目的改良樹脂包埋復(fù)數(shù)小鼠不脫鈣脛骨的方法,提高樹脂包埋法的效率及穩(wěn)定性,探索減少樹脂切片脫片的方法。方法取15只B6小鼠共30脛骨,標(biāo)記、固定、脫水、滲透后將其包埋于直徑4 mm的圓柱型樹脂塊中,脛骨近端1/4處切斷后再對剩余的3/4脛骨包埋。在包埋時(shí)將5個(gè)脛骨切面貼于平整樹脂板并包埋于同一樹脂塊中。分別在包埋液制備、切片、染色3個(gè)階段隨機(jī)將樣本分為對照組及實(shí)驗(yàn)組,分別在3個(gè)改良組中采用以下方案處理,包括:向包埋液沖入CO_2;在切面上涂抹包埋液;在脫塑水化前以95℃加熱切片15 min。分析樹脂凝固時(shí)間、切片脫片率及骨形成、成骨細(xì)胞定量指標(biāo)。結(jié)果成功包埋6個(gè)樹脂塊,每個(gè)樹脂塊內(nèi)有5個(gè)脛骨,脛骨橫截面于同一平面上,樹脂塊凝固完全,適于切片。向包埋液沖入CO_2可以縮短樹脂塊凝固時(shí)間,提高凝固成功率。在切面上涂抹包埋液可以顯著降低切片時(shí)的脫片率(P0.05)且不影響骨標(biāo)記的熒光分析(P0.05)。在脫塑前加熱切片可以顯著降低脫塑水化后的脫片率(P0.05),且不影響成骨細(xì)胞定量分析(P0.05)。結(jié)論復(fù)數(shù)小鼠不脫鈣脛骨的樹脂包埋改良法有效可行,這可能是一種理想的不脫鈣骨組織研究方法。
【部分圖文】：

貼紙價(jià)格昂貴，標(biāo)本需要低溫保存等缺點(diǎn)而暫時(shí)未能廣泛推廣。樹脂包埋切片耗費(fèi)的時(shí)間較長，如果可以在構(gòu)建標(biāo)本塊時(shí)將多個(gè)骨樣本按照相同位置包埋固定，切片時(shí)的效率就能明顯提高。本實(shí)驗(yàn)室首次探索了復(fù)數(shù)脛骨平行包埋的方案，包埋時(shí)可以確保所有脛骨切面在同一平面上，切片時(shí)位置角度調(diào)整方便高效。與傳統(tǒng)的包埋方式相比，此方案不僅明顯縮短了實(shí)驗(yàn)的耗時(shí)，還減少了包埋STIRHEATMagneticstirbarMagneticstirrerDryiceEmbeddingsolution(withoutDMPT)CO2AirCO2AirCO2AirCO2Air0h1h4h8h圖1向包埋液沖入二氧化碳可以縮短包埋液的凝固時(shí)間Fig.1FlowingCO2intotheembeddingsolutionreducespolymerizationtime.A:SchematicdiagramofflowingCO2intotheembeddingsolution;B:RepresentpicturesshowingpolymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD圖2使用兩次包埋的方式可將多個(gè)脛骨包埋于同一樹脂塊中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedbloc

olymerizationoftheblocksinCO2andairgroupsat0,1,4,and8h.Thepicturesweretakenimmediatelyaftertiltingthevialtoobservetheviscosityandpolymerizationofthesolution;C:NumberofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroupsovertime(n=10);D:RateofcompletepolymerizedblocksofCO2andAirgroups(n=10).ABC12108642No.0ofcompletpolymerizdblocksCO2Air0148244872DCO2Air100%70%1.21.00.80.60.40.20Ratioofcompletpolymerizdblocks(n=10)ABCD圖2使用兩次包埋的方式可將多個(gè)脛骨包埋于同一樹脂塊中Fig.2Multipletibiasembeddedinthesameblockby2-stepembedding.A:Embeddingmultipletibiasinaflintglasstube;B:Trimmingthetibiaatthe1/4proximalpart;C:Embeddingmultipletibiaswhilemaintainingthesectionplaneflat;D:Polymerizedblockwithmultipletibias.http://www.j-smu.comJSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044TimeafterflowingCO2andair(h)··1041

聯(lián)，CO2沖入可PasteUn-pasteUn-pastePaste×10×20Un-pastePaste×20×40ABCNo.ofeffectiveslides***454035302520151050PasteUn-pasteRateofslidesdetachment（%）***PasteUn-paste100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%MAR（μm/d）n.sPasteUn-pasteBFR/BS（%/d）n.sPasteUn-paste2.52.01.51.00.501.41.21.00.80.60.40.20DE圖3使用包埋液涂抹切面可預(yù)防切片時(shí)脛骨脫片F(xiàn)ig.3Applicationofembeddingsolutiononthesectionsurfacepreventsslidedetachmentwithoutaffectingcalceinlabelinganalysis.A:RepresentativescanpicturesofPasteandUn-pasteslides(scalebar=1mm);B:Representativeunstainedpasteandnon-pasteslidesundermicroscope(leftpanel:scalebar=200μm;rightpanel:scalebar=100μm);C:Representativefluorescentpicturesofpasteandnon-pasteslides(leftpanel:scalebar=100μm;rightpanel:scalebar=50μm);D:Numberofeffectiveslidesandrateofslidesdetachmentinpasteandnon-pastegroups(***P<0.001,n=6);E:Mineralappositionrate(MAR,μm/d)andboneformationrate(BFR/BS,%/d)inpasteandnon-pastegroups(n.s:P>0.05,n=12).··1042JSouthMedUniv,2019,39(9):1038-1044http://www.j-smu.com
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本文編號：2850352