背景： 細(xì)胞的生存和增殖受到許多不同信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié),以適應(yīng)微環(huán)境和細(xì)胞外刺激的影響。這些通路的變更會導(dǎo)致信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的不平衡,引起細(xì)胞增殖失控。谷氨酸信號通道是近年發(fā)現(xiàn)的又一可能與腫瘤發(fā)生相關(guān)的信號通路。谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)一種重要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),它與相應(yīng)受體分子相互作用,通過細(xì)胞膜對陽離子通透性的改變或與A蛋白和第二信使系統(tǒng)相偶聯(lián),從而引起一系列復(fù)雜的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)。谷氨酸信號系統(tǒng)最初被認(rèn)為是神經(jīng)系統(tǒng)特有的信號系統(tǒng)。而目前已證實該信號系統(tǒng)已存在于非神經(jīng)系統(tǒng)諸如：骨骼,睪丸,胰腺、肺臟,心臟以及皮膚組織中。同時有研究表明該信號系統(tǒng)與神經(jīng)系統(tǒng)及非神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤發(fā)生均密切相關(guān)。 谷氨酸受體分為兩大類,一類是離子型谷氨酸受體,該類受體屬于配體門控離子通道,通道的啟閉受谷氨酸調(diào)控。其中NADAR是具有強烈的電壓依賴性和高Ca2+滲透性的一種亞型。另一類是代謝型谷氨酸受體,該類受體是一類G蛋白偶聯(lián)受體,其中mGluRl可激活肌糖磷酸鹽代謝和細(xì)胞內(nèi)鈣的轉(zhuǎn)運。惡黑惡性度高,早期即可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移及血行轉(zhuǎn)移,患者存活時間短、年發(fā)病率有增無減。對于惡黑治療的探討一直學(xué)術(shù)界研究的重點。已有學(xué)者進行了谷氨酸信號通路在惡黑中作用的研究。2009年有研究發(fā)現(xiàn),表皮角質(zhì)形成細(xì)胞可分泌L-谷氨酸；并且KCs具有谷氨酸受體NMDAR的表達,谷氨酸信號通路可能通過影響其細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度而影響角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化。現(xiàn)已證實表皮內(nèi)的黑素細(xì)胞內(nèi)亦有NMDAR,AMPAR等多種谷氨酸受體表達；并發(fā)現(xiàn)離子型谷氨酸受體AMPA抑制劑可下調(diào)黑素細(xì)胞內(nèi)MITF基因的表達。谷氨酸受體影響良、惡性黑素細(xì)胞的形態(tài)變化,這與肌動蛋白和微管蛋白微絲紊亂有關(guān)。惡黑及色素性疾病(如白癜風(fēng))中黑素細(xì)胞的功能是由表皮失去了某些未知的機制,可能與谷氨酸受體有關(guān)。有必要探討谷氨酸受體在人良,惡性黑素細(xì)胞中的作用,及谷氨酸受體激動劑和拮抗劑對良,惡性黑素細(xì)胞的形態(tài)和生長的影響。 目的：探討谷氨酸信號通路在良、惡性黑素細(xì)胞中的作用機制 方法： 1.培養(yǎng)人胚腎細(xì)胞系HEK293細(xì)胞、人類侵襲性惡黑細(xì)胞WM451 LU細(xì)胞；在HEK293細(xì)胞中擴增重組腺病毒-微管相關(guān)蛋白2a(adenovirus-mediated MAP2a,Ad-MAP2a). 2.微管相關(guān)蛋白2a(Microtubule-associated protein 2a,MAP2a).離子型谷氨酸受體中的甲基-D-天冬氨酸受體2A(N-methyl-D-aspartate receptors 2A,NMDAR2A).代謝型谷氨酸受體1(metabotropic glutamate receptorl,mGluRl)相關(guān)研究,觀察轉(zhuǎn)染Ad-MAP2a.NMDAR非競爭性拮抗劑MK-801以及選擇性的非競爭性mGluR1拮抗劑CPCCOEt分別作用下,通過體外遷移,侵襲實驗,研究其在人類侵襲性惡黑細(xì)胞瘤WM451 LU細(xì)胞中的作用。 3.觀察轉(zhuǎn)染Ad-MAP2a.NMDAR非競爭性拮抗劑MK-801以及選擇性的非競爭性mGluRl拮抗劑CPCCOEt分別作用下,通過體內(nèi)裸鼠實驗研究人類侵襲性惡黑細(xì)胞WM451 LU腫瘤的變化。 4.培養(yǎng)人原代黑素細(xì)胞。多巴染色及透射電鏡鑒定黑素細(xì)胞；Western Blot方法測定人原代黑素細(xì)胞內(nèi)NMDAR2A的表達。掃描電鏡觀察NMDAR非競爭性拮抗劑MK-801,激動劑N-Methyl-D-aspartic acid (NMDA),Quisqualate(Q-LA)作用下黑素細(xì)胞變化。 結(jié)果.： 1.體外細(xì)胞遷移,侵襲實驗發(fā)現(xiàn)MK801,CPCCOEt均可抑制人類侵襲性惡黑細(xì)胞系WM451LU細(xì)胞的遷移,侵襲,且MK801,CPCCOEt分別與MAP2a有協(xié)同抑制遷移,侵襲作用。 2.Western Blot實驗發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染Ad-MAP2a的人類侵襲性惡黑細(xì)胞系WM451LU細(xì)胞的NMDAR2A表達降低。 3.體內(nèi)裸鼠惡黑動物模型發(fā)現(xiàn)MK801,CPCCOEt,Ad-MAP2a均可抑制人類侵襲性惡黑細(xì)胞系WM451 LU細(xì)胞瘤的增殖。 4.透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn),體內(nèi)裸鼠惡黑動物模型中,MK801,CPCCOEt,Ad-MAP2a均可使人類侵襲性惡黑細(xì)胞系WM451 LU細(xì)胞瘤細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。 5.Western Blot實驗發(fā)現(xiàn)人原代黑素細(xì)胞內(nèi)有NMDAR2A蛋白的表達。 6.掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)NMDAR2A激動劑NMDA及Q-LA,NMDAR2A拮抗劑MK-801作用下可使黑素細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化。MCs在NMDAR2A激動劑：NMDA及Q-LA作用后細(xì)胞樹突的末端明顯變寬,二、三級樹突增加；拮抗劑MK801作用后細(xì)胞樹突末端明顯變窄,二、三級樹突減少。 結(jié)論： 1.在良、惡性黑素細(xì)胞內(nèi)均存在谷氨酸信號通路。 2.體外阻滯惡性黑素細(xì)胞內(nèi)的谷氨酸信號通路可抑制惡性黑素瘤的增殖,遷移,侵襲。 3.體內(nèi)阻滯惡性黑素細(xì)胞內(nèi)的谷氨酸信號通路可抑制惡性黑素瘤的增值 4.阻滯或激動谷氨酸受體NMDAR可影響黑素細(xì)胞樹突的形態(tài)及長度。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R329
【文章目錄】：
一、摘要
    （一） 中文摘要
    （二） 英文摘要
二、文獻綜述
    （一） 綜述
    （二） 參考文獻
三、正文
    第一部分
        （一） 前言
        （二） 材料和方法
        （三） 結(jié)果
        （四） 討論
        （六） 參考文獻
    第二部分
        （一） 前言
        （二） 材料和方法
        （三） 結(jié)果
        （四） 討論
        （五） 參考文獻
四、致謝

【共引文獻】

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1 張芳芳;車雅敏;傅志宜;;Filaggrin和Caspase-14在皮膚屏障中的作用[J];皮膚性病診療學(xué)雜志;2012年02期

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1 高麗麗;谷氨酸信號通路在表皮中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2011年

2 祁瑞;大鼠蒼白球多巴胺D_1受體的電生理學(xué)和行為學(xué)研究[D];青島大學(xué);2011年

3 張麗麗;Zolpidem對大鼠黑質(zhì)網(wǎng)狀帶及丘腦底核GABA_A受體功能的調(diào)節(jié)作用[D];青島大學(xué);2006年

4 盧平;惡黑細(xì)胞中的谷氨酸信號通路及其與細(xì)胞骨架蛋白分子的作用機制[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號：2860196