構(gòu)杞子是茄科植物寧夏枸杞的成熟干燥果實,為我國常用中藥。枸杞成分復雜,本實驗采用化學成分明確的枸杞子提取液LBA及枸杞多糖LBP,在常見臨床病理模型：視網(wǎng)膜缺血、視網(wǎng)膜神經(jīng)變性RCS大鼠及糖尿病胃癱模型中,探索其藥理學作用,為枸杞的臨床應用提供理論基礎(chǔ)和新藥思路。 第一部分枸杞子提取液在視網(wǎng)膜缺血模型中的研究 目的：觀察枸杞子提取液(LBA)對視網(wǎng)膜缺血的防治作用并探索其與細胞凋亡的相關(guān)聯(lián)系。 材料與方法：建立前房加壓誘導的大鼠視網(wǎng)膜缺血模型,將36只雄性Wistar大鼠隨機分組,正常組4只,生理鹽水組(NS組)16只,LBA組16只。LBA組及NS組于模型制作前28天分別連續(xù)經(jīng)口喂食LBA (1mg/kg)及等量生理鹽水(NS),LBA組及NS組根據(jù)灌注時間的不同,再分為灌注后12h、24h、48h及72h四組。采用HE染色和TUNEL法檢測,觀察LBA組及NS組視網(wǎng)膜中各層神經(jīng)元的變化,應用免疫組織化學方法檢測Fas/FasL蛋白的表達探索其與細胞凋亡的聯(lián)系。 結(jié)果：(1)HE染色：NS組大鼠內(nèi)核層缺血再灌注12小時之后厚度輕微變薄,細胞數(shù)略微減少,此時內(nèi)網(wǎng)層、外網(wǎng)層及外核層變化不大。24小時后,外網(wǎng)層變薄,外核層變化輕微,內(nèi)核層結(jié)構(gòu)層次紊亂,視網(wǎng)膜以節(jié)細胞數(shù)減少最為顯著。48小時后,各層厚度變薄程度逐漸更加明顯,以內(nèi)核層最為顯著,細胞數(shù)大量減少。72小時后,各層細胞進一步變薄。與NS組相比,不同時間點LBA組大鼠內(nèi)核層至內(nèi)界膜厚度,均超過NS組(P0.01),內(nèi)核層細胞數(shù)和節(jié)細胞數(shù)比NS組多,細胞形態(tài)及排列也比較規(guī)整。 (2) TUNEL檢測：正常鼠無細胞凋亡表現(xiàn),TUNEL染色呈陰性反應。12小時后生理鹽水組內(nèi)核層與視網(wǎng)膜節(jié)細胞層均可觀察到TUNEL陽性細胞,到24hTUNEL陽性細胞明顯增多,內(nèi)核層最為明顯,而外核層無明顯的細胞凋亡征象。24h開始TUNEL陽性細胞逐漸減少,到72h時凋亡細胞只有3-6個/100μm。LBA組TUNEL陽性細胞表達規(guī)律與鹽水對照組類似,TUNEL陽性細胞在12、24、48h比生理鹽水組有顯著減少。 (3) Fas/FasL染色：正常鼠不表達Fas/FasL陽性細胞。12小時后生理鹽水組內(nèi)核層與視網(wǎng)膜節(jié)細胞層均可觀察到Fas的少量表達；到24h后Fas陽性細胞明顯增多,內(nèi)核層最為明顯。到72h后Fas陽性細數(shù)明顯減少。LBA組Fas陽性細胞表達規(guī)律與鹽水對照組類似,Fas陽性細胞細胞在各個時間段比生理鹽水組均有顯著減少。FasL的表達表達規(guī)律早期與Fas及TUNEL染色表達規(guī)律均相似,12小時后生理鹽水組內(nèi)核層與視網(wǎng)膜節(jié)細胞層均可觀察到FasL的少量表達,24h后FasL陽性細胞明顯增多,達到高峰,以后逐漸下降但72h后仍維持高表達。LBA組FasL陽性細胞數(shù)在各個時間段比生理鹽水組均有顯著減少。 結(jié)論：(1)視網(wǎng)膜缺血模型前28天連續(xù)經(jīng)口喂食LBA1mg/kg,可以有效保護大鼠視網(wǎng)膜,內(nèi)核層變薄程度顯著降低,各層細胞數(shù)比對照組也顯著增加。 (2)細胞凋亡是導致視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷原因之一,大鼠經(jīng)口喂食LBA可以顯著降低此類凋亡。 (3) Fas/FasL凋亡信號系統(tǒng)的參與是造成視網(wǎng)膜神經(jīng)元損傷的機理之一,LBA通過有效降低Fas/FasL陽性細胞數(shù),達到保護視網(wǎng)膜缺血損傷的作用。 第二部分：枸杞子提取液對RCS大鼠視網(wǎng)膜的探索性研究 目的：觀察枸杞子提取液(LBA)對RCS大鼠視網(wǎng)膜色素變性的治療作用。 方法：RCS大鼠60只,隨機分為給藥組和對照組各30只。給藥組大鼠出生后第10天開始喂食LBA(1mg/kg),對照組大鼠喂食等量生理鹽水。兩組大鼠分別在生后25、35、50d處死,取出眼球,制備組織切片,HE染色和TUNEL檢測視網(wǎng)膜感光細胞的數(shù)量,Caspase-2染色檢測LBA對細胞凋亡的作用。 結(jié)果：給藥組大鼠出生25d時,感光細胞數(shù)目比對照組細胞數(shù)目多；35d時,感光細胞數(shù)目較25d時有所下降；50d時感光細胞數(shù)目與對照組比較無明顯差異。LBA組在第25天陽性感光細胞明顯多于對照組。RCS大鼠給藥組25d時TUNEL檢測陽性細胞數(shù)目與對照組相比明顯減少,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。RCS大鼠LBA組在25天和35天時Caspase-2陽性細胞主要分布于內(nèi)核層及節(jié)細胞層,實驗組第25天陽性細胞數(shù)為7.14±1.86,明顯低于對照組(P0.05),之后兩組差別逐漸變小,到第50天,兩組的陽性細胞數(shù)差別不大。 結(jié)論：在RCS大鼠視網(wǎng)膜變性的早期,LBA可以使感光細胞得到更多存留,對早期變性的神經(jīng)元發(fā)揮保護作用。LBA對凋亡的抑制作用可能與抑制Caspase-2蛋白表達有關(guān)。 第三部分：LBP對大鼠糖尿病胃癱模型血糖及胃動力研究 目的：本實驗采用枸杞多糖(LBP)對糖尿病大鼠模型并發(fā)癥胃癱進行探索性研究,希冀為糖尿病胃癱的臨床治療提供依據(jù)和新的治療方法。 材料與方法：本實驗中,LBP的口服劑量分為三組,每天100,200and400mg/kg,實驗前提前連續(xù)喂食28天后,建立鏈脲佐菌素誘導的糖尿病大鼠病理模型,測量血液中葡萄糖、胰島素含量及胰島素抵抗指數(shù)(IRI)、Ghrelin、Ghrelin mRNA、胃排空率、凋亡指數(shù)(AI)及Bcl-2/Bax比值,并進行相應的分析。 結(jié)果：LBP顯著降低葡萄糖、胰島素及IRI水平(P0.05)。Ghrelin在LBP給藥后顯著升高,呈劑量依賴性(P0.05)。糖尿病大鼠Ghrelin mRNA在胃粘膜表達增加,但在LBP給藥后顯著降低(P0.05)。糖尿病LBP給藥組胃動力及胃排空率比對照組顯著增高(P0.05)。Bcl-2/Bax比值糖尿病LBP給藥組比對照組顯著增高(P0.05),凋亡指數(shù)顯著降低(P0.05)。 結(jié)論：實驗中我們發(fā)現(xiàn)LBP通過降低血糖及IRI水平,增加胃粘膜Ghrelin的表達及降低胃細胞凋亡,能顯著改善糖尿病胃癱的胃動力狀況。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R-332;R285.5
【文章目錄】：
目錄
CONTENTS
中文摘要
英文摘要
符號說明
第一部分 枸杞子提取液在視網(wǎng)膜缺血模型中的研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
第二部分 枸杞子提取液對RCS大鼠視網(wǎng)膜色素的探索性研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
第三部分 LBP對大鼠糖尿病胃癱模型血糖及胃動力研究
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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本文編號：2859638