本文關(guān)鍵詞：IL-1β、TNF-α及小膠質(zhì)細(xì)胞在大鼠視神經(jīng)挫傷模型中作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]建立損傷后不同時(shí)間點(diǎn)大鼠視神經(jīng)挫傷模型；結(jié)合小膠質(zhì)細(xì)胞的分布及活化狀況,研究自介素-1β、腫瘤壞死因子-α在視神經(jīng)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)的變化趨勢及與小膠質(zhì)細(xì)胞的關(guān)系；探討小膠質(zhì)細(xì)胞及其分泌的炎性因子白介素-1β、腫瘤壞死因子-僅在視神經(jīng)損傷后對(duì)視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的作用,從而為臨床治療外傷性視神經(jīng)損傷提供新的思路和方法。 [方法]雙眼正常的成年SPF級(jí)SD雌性大鼠51只隨機(jī)分為兩組,即正常組3只,手術(shù)組48只,在相同條件下進(jìn)行飼養(yǎng),手術(shù)組每只大鼠左眼為手術(shù)眼,做視神經(jīng)夾挫傷模型,用夾持力為50g的夾持鑷在球后約2mm處鉗夾視神經(jīng)10s,右眼為假手術(shù)眼,僅分離視神經(jīng),不進(jìn)行夾持。正常組不做任何處理。正常組3只左右眼做石蠟包埋切片；再將手術(shù)組按損傷后時(shí)間點(diǎn)分為4個(gè)亞組,分別為12h組(12只,損傷后12小時(shí))、24h組(12只,損傷后24小時(shí))、3d組(12只,損傷后3天)、5d組(12只,損傷后5天),在損傷后相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取下大鼠眼球,取材前先用水合氯醛過量麻醉大鼠,然后采用顯微有齒鑷及角鞏膜剪小心取下眼球并保留約5mm的視神經(jīng)。手術(shù)組取6只大鼠左右眼做石蠟包埋切片,另外6只取視網(wǎng)膜進(jìn)行勻漿提取RNA。正常組與手術(shù)組大鼠眼球石蠟包埋后切片,做視神經(jīng)及視網(wǎng)膜的HE染色、采用與FITC結(jié)合的lectin進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞熒光染色后觀察,同時(shí)進(jìn)行視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn),并計(jì)數(shù)各組視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。各組視網(wǎng)膜勻漿提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后采用Real-timePCR檢測視神經(jīng)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜白介素lp及腫瘤壞死因子-位mRNA含量的變化。結(jié)果采用SPSS19.0軟件進(jìn)行相應(yīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 [結(jié)果]對(duì)正常組及各時(shí)點(diǎn)手術(shù)組大鼠視網(wǎng)膜及視神經(jīng)進(jìn)行HE染色后發(fā)現(xiàn)：損傷后12h及24小時(shí)即可見RGC細(xì)胞層出現(xiàn)空泡腫脹,并可觀察到核固縮的視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,視神經(jīng)纖維稀疏扭曲,膠質(zhì)細(xì)胞排列紊亂；傷后3d和5d,部分RGC細(xì)胞核固縮明顯,染色加深,排列稀疏,視神經(jīng)纖維出現(xiàn)明顯水腫和空泡變性,神經(jīng)纖維及膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊,出現(xiàn)潰變。假手術(shù)眼視網(wǎng)膜及視神經(jīng)病理結(jié)構(gòu)與正常組相比無明顯變化。 TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)假手術(shù)及正常組大鼠視網(wǎng)膜各層僅見少量TUNEL(+)凋亡細(xì)胞,夾挫傷后3天時(shí)開始明顯增多(P0.05),夾挫傷后5d時(shí)RGC細(xì)胞凋亡率與正常組相比增高更加明顯(P0.05)。 使用結(jié)合FITC的lectin標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞,視神經(jīng)損傷后24h視網(wǎng)膜內(nèi)核及外核層開始出現(xiàn)lectin(+)細(xì)胞,并逐漸增多,細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài)的肥大細(xì)胞體,并出現(xiàn)向下延伸的突起。正常組視神經(jīng)上可觀察到少量lectin陽性的小膠質(zhì)細(xì)胞,沿視神經(jīng)索排列,較為規(guī)則,也為胞體較小的靜息形態(tài)。視神經(jīng)損傷后24h后,可觀察到視卒孛經(jīng)夾持部位出現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞的明顯增生,排列紊亂,細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài)的肥大細(xì)胞體。 采用Real-time PCR方法來檢測視神經(jīng)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜IL-1β及TNF-α mRNA含量的變化,發(fā)現(xiàn)視神經(jīng)夾持后24小時(shí),出現(xiàn)了視網(wǎng)膜IL-1p mRNA表達(dá)量的增高,3d時(shí)增高明顯,差異與假手術(shù)眼相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其上升趨勢同小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和遷移趨勢基本一致。視神經(jīng)夾持傷后5dIL-1βmRNA表達(dá)量回復(fù)至正常水平,和假手術(shù)眼相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。視神經(jīng)夾持后3d,出現(xiàn)了視網(wǎng)膜TNF-αmRNA表達(dá)量的顯著增高,且差異與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。視神經(jīng)夾持傷后5d TNF-αmRNA表達(dá)量回復(fù)至正常水平,和假手術(shù)眼相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。[結(jié)論]視神經(jīng)夾持損傷能夠?qū)е麓笫笠暰W(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡,且凋亡率隨時(shí)間變化不斷升高；視神經(jīng)夾持損傷后視神經(jīng)和視網(wǎng)膜均出現(xiàn)了小膠質(zhì)細(xì)胞的增生及遷移現(xiàn)象；大鼠視神經(jīng)夾持損傷后,視網(wǎng)膜中炎性因子白介素-1p、腫瘤壞死因子-伐表達(dá)增加,且與小膠質(zhì)細(xì)胞的增生情況及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡情況相符,說明小膠質(zhì)細(xì)胞活化后可能分泌白介素-1β及腫瘤壞死因子-α,參與且加重了視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。
【關(guān)鍵詞】：IL-1β TNF-α 小膠質(zhì)細(xì)胞 RGC細(xì)胞 外傷性視神經(jīng)損傷
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R774.1;R-332
【目錄】：

• 本文主要英漢縮略語對(duì)照表5-6
• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 引言11-15
• 材料與方法15-23
• 結(jié)果23-27
• 討論27-34
• 結(jié)論34
• 問題與展望34-35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述39-51
• 參考文獻(xiàn)46-51
• 發(fā)表文章情況51-52
• 致謝52

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：273855