本文關(guān)鍵詞：金屬標(biāo)記結(jié)合生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組相對(duì)定量及絕對(duì)定量新方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：隨著蛋白質(zhì)組學(xué)研究的深入，蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)進(jìn)入大規(guī)模定量的時(shí)代。但是目前蛋白質(zhì)的定量方法仍然不夠完善，發(fā)展規(guī)�；�、準(zhǔn)確度高的定量方法仍然是定量蛋白質(zhì)組學(xué)的最大挑戰(zhàn)。金屬標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜的定量方法由于標(biāo)記效率高、定量準(zhǔn)確度高、價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)引起了廣泛的關(guān)注。 本論文基于金屬元素標(biāo)記技術(shù)，發(fā)展了金屬元素標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜用于蛋白質(zhì)N-末端肽的鑒定及相對(duì)定量新方法和18O/金屬等重標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組絕對(duì)定量新方法，使金屬元素標(biāo)記方法在定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中進(jìn)一步深入。 本論文由三章組成。在第一章，介紹了目前定量蛋白質(zhì)組學(xué)的研究現(xiàn)狀、穩(wěn)定同位素標(biāo)記和金屬元素標(biāo)記方法在定量蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用；還介紹了基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì)N-末端肽鑒定及相對(duì)定量和雙重等重標(biāo)記的蛋白質(zhì)組定量技術(shù)的最新進(jìn)展，最后提出本論文研究的內(nèi)容。 在第二章，介紹了金屬元素標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜用于蛋白質(zhì)N-末端肽的鑒定及相對(duì)定量新方法。通過DOTA-NHS-ester雙功能試劑與蛋白質(zhì)N-末端肽反應(yīng)，并與鑭系金屬鹽離子螯合形成標(biāo)簽，建立了一種基于生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)N-末端肽鑒定及相對(duì)定量新方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金屬元素能夠在蛋白質(zhì)水平使N-末端肽完全標(biāo)記，此后通過異硫氰酸脂修飾的硅球選擇性去除酶切后新生肽段，實(shí)現(xiàn)了對(duì)N-末端肽富集。將該方法應(yīng)用于在55C和75C溫度培養(yǎng)的騰沖嗜熱菌中蛋白質(zhì)組N-末端肽的分析，成功地鑒定到158種蛋白質(zhì)的N-末端肽，其中24種蛋白質(zhì)的N-末端肽存在著部分乙�；揎棥Ａ硗�，大分子的金屬標(biāo)簽?zāi)軌蚴剐∮?個(gè)氨基酸的短序列N-末端肽獲得鑒定，其中短序列的N-末端肽占總鑒定的N-末端肽的55%。最后，發(fā)展了基于N-末段肽相對(duì)定量方法，以溶菌酶及核糖核酸酶B模式蛋白，在兩個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)其標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)（R2）分別為0.9994和0.9997，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD值均小于5%。在不同溫度培養(yǎng)騰沖嗜熱菌中，80個(gè)蛋白質(zhì)具有定量信息，與55C培養(yǎng)騰沖嗜熱菌中蛋白質(zhì)量比較，在75C培養(yǎng)的騰沖嗜熱菌中，7個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)量上調(diào)，，16個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)量下調(diào)，并且大部分豐度變化大的蛋白質(zhì)都參與了蛋白質(zhì)的合成過程。 在第三章，介紹了18O/金屬等重標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組絕對(duì)定量新方法。通過金屬標(biāo)記肽段的N-末端和18O標(biāo)記肽段的C-端，實(shí)現(xiàn)雙重等重標(biāo)記，并且首次將雙重等重標(biāo)記與多反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)相結(jié)合用于目標(biāo)蛋白質(zhì)的絕對(duì)定量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：18O+Ho與Tm都能對(duì)肽段實(shí)現(xiàn)高效的標(biāo)記并且7天內(nèi)保持穩(wěn)定，滿足了標(biāo)記定量的要求；兩種標(biāo)記的肽段在色譜中的保留時(shí)間完全一致，保證了同時(shí)在質(zhì)譜碰撞池碎裂和質(zhì)譜分析；18O+Ho與Tm標(biāo)記的肽段等量混合，經(jīng)二級(jí)碎裂后b、y以相差4Da離子1:1成對(duì)出現(xiàn)，說明定量的準(zhǔn)確性高；最后在騰沖嗜熱菌全蛋白酶切肽段的基質(zhì)干擾下，MRM質(zhì)譜分析目標(biāo)肽段的b離子和y離子的母子離子對(duì)在兩個(gè)數(shù)量級(jí)動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)R2均為0.999，定量限為0.7fmol/μL且RSD＜10%，相對(duì)誤差小于10%(除接近定量限的結(jié)果外)，表明該方法可以準(zhǔn)確地用于目標(biāo)蛋白質(zhì)的絕對(duì)定量分析。
【關(guān)鍵詞】：定量蛋白質(zhì)組學(xué) 生物質(zhì)譜 金屬標(biāo)記 18O標(biāo)記
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R3411
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 第一章 前言12-20
• 1.1 定量蛋白質(zhì)組學(xué)12
• 1.2 穩(wěn)定同位數(shù)標(biāo)記在定量蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用12-14
• 1.3 金屬元素標(biāo)記在定量蛋白質(zhì)組學(xué)中的應(yīng)用14-15
• 1.4 基于質(zhì)譜技術(shù)的蛋白質(zhì) N-末端肽的鑒定及相對(duì)定量15-17
• 1.5 雙重等重標(biāo)記的蛋白質(zhì)組定量技術(shù)17-19
• 1.6 本論文研究?jī)?nèi)容19-20
• 第二章 金屬元素標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜用于蛋白質(zhì) N-末端肽的鑒定及相對(duì)定量新方法研究20-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)部分20-23
• 2.1.1 儀器與試劑20-21
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法21-23
• 2.1.2.1 蛋白質(zhì)胍基化修飾21
• 2.1.2.2 蛋白質(zhì)金屬標(biāo)記和酶切21
• 2.1.2.3 表明鍵合 DITC 的硅球合成及與酶切肽段的結(jié)合21
• 2.1.2.4 騰沖嗜熱菌全蛋白的提取21-22
• 2.1.2.5 金屬元素對(duì)騰沖嗜熱菌全蛋白樣本 N-末端肽的標(biāo)記22
• 2.1.2.6 質(zhì)譜分析22-23
• 2.2 結(jié)果和討論23-39
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)原理23-25
• 2.2.2 蛋白質(zhì) N-末端肽胍基化效率考察25-26
• 2.2.3 蛋白質(zhì) N-末端肽金屬標(biāo)記條件優(yōu)化26
• 2.2.4 基于 DITC-硅球的 N-末端肽的分離及質(zhì)譜鑒定26-29
• 2.2.5 基于 N-末端肽的蛋白質(zhì)相對(duì)定量29-31
• 2.2.6 不同溫度培養(yǎng)騰沖嗜熱菌 N-末端肽的鑒定及相對(duì)定量31-39
• 2.3 本章小結(jié)39-40
• 第三章 (18)~O/金屬等重標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組絕對(duì)定量新方法研究40-59
• 3.1 實(shí)驗(yàn)部分40-45
• 3.1.1 儀器與試劑40-41
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法41-45
• 3.1.2.1 人肝微粒體定量串聯(lián)體蛋白的制備41-42
• 3.1.2.1.1 人肝微粒體 QconCAT 質(zhì)粒構(gòu)建41
• 3.1.2.1.2 QconCAT 的表達(dá)和純化41-42
• 3.1.2.2 定量肽段和內(nèi)標(biāo)肽段的制備42-43
• 3.1.2.2.1 QconCAT 蛋白的酶切及~(18)O 標(biāo)記42
• 3.1.2.2.2 ~(18)O/~(16)O 肽段的金屬標(biāo)記42-43
• 3.1.2.3 人肝微粒體蛋白質(zhì)的提取、酶切和金屬標(biāo)記43
• 3.1.2.4 質(zhì)譜分析43-45
• 3.2 結(jié)果與討論45-58
• 3.2.1 ~(18)O/金屬等重標(biāo)記的原理和技術(shù)路線45-46
• 3.2.2 ~(18)O/金屬等重標(biāo)記用于蛋白質(zhì)絕對(duì)定量分析實(shí)驗(yàn)流程46
• 3.2.3 ~(18)O/金屬等重結(jié)合質(zhì)譜蛋白質(zhì)組絕對(duì)定量方法的建立46-58
• 3.2.3.1 ~(18)O/金屬標(biāo)記效率的考察46-50
• 3.2.3.2 ~(18)O/金屬標(biāo)記肽段的穩(wěn)定性考察50-51
• 3.2.3.3 ~(18)O/金屬標(biāo)記肽段在食譜碰撞池中的碎裂行為考察51-52
• 3.2.3.4 定量肽段母子離子對(duì)選擇及質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化52-53
• 3.2.3.5 ~(18)O/金屬標(biāo)記肽段的色譜保留時(shí)間考察53-54
• 3.2.3.6 定量肽段標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立54-55
• 3.2.3.7 ~(18)O/金屬等重標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組絕對(duì)定量方法的應(yīng)用55-58
• 3.3 本章小結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-65
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷65-67
• 致謝67-68
• 綜述68-78
• 參考文獻(xiàn)74-78

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 YAN Hui;HAO FeiRan;CAO QiChen;LI JiaBin;LI NanNan;TIAN Fang;BAI HaiHong;REN XiaoJun;LI XianYu;ZHANG YangJun;QIAN XiaoHong;;A novel method for identification and relative quantification of N-terminal peptides using metal-element-chelated tags coupled with mass spectrometry[J];Science China(Chemistry);2014年05期

2 王雪穎;張養(yǎng)軍;王昕;佟巍;秦偉捷;毛心麗;錢小紅;;一種蛋白質(zhì)質(zhì)譜分析中快速胍基化新方法[J];質(zhì)譜學(xué)報(bào);2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：金屬標(biāo)記結(jié)合生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組相對(duì)定量及絕對(duì)定量新方法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：283223