【摘要】：背景：脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose-derived (ASCs) mesenchymal stem cells)和骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow, BMSCs)都已被多項動物和臨床試驗研究證實有著強(qiáng)大的免疫調(diào)節(jié)作用,在促進(jìn)移植免疫耐受,緩解自身免疫性腦病,潰瘍性結(jié)腸炎等免疫疾病上效果較為顯著。但對來自同一供體的兩種細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行平行比較,到目前為止尚未見文獻(xiàn)報道。 本文從研究復(fù)合組織移植的特性入手,通過對復(fù)合組織移植術(shù)后免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)等研究思路的反思,理清了間充質(zhì)干細(xì)胞在促進(jìn)復(fù)合組織移植免疫耐受研究所面臨的機(jī)遇與挑戰(zhàn)。在客觀分析了間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的基礎(chǔ)上,著重探尋了抑制免疫細(xì)胞活化,促進(jìn)嵌合體發(fā)生的新路徑。對脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞臨床應(yīng)用的可推廣性、受體自身和第三方獲取干細(xì)胞的可行性、受體嵌合體誘導(dǎo)免疫耐受的可能性、通過介導(dǎo)特殊靶點調(diào)節(jié)整個細(xì)胞通路信號系統(tǒng)的整體性以及間充質(zhì)干細(xì)胞用于復(fù)合組織移植免疫耐受研究可能帶來的諸多受益方面的研究前景,作出了較為嚴(yán)謹(jǐn)而科學(xué)的理論分析與展望。與此同時,筆者以細(xì)胞學(xué)試驗為基礎(chǔ),通過比較骨髓干細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞兩種不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在異體細(xì)胞刺激和非特異性細(xì)胞增殖抗原作用下的調(diào)節(jié)作用,來探尋復(fù)合組織移植免疫調(diào)節(jié)作用的創(chuàng)新路徑。通過實證研究試圖回答以下問題：第一,骨髓干細(xì)胞和脂肪干細(xì)胞兩者的免疫調(diào)節(jié)作用是否有可比性；第二,在誘導(dǎo)免疫耐受方面,BMSCs和ASCs有何聯(lián)系與區(qū)別；第三,兩種不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞中究竟哪種間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用更好?它們的細(xì)胞學(xué)機(jī)制是什么? 方法：脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞分別自Lewis, Brown Norway(BN),以及ACI鼠提取并經(jīng)過流式細(xì)胞學(xué)分選純化,其標(biāo)準(zhǔn)為：CD29, CD90雙表達(dá)陽性；CD11, CD45雙表達(dá)陰性。為監(jiān)測這兩種細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用,本試驗以Lewis和BN鼠脾細(xì)胞的混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)試驗設(shè)定。具體分組為：1) Lewis鼠脾細(xì)胞單獨培養(yǎng)；2) Lewis鼠+放射后Lewis鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)；3)Lewis鼠+放射后BN鼠脾細(xì)胞培養(yǎng)；4) Lewis鼠+PHA刺激。在第3,4組中加入來源不同,年齡不同的ASCs或BMSCs以觀察抑制細(xì)胞增殖的作用。同時,在第3實驗組,ASCs和BMSCs在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的第三天加入(延遲調(diào)節(jié))或從中移除(中斷調(diào)節(jié))。此外,第3實驗組中的培養(yǎng)基也將轉(zhuǎn)移到新的Lewis鼠+BN鼠混合淋巴培養(yǎng)中。 結(jié)果：ASCs和BMSCs表現(xiàn)出非常相似的物理和生物學(xué)性狀,并且都表現(xiàn)出極低的免疫原性。當(dāng)ASCs和BMSCs加入第3,4實驗組后,都有明顯的抑制細(xì)胞增殖的作用,這一抑制作用與干細(xì)胞的數(shù)量呈正相關(guān)。在同等數(shù)量時,ASCs比BMSCs在調(diào)節(jié)特異性和非特異性刺激細(xì)胞增殖上,有著顯著的優(yōu)勢。而無論是延遲或是中斷調(diào)節(jié),抑制的比例都非常有限；干細(xì)胞的培養(yǎng)基并沒有顯著的調(diào)節(jié)作用。有意思的是：不同年齡的ASCs和BMSCs有著不同的性狀：從幼年組動物中提出的干細(xì)胞再增殖,分化,純化干細(xì)胞的比例上比老年組更加活躍。但是他們的免疫調(diào)節(jié)作用沒有統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論：應(yīng)用以干細(xì)胞為主要治療手段的治療方案,是達(dá)到移植免疫耐受最有前景的方法之一。脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞,比骨髓來源有著更好的臨床應(yīng)用可操作性和可獲取性,在可預(yù)期的未來,將成為BMSCs可行的替代方法之一。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R392
【圖文】：

成骨細(xì)胞誘導(dǎo)：黑染韓質(zhì)沉積 軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)：藍(lán)染的軟骨母細(xì)胞^

本文編號：2739512