發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 00:27

【摘要】：核受體，又叫核受體超家族(nuclear receptor superfamily)屬于配體活化的轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與了包括胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等生理過(guò)程。大多數(shù)核受體具有相似的結(jié)構(gòu)，其C端含保守的具有重要功能的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ligand bindingdomain，LBD)，，在這一部位還含有配體依賴的激活功能結(jié)構(gòu)域AF-2(activation function2)，在介導(dǎo)受體的二聚化、核定位、與輔活化子的結(jié)合方面起著重要的作用。核受體輔活化子(coactivator)是目前核受體研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)，它作為核受體和基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄復(fù)合物間的橋梁分子發(fā)揮作用并調(diào)諧了核受體的轉(zhuǎn)錄激活功能。人雌激素受體相關(guān)受體α_1(human estrogen receptor-related receptor α 1，hERR α 1)是核受體超家族中的孤兒受體(orphan receptor)成員，目前包括我們?cè)趦?nèi)的多家實(shí)驗(yàn)室根據(jù)自身的研究成果都推測(cè)ERR α 1是一種新發(fā)現(xiàn)的與乳腺癌有密切關(guān)系的核受體，但目前對(duì)其具體的調(diào)控機(jī)理尚未弄清。 為進(jìn)一步深入研究“孤兒”受體ERR α 1與乳腺癌的關(guān)系，弄清ERR α 1參與基因表達(dá)調(diào)控的詳細(xì)機(jī)理特別是核受體輔活化子在其中的作用，我們進(jìn)行了如下的研究： 1、利用基于酵母Ga14轉(zhuǎn)錄因子的雙雜交系統(tǒng)，以ERR α1的LBD為“誘餌”篩選了人乳腺組織cDNA文庫(kù)�？焖俟趋兰⌒图♀}蛋白I(fast skeletal muscletroponin I，troponin 12，TNNI2)與包括SRC-1在內(nèi)的一些已知輔活化子蛋白質(zhì)一起被篩選出來(lái)。 2、應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)研究TNNI2與多種核受體的相互作用。結(jié)果表明，TNNI2與PR、TR和RXR等多種核受體存在配體依賴的相互作用；與mERR α和hERRα 1等“孤兒”核受體的相互作用為配體非依賴，其中TNNI2與hERRα 1的相互作用最強(qiáng)。并且，TNNI2與核受體的相互作用依賴于核受體AF-2功能性結(jié)構(gòu)域的完整性。 3、在哺乳細(xì)胞瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，TNNI2顯示了對(duì)核受體ER、ERRα 1、SF1和ARP1反式激活功能的輔助活化作用，但單獨(dú)的TNN2并不顯著改變蟲(chóng)熒光素酶(1uciferase)報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄效率。這些結(jié)果證實(shí)了TNNI2具有核受體輔活化子的功能。 第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文 4.研究體外蛋白質(zhì)相互作用的GST捕獲實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了TNN12與ERR Ql的直接相 互作用。 5.在證實(shí)了TNNIZ與核受體存在相互作用并能輔助活化核受體的反式激活作用的 情況下，我們進(jìn)一步采用缺失突變技術(shù)，利用酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)證明了TNN12與 核受體的相互作用定位于TNN12蛋白的1一128氨基酸殘基，這一區(qū)域包括TNN12 的氨基末端、抑制區(qū)和LXXLL模體(motif)即NR盒。哺乳細(xì)胞瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染 實(shí)驗(yàn)也證實(shí)，TNN121一128缺失突變體能夠通過(guò)與野生型TNN12競(jìng)爭(zhēng)核受體的結(jié) 合，顯示其作為T(mén)NN12負(fù)顯性抑制劑的功能。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)1一128氨基 酸區(qū)域確實(shí)是TNN12的核受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。 以上的研究充分證明了TNN12與許多其它輔活化子一樣，以配體依賴(對(duì)類固醇 激素受體而言)或非依賴(對(duì)孤兒受體而言)的方式與核受體功能性AF一2結(jié)構(gòu)域相互 作用，并增強(qiáng)多種核受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄作用，TNNIZ與核受體的相互作用定位于TNN12 蛋白1一128氨基酸。本研究證實(shí)，TNNIZ是一種新的通用核受體輔活化子。 我們通過(guò)一系列研究首次揭示了INN12除介導(dǎo)和調(diào)節(jié)脊椎動(dòng)物橫紋肌收縮及參與 抑制新血管的形成外，尚存在作為核受體輔活化子參與基因表達(dá)調(diào)控的新功能。這項(xiàng) 研究發(fā)掘了INNIZ新的生物學(xué)功能，有助于我們對(duì)TNN12生物學(xué)功能的全面認(rèn)識(shí)，并 加深了人們對(duì)核受體包括ERR Ql基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制的認(rèn)識(shí)。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R341

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 陳健,陳敏,陳彬,周長(zhǎng)保,李渝萍,張艷,曹廷兵,周度金;hERR1在乳腺癌中的表達(dá)及其對(duì)芳香族化酶表達(dá)的調(diào)控[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年10期

2 黃翠芬,葉棋濃;蛋白質(zhì)間相互作用技術(shù)的研究近況[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);1998年01期

3 王吉村,藥立波;從蛋白質(zhì)相互作用研究方法的發(fā)展看人們認(rèn)識(shí)事物的過(guò)程[J];醫(yī)學(xué)與哲學(xué);2000年05期

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