發(fā)布時(shí)間：2017-03-30 14:18

  本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)GFP的Lewis肺癌干細(xì)胞的提取與初步鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 1.用原位種植方法，建立可穩(wěn)定遺傳GFP（green fluorescent protein綠色熒光蛋白）的Lewis肺癌（LLC Lewis lung carcinoma）C57BL/6小鼠模型。 2．無血清條件培養(yǎng)基單克隆法培養(yǎng)獲得Lewis肺癌細(xì)胞中的懸浮球細(xì)胞，并初步鑒定其生物學(xué)特性。 方法 1．建立原位種植小鼠模型：用matrigel膠分別包裹103、104、105個(gè)表達(dá)GFP的LLC親代細(xì)胞原位種植于6-8周雌性C57BL/6小鼠，在第7天、14天、21天、28天每組分別解剖3只，使用Sellstrom Z87熒光護(hù)目鏡和LDP470nm的藍(lán)光手電筒直接快速地觀察成瘤與轉(zhuǎn)移，統(tǒng)計(jì)成瘤率與成瘤時(shí)間。 2．單克隆法并用無血清條件培養(yǎng)基獲得LLC親代細(xì)胞中的懸浮球細(xì)胞。 3．克隆球形成實(shí)驗(yàn)對比LLC成球細(xì)胞與LLC親代細(xì)胞的體外增殖能力。 4．侵襲實(shí)驗(yàn)比較兩種細(xì)胞的侵襲能力。 5．電鏡對比兩種細(xì)胞的形態(tài)差異。 6．成瘤實(shí)驗(yàn)比較兩種細(xì)胞的致瘤力。 結(jié)果 1．三組小鼠成瘤均穩(wěn)定表達(dá)GFP，成瘤率分別為25.00%、58.33%、91.67%，與劑量呈正相關(guān)（P0.01）；成瘤時(shí)間分別為（23.33±4.04）d、（21±5.72）d、（18.45±7.84）d，與劑量無明顯關(guān)系（（P0.05），所有小鼠術(shù)后均蘇醒并存活。 2．單克隆法、無血清條件培養(yǎng)基成功培養(yǎng)出LLC成球細(xì)胞，且可穩(wěn)定傳代，光鏡下觀察可見懸浮生長的中空細(xì)胞球，結(jié)構(gòu)緊密。 3．克隆球形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LLC成球細(xì)胞的克隆形成率為（75.5±5.6）%，LLC親代細(xì)胞的克隆形成率為(26.4±3.1)%，，兩者有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)，LLC成球細(xì)胞的體外增殖能力明顯大于LLC親代細(xì)胞。 4．侵襲實(shí)驗(yàn)：侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示LLC成球細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)為259±26，LLC親代細(xì)胞穿過聚碳酸酯膜的細(xì)胞數(shù)為36±5，LLC成球細(xì)胞與LLC親代細(xì)胞相比相對侵襲指數(shù)為6.43±2.75，LLC成球細(xì)胞穿膜數(shù)高于LLC親代細(xì)胞(t=6.812，P 0.01)，LLC成球細(xì)胞較LLC親代細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲能力。 5．電鏡結(jié)果顯示LLC成球細(xì)胞形態(tài)核漿比例明顯增大，細(xì)胞器稀少。 6．成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：LLC成球細(xì)胞在只種植100個(gè)細(xì)胞的情況下仍可成瘤，成瘤能力明顯強(qiáng)于LLC親代細(xì)胞。 結(jié)論 1．成功建立穩(wěn)定表達(dá)GFP的lewis肺癌小鼠模型，可用于治療肺癌藥物的快速篩選。 2.無血清單克隆法成功培養(yǎng)出LLC懸浮球細(xì)胞，其增殖侵襲與致瘤能力明顯強(qiáng)于LLC親代細(xì)胞，具有腫瘤干細(xì)胞特性。
【關(guān)鍵詞】：肺癌干細(xì)胞 懸浮球 動(dòng)物模型 快速篩選 綠色熒光蛋白
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R734.2;R-332
【目錄】：

• 符號說明5-6
• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 前言13-14
• 第一部分 穩(wěn)定表達(dá) GFP 的 C57 BL/6 小鼠 Lewis 肺癌模型的建立14-25
• 1 材料14-16
• 2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 3 結(jié)果19-23
• 4 討論23-24
• 小結(jié)24-25
• 第二部分 肺癌干細(xì)胞的提取與初步鑒定25-38
• 1 材料25-28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-31
• 3 結(jié)果31-36
• 4 討論36-37
• 小結(jié)37-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 文獻(xiàn)綜述42-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 致謝49-50
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文50-51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張朝暉,陳鋒,譚佑銘,讓蔚清,張丹,羅招陽;烹調(diào)油煙致Balb/C小鼠肺癌的病理變化[J];中國公共衛(wèi)生;2003年12期

2 宋玉華;彭鵬;邱少敏;徐月娟;;小鼠Lewis肺癌胸腔移植模型的建立和應(yīng)用[J];江蘇醫(yī)藥;2012年15期

  本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達(dá)GFP的Lewis肺癌干細(xì)胞的提取與初步鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：277338