海馬是學(xué)習(xí)和記憶的重要組織,而垂體在內(nèi)分泌系統(tǒng)中起統(tǒng)率作用。衰老(aging)是機(jī)體的功能發(fā)生逐漸減退及生理功能紊亂的綜合表現(xiàn),是一種正常的、復(fù)雜的、不可逆的生物學(xué)過程。海馬和垂體隨著年齡的增長而出現(xiàn)生理功能逐漸減退,導(dǎo)致腦老化和內(nèi)分泌系統(tǒng)功能下降的衰老跡象,出現(xiàn)記憶力下降等,機(jī)體合成代謝減緩和免疫系統(tǒng)的衰退,從而導(dǎo)致機(jī)體的整體衰老。 以往研究海馬和垂體衰老機(jī)制方面多集中在DNA和RNA水平或少數(shù)個(gè)別蛋白質(zhì)的功能上,這樣的研究方式和研究技術(shù)已無法滿足后基因組時(shí)代里對(duì)衰老這類復(fù)雜生命現(xiàn)象的研究要求,以細(xì)胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)為研究對(duì)象的蛋白質(zhì)組學(xué)的出現(xiàn)則為衰老研究提供了新的研究思路和技術(shù)。本研究以衰老過程中小鼠海馬和垂體組織為研究對(duì)象,采用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法以期尋找或發(fā)現(xiàn)海馬和垂體的在衰老過程中差異表達(dá)的蛋白質(zhì),為深入了解其衰老的發(fā)生機(jī)制提供科學(xué)的理論根據(jù)和在蛋白質(zhì)組水平上驗(yàn)證D-半乳糖致衰老模型作為腦衰老研究模型的可行性,并為延緩其功能衰退提供新的研究方法和線索。這對(duì)改善老年人的健康狀況和抗衰老具有十分重要的意義。 本實(shí)驗(yàn)首先提取23月齡組和3月齡組小鼠的海馬組織的總蛋白質(zhì),經(jīng)雙向電泳,銀染顯色,圖象掃描和PDQuest軟件分析,得差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)45個(gè),經(jīng)質(zhì)譜分析結(jié)合數(shù)據(jù)庫搜索共鑒定到43蛋白質(zhì)。第二部分實(shí)驗(yàn)采用D—半乳糖誘導(dǎo)方法建立小鼠衰老模型,提人ダ獻(xiàn)楹投哉兆櫚暮Ｂ硨痛固遄櫓?淖艿鞍字?經(jīng)雙向電泳,考染顯色和圖像分析,得海馬組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)36個(gè),垂體差異表達(dá)的蛋白質(zhì)點(diǎn)46個(gè)。經(jīng)質(zhì)譜分析后搜庫鑒定到D—半乳糖致衰老過程中海馬和垂體分別為28個(gè)和36個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)。 以上結(jié)果表明衰老過程中,葡萄糖/能量代謝的功能障礙導(dǎo)致ATP生成減少,ROS大量生成,以至于腦組織更易遭受氧化損傷和凋亡;另外VDAC在衰老組的海馬和垂體中表達(dá)上調(diào),導(dǎo)致線粒體膜通透性增加釋放線粒體的細(xì)胞色素C(Cyt C)和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)引起細(xì)胞凋亡.這些導(dǎo)致神經(jīng)退行性疾病和內(nèi)分泌系統(tǒng)功能下降.另外鈣調(diào)蛋白(CaM)在衰老組中的下調(diào)也是引起學(xué)習(xí)和記憶功能下降的一個(gè)重要因素.因此,本研究結(jié)果提示氧自由基增加,線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是海馬和垂體衰老的主要原因,為闡明海馬和垂體衰老的分子機(jī)制提供了有意義的新的線索,證明了D-半乳糖衰老模型是研究海馬衰老機(jī)制的一個(gè)很好的模型。
【學(xué)位單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R341
【部分圖文】：

本實(shí)驗(yàn)因?yàn)?3月齡小鼠樣品量少，而銀染靈敏度高，上樣量比考染少，所以樣品量少的23月齡小鼠和其對(duì)照3月齡小鼠使用銀染的方法，如圖2一2為銀染染色 (200pg蛋白質(zhì))的電泳圖譜。.皿‘.件..…夕:二。二…一’‘_少..1尹硯’...0，，冬腳’。圖2一2海馬組分雙向電泳圖，左:3月齡組分右:23月齡組分2.2.3.7圖像分析經(jīng)掃描儀掃描的圖象用PDQUESTZ一D分析軟件系統(tǒng)進(jìn)行分析，我們分別對(duì)對(duì)照組和造模組的樣品進(jìn)行6次雙向電泳，選取3組重復(fù)性好的膠，一共有6塊凝膠，經(jīng)掃描儀掃描后再用PDQUESTZ一D軟件進(jìn)行圖象分析，得到了斑點(diǎn)大小、形狀、位置與肉眼觀察到的斑點(diǎn)較為接近的數(shù)字化的 GelMaster圖譜。對(duì)對(duì)照組和衰老組的6塊 GelSpot圖進(jìn)行了斑點(diǎn)匹配

圖2一4差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的局部放大圖，兩圖中的上排為Ma5te:膠圖和3月齡組分凝膠圖，下排為23月齡組分分凝膠圖2.2.3.8原位酶解及質(zhì)譜鑒定差異蛋白質(zhì)

襯.1哎吐.....fr.吸百t圖2一 323月齡組與3月齡組比較2倍差異以上蛋白點(diǎn)圖2一4差異蛋白質(zhì)點(diǎn)的局部放大圖，兩圖中的上排為 Ma5te:膠圖和3月齡組分凝膠圖，下排為23月齡組分分凝膠圖2.2.3.8原位酶解及質(zhì)譜鑒定差異蛋白質(zhì)
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