子基因調(diào)控片段,其蛋白表到量在干細(xì)胞中相當(dāng)豐富。當(dāng)細(xì)胞定向分化后,其表達(dá)明顯減少。④因此,NS基因直接參與細(xì)胞增殖調(diào)控,很可能作為大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是否具有潛在分化能力的標(biāo)志性因子。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

feeder cells for tendon fibroblasts through soluble factors.[J].Tissue engineering. 2007Feb; 13(2): 333-41.實(shí)驗(yàn)圖片

大鼠BMSCs分別在誘導(dǎo)與對(duì)照組生長(zhǎng)曲線比較

14圖 3 E、F 圖分別顯示三代 BMSCs 誘導(dǎo)前、后 nucleostemin 表達(dá)數(shù)目的變化。后者較前者表達(dá)減少（X100）；G、H 圖均顯示 nucleostemin 表達(dá)位置位于細(xì)胞核中（X100
【參考文獻(xiàn)】

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1 王洪;馬亮;楊述華;邵增務(wù);孟春慶;段德宇;李艷軍;;Effect of RGD-modified Silk Material on the Adhesion and Proliferation of Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2009年01期

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本文編號(hào)：2869411