【摘要】：白內(nèi)障目前是世界上影響人類健康的常見(jiàn)病,是我國(guó)的第一位致盲疾病,發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚,它的發(fā)生與多種因素有關(guān),是多種因素綜合作用的結(jié)果,比如晶狀體蛋白基因突變、氧化損傷、輻射、老化、葡萄糖、半乳糖等代謝障礙、脂質(zhì)過(guò)氧化物損傷等,發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是晶狀體發(fā)生混濁,影響光線經(jīng)過(guò)晶狀體的透射和折射,從而造成視物不清。 紫外線(ultraviolet, UV)是波長(zhǎng)為100～400nm的電磁波。它又分為:近紫外線UV-A(315～380nm)、遠(yuǎn)紫外線UV-B(290nm～315nm)和超短紫外線UV-C(290nm)三部分。紫外線引起白內(nèi)障的現(xiàn)象已在許多流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)研究中得到證實(shí)。研究表明,紫外線對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞的損傷作用隨波長(zhǎng)不同而不同,UV-A不能直接引起DNA的損傷,而UV-B作用較強(qiáng)。長(zhǎng)期遭受慢性紫外線輻射,亦被認(rèn)為是老年性白內(nèi)障形成的重要因素。高原地區(qū),尤其海拔最高的西藏高原由于空氣稀薄,對(duì)來(lái)自太陽(yáng)的紫外線的濾過(guò)作用弱,所受紫外線照射強(qiáng)度約為內(nèi)地的2.5倍;許多高原地區(qū)常年積雪,這也是反射紫外線的最強(qiáng)物質(zhì),雪域高原的強(qiáng)紫外線照射與強(qiáng)反射共同作用,使高原地區(qū)人群眼病發(fā)病率明顯高于內(nèi)地。資料表明老年性白內(nèi)障發(fā)病率與海拔的增高成正比,如西藏地區(qū)白內(nèi)障的發(fā)病率與種族無(wú)關(guān),而與海拔有關(guān);日本對(duì)紫外線白內(nèi)障研究表明:UV-B引起晶狀體皮質(zhì)及核混濁,相對(duì)年輕女性晶狀體核混濁比皮質(zhì)混濁顯著。但有研究顯示皮質(zhì)及后囊下白內(nèi)障與紫外線輻射量有關(guān),核性白內(nèi)障與其無(wú)關(guān)。 眾所周知,臭氧層是UV-B輻射的主要屏障,由于臭氧層的減少和紫外線輻射的增加,導(dǎo)致白內(nèi)障更高的發(fā)病率。資料顯示臭氧層減少1%的厚度,白內(nèi)障的發(fā)生率將增加0.7%±0.1%;美國(guó)一項(xiàng)研究表明臭氧層減少1%的厚度,白內(nèi)障的發(fā)生率將增加7%～10%,到2050年隨著5～20%臭氧層的破壞,美國(guó)出現(xiàn)皮質(zhì)性白內(nèi)障患者將增加到16.7～83萬(wàn)例。紫外線對(duì)晶狀體的影響是長(zhǎng)期、慢性蓄積的氧化損傷過(guò)程。 本課題組前期研究成果表明二硫蘇糖醇(dithiothreitol, DTT)具有良好的抗晶狀體蛋白變性的作用,DTT是化學(xué)還原劑,可解開(kāi)蛋白分子內(nèi)及蛋白分子間的二硫鍵,并作為巰基保護(hù)劑,能抑制晶狀體蛋白的熱變性及非特異性聚集及熱變性。前期研究已證明該藥物在第8天用藥后使硒性核性白內(nèi)障核區(qū)斑塊明顯小于對(duì)照組。 既然前期試驗(yàn)結(jié)果表明DTT硒性白內(nèi)障晶狀體混濁有明顯的抑制作用,那么對(duì)于紫外線引起的白內(nèi)障是否也有效果呢,本實(shí)驗(yàn)將對(duì)DTT對(duì)紫外線白內(nèi)障的療效做初步評(píng)價(jià),并對(duì)紫外線白內(nèi)障的發(fā)病機(jī)理進(jìn)行探討。這些研究的基礎(chǔ)需要建立紫外線白內(nèi)障的動(dòng)物模型,基于此,需要建立快速、穩(wěn)定的紫外線白內(nèi)障大鼠模型。 目前常用的構(gòu)建紫外線白內(nèi)障模型的方法主要是采用豚鼠,且造模周期長(zhǎng),不適合快速造模、觀察晶狀體混濁變化以及篩選干預(yù)藥物所需。本文改良紫外誘導(dǎo)SD大鼠造模方法,應(yīng)對(duì)快速造模需要。國(guó)外關(guān)于紫外線白內(nèi)障造模的研究較多,但多為探討輻射對(duì)指標(biāo)造模結(jié)果的影響而非加快造模方法。因此本課題將細(xì)致研究紫外線白內(nèi)障模型的建立,探索造模優(yōu)化條件,盡量縮短造模時(shí)間,為后續(xù)研究提供便利,并以此為基礎(chǔ),進(jìn)一步研究課題組前期藥物DTT對(duì)紫外線白內(nèi)障的療效。 研究目的: 探討紫外線輻射致SD大鼠白內(nèi)障的實(shí)驗(yàn)方法,優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,初步研究紫外線致白內(nèi)障的機(jī)理及自行配制的二硫蘇糖醇(DTT)滴眼液對(duì)于SD大鼠紫外線白內(nèi)障的抑制作用。 主要方法: 1.紫外線白內(nèi)障大鼠模型的建立 SD大鼠,6W齡,置于300nmUVB輻射,每天用裂隙燈顯微鏡觀察大鼠晶狀體的形態(tài)變化,對(duì)照紫外線白內(nèi)障分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)。至造模成功白內(nèi)障形成后,取出晶狀體離體培養(yǎng),用暗視野電子顯微鏡觀察晶狀體的結(jié)果,經(jīng)過(guò)處理后用透射及掃描電子顯微鏡觀察晶狀體的超微結(jié)構(gòu)。 2.紫外線致白內(nèi)障機(jī)理研究 剝離造模成功的大鼠眼晶狀體和空白對(duì)照組大鼠眼晶狀體,用過(guò)氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、還原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone, GSH)試劑盒測(cè)定兩組鼠眼晶狀體中SOD和GSH含量,并取血送檢血清生化指標(biāo),可以反映出輻射紫外線和正常對(duì)照組中酶含量及血清離子的變化。 3.DTT的療效評(píng)估 紫外輻射造模,SD大鼠左眼均作為實(shí)驗(yàn)用藥組,滴用我室自制的二硫蘇糖醇(DTT)眼液;同鼠右眼作對(duì)照。在造模過(guò)程中,左眼每天滴用DTT眼液4次,每次1滴,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保持用藥。右眼僅輻射紫外線但不用藥。定期觀察大鼠雙眼白內(nèi)障的發(fā)生發(fā)展過(guò)程,至紫外線白內(nèi)障模型建立成功后,裂隙燈觀察對(duì)比雙眼晶狀體的形態(tài)變化,而后取出晶狀體做免疫組化,經(jīng)過(guò)處理后用掃描電子顯微鏡觀察晶狀體的超微結(jié)果,并測(cè)定兩組晶狀體中SOD、GSH含量進(jìn)行對(duì)比。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 1.將出生后6W的雄性SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.7ml,置于300nm紫外線燈下輻射15min,(雙星明眼液和新福林眼液擴(kuò)瞳后,每日輻射雙眼一次),輻照度1×103uw/cm2,2天后即有少數(shù)大鼠發(fā)生輕度晶狀體混濁,7天后可成功制作紫外線白內(nèi)障動(dòng)物模型,絕大多數(shù)白內(nèi)障為皮質(zhì)性白內(nèi)障。 2.輻射紫外線致白內(nèi)障組鼠眼晶狀體中SOD、GSH含量明顯比空白對(duì)照組低;血清生化指標(biāo)Ca2+、Na+高于空白對(duì)照組,K、P、Mg2+低于空白對(duì)照組。 3.紫外線輻射2天實(shí)驗(yàn)大鼠右眼即可發(fā)生輕度晶狀體混濁,7天造模成功,右眼幾乎100%發(fā)生皮質(zhì)性白內(nèi)障,可以觀察到晶狀體體積增大,皮質(zhì)明顯混濁,少數(shù)核輕度混濁,相對(duì)清澈。左眼DTT藥物組白內(nèi)障皮質(zhì)混濁程度明顯比右眼對(duì)照組減輕,參考文獻(xiàn)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),右眼對(duì)照組均在2級(jí)左右,右眼大都3級(jí),少數(shù)達(dá)到4級(jí)。 結(jié)論: 1.300nmUVB每天照射SD大鼠15min,連續(xù)7天,可成功制作紫外線白內(nèi)障模型,多數(shù)為皮質(zhì)性白內(nèi)障。 2.DTT對(duì)SD大鼠紫外線白內(nèi)障具有良好的抑制作用。
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二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文二）透射和掃描電子顯微鏡透射電鏡：藥物干預(yù)組左眼 SD 大鼠晶狀體前皮質(zhì)和后囊下區(qū)可見(jiàn)排列較為規(guī)則狀體纖維（圖 3A）；而同一大鼠的未用藥組右眼的晶狀體纖維排列不整齊、不規(guī)則（C）。掃描電鏡：藥物干預(yù)組左眼 SD 大鼠晶狀體前皮質(zhì)和后囊下區(qū)可見(jiàn)排列相對(duì)規(guī)則狀纖維結(jié)構(gòu)，且形狀、大小相同（圖 3B）；而同一大鼠的未用藥組右眼的相同區(qū)域不規(guī)則形狀的晶狀體纖維以及很多的表面突起（圖 3D）。AB
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R776.1;R-332

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 陸勤康,楊亞波,王惠云,童奇湖,董曉峰;可調(diào)節(jié)人工晶狀體眼早期視覺(jué)質(zhì)量的臨床研究[J];浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年05期

2 曾慶廣!援藏醫(yī)療隊(duì)成員,左志高!援藏醫(yī)療隊(duì)成員,楊長(zhǎng)年!援藏醫(yī)療隊(duì)成員,郭寶鳳!援藏醫(yī)療隊(duì)成員,趙宏,唐秀俠,秦曉平;駐西藏高原武警官兵晶狀體混濁度調(diào)查分析[J];武警醫(yī)學(xué);2001年03期

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本文編號(hào)：2578765