【摘要】： 本文旨在建立新生隱球菌的基因克隆操作系統(tǒng)并對新生隱球菌的 莢膜基因及其生理功能進(jìn)行研究。研究工作包括：（1）用中斷突變的 方法在新生隱球菌的莢膜缺陷株C. neoformans cap60和cap70中分別 構(gòu)建成尿嘧啶合成基因URA5基因突變株（ura5~-)，經(jīng)Southern分子雜 交證明其含有URA5和G418兩個選擇標(biāo)記，可作為高效轉(zhuǎn)化受體菌； （2）構(gòu)建了多個可以轉(zhuǎn)化上述突變株的質(zhì)粒，并篩選到高效轉(zhuǎn)化質(zhì)粒 pCXJ18，可以作為構(gòu)建新生隱球菌文庫的載體；（3）首次建立用于新 生隱球菌的高效化學(xué)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率達(dá)1-2×10~3／ugDNA。該方法 的建立為篩選新基因打下了良好的基礎(chǔ)；（4）用PCR擴(kuò)增的方法成功 地克隆到新生隱球菌莢膜基因CAP60，并將其分段亞克隆后與綠色熒 光蛋白基因融合，為研究其功能創(chuàng)造了條件；（5）首次用載體pCXJ18 后成功地構(gòu)建了新生隱球菌基因組文庫，變今后克隆新基因奠定了基 礎(chǔ)；（6）利用新構(gòu)建的基因轉(zhuǎn)化新生隱球菌莢膜缺陷株cap70，初步結(jié) 果表明，部分轉(zhuǎn)化子能使乳膠凝集反應(yīng)呈陽性，為進(jìn)上步克隆庫CAP70 基因創(chuàng)造了條件。 新生隱球菌莢膜基因的研究目前在國外已取得了一定的進(jìn)展，在 國內(nèi)幾乎還是空白，而具有莢膜又是新生隱球菌的重要致病原因之一， 因此對莢膜基因的研究成為提高診斷和治療的必須。我們希望通過我 們的工作為臨床診治新生隱球菌感染帶來新的契機(jī)，并為進(jìn)一步對新 生隱球菌的致病機(jī)理研究及明確莢膜基因表達(dá)的生理生化過程打下基 礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號】：R379.5

【共引文獻(xiàn)】

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1 潘煒華,廖萬清,霍克克,李波,張佳憶;新生隱球菌穩(wěn)定載體的構(gòu)建[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年05期

2 潘煒華,廖萬清,顧菊林,霍克克;新生隱球菌高效轉(zhuǎn)化方法的研究[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2002年11期

3 廖萬清;;現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)真菌學(xué)的研究展望[J];中華皮膚科雜志;1996年05期

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1 陳孫孝;白念珠菌鈣調(diào)蛋白基因(CMD1)缺陷菌株的構(gòu)建及CMD1功能性基因的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

本文編號：2779023