本文關(guān)鍵詞：小鼠肌肉創(chuàng)傷模型中與異位骨化相關(guān)的細(xì)胞因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 比較早期細(xì)胞因子在正常小鼠和肌肉創(chuàng)傷模型小鼠中的表達(dá)，并觀察正常與創(chuàng)傷肌肉組織中肌肉前體細(xì)胞的表面標(biāo)記物的表達(dá)及多向分化能力的差異。 方法： 應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室提供的創(chuàng)傷模型對(duì)剛剛處死的CD-1小鼠左下肢進(jìn)行創(chuàng)傷處理，其左下肢暴露于模型下，應(yīng)用1500psi的壓力沖擊1250psi的爆炸片，從而對(duì)小鼠左下肢股骨端造成損傷，同一小鼠右下肢作為對(duì)照組，不施加損傷(n=4)。損傷后將小鼠雙下肢股骨側(cè)肌肉立即進(jìn)行分離，去除神經(jīng)及血管組織，并將肌肉分為(100-150mm3)大小在基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，3日后分別對(duì)創(chuàng)傷組及正常組的肌肉組織進(jìn)行細(xì)胞活性檢測(cè)。同時(shí)選取25種與成骨和炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子并通過(guò)熒光定量PCR（Q-PCR)的方法檢測(cè)兩種肌肉組織中的成骨及炎性因子相關(guān)基因的表達(dá)。觀察創(chuàng)傷與正常組織在培養(yǎng)三日后，，各肌肉內(nèi)細(xì)胞因子產(chǎn)生的而變化。免疫組化檢測(cè)相關(guān)變化的細(xì)胞因子。取創(chuàng)傷和正常的肌肉組織分離肌肉前體細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞特異性表面標(biāo)記物，并將獲得的細(xì)胞進(jìn)行成脂，成骨誘導(dǎo)分化，并觀察兩者成骨，成脂能力的差異。 結(jié)果： 對(duì)創(chuàng)傷和正常的肌肉組織分別培養(yǎng)3日后，進(jìn)行組織細(xì)胞活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)兩種組織內(nèi)均保留較高的細(xì)胞活性。相比之下，正常組織內(nèi)細(xì)胞存活量較創(chuàng)傷組織內(nèi)多。Q-PCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在創(chuàng)傷的組織中，細(xì)胞因子BMP4, BMP6, BMP7,TGFβ-1, IL-6, IL-15和NODAL均比正常組織內(nèi)表達(dá)的多，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。免疫組織化學(xué)檢測(cè)也得到與Q-PCR檢測(cè)相同的結(jié)果。這說(shuō)明創(chuàng)傷后的肌肉組織中的細(xì)胞與正常的肌肉組織細(xì)胞相比較可以表達(dá)更多的與骨形成相關(guān)的細(xì)胞因子，尤其是BMP4, BMP6, BMP7, TGFβ-1。在創(chuàng)傷和正常的肌肉中提取出相關(guān)細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞學(xué)鑒定顯示其細(xì)胞表面標(biāo)記物CD34(±)、CD45(-)、CD105（+）、CD90（+），與人類間充質(zhì)前體細(xì)胞（MPCs）的表面標(biāo)記物相似，對(duì)提取的細(xì)胞進(jìn)行成骨，成脂誘導(dǎo)分化，發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞均具有成骨，成脂分化的能力。 結(jié)論： 本研究證明了在規(guī)范的小鼠下肢肌肉創(chuàng)傷模型中，創(chuàng)傷后的小鼠的下肢肌肉組織與正常的肌肉組織組織相比較，可以分泌更多的BMP4、BMP6、BMP7、TGF-β、IL-6、IL-15和NODAL等細(xì)胞因子，其中，BMPs和TGFβ-1是誘導(dǎo)異位骨化（HO）形成的重要的細(xì)胞因子，在HO的形成過(guò)程中起到關(guān)鍵的作用。因此創(chuàng)傷后的肌肉組織中所存在的多種可誘導(dǎo)成骨形成的細(xì)胞因子為HO的形成提供了條件。在小鼠的創(chuàng)傷的肌肉中提取的MPCs與正常肌肉中提取的MPCs相比較，經(jīng)過(guò)流式細(xì)胞檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞表面特異性抗原與人類MPCs具有相似的表達(dá)，通過(guò)對(duì)MPCs細(xì)胞成骨，成脂能力的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其具有分化成骨，成脂的能力。因此，我們可以將肌肉創(chuàng)傷模型應(yīng)用于HO的研究中，使HO的研究更加具有統(tǒng)一性，為HO的形成機(jī)制研究打好基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：細(xì)胞因子 肌肉創(chuàng)傷 異位骨化
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R-332;R363
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 前言9-15
• 1.間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC Mesenchymal Stem Cells)在 HO 中的作用9-10
• 2．細(xì)胞外因子在 HO 中的作用10-13
• 2.1 BMP 受體信號(hào)通路10-12
• 2.2 BMP 信號(hào)通路與異位骨化的關(guān)系12-13
• 3. HO 的治療進(jìn)展13
• 4. 異位骨化研究中的問(wèn)題13-14
• 5. 本研究的研究背景和研究?jī)?nèi)容14-15
• 5.1 研究背景14
• 5.2 研究?jī)?nèi)容14-15
• 第一部分 小鼠肌肉損傷模型的建立及肌肉組織分泌細(xì)胞因子的檢測(cè)15-34
• 引言15
• 1.實(shí)驗(yàn)材料15-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2 主要試劑15-16
• 1.3 主要儀器設(shè)備16-17
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 2.1 主要試劑的配制17-18
• 2.2 小鼠肌肉損傷模型的建立18-22
• 2.3 肌肉組織組織學(xué)檢測(cè)22-25
• 3. 結(jié)果25-34
• 3.1 組織細(xì)胞活性檢測(cè)25
• 3.2 Q-PCR 檢測(cè)組織內(nèi)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的結(jié)果25-28
• 3.3 組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果28-34
• 第二部分 小鼠肌肉前體細(xì)胞的分離培養(yǎng)及分化鑒定34-43
• 1.實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物34
• 1.2 主要試劑34
• 1.3 主要儀器設(shè)備34-35
• 1.4 主要試劑的配制35
• 2.實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 2.1 小鼠肌肉前體細(xì)胞的分離培養(yǎng)35-36
• 2.2 小鼠肌肉前體細(xì)胞的鑒定36-38
• 3. 結(jié)果38-43
• 3.1 原代細(xì)胞培養(yǎng)38-39
• 3.2 小鼠 MPCs 細(xì)胞成脂成骨鑒定39-40
• 3.3 小鼠的 MPCs 流式細(xì)胞學(xué)鑒定40-43
• 討論43-45
• 結(jié)論45-46
• 創(chuàng)新點(diǎn)和不足46-47
• 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)46
• 本研究的不足之處46-47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 英文縮略詞54-55
• 在學(xué)期間主要發(fā)表論文清單55-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 幸?guī)V;孔清泉;;異位骨化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2011年09期

  本文關(guān)鍵詞：小鼠肌肉創(chuàng)傷模型中與異位骨化相關(guān)的細(xì)胞因子的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：276065