【摘要】： 研究目的:觀察人胎盤(pán)滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖與細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響,探討滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)淋巴細(xì)胞輔助T細(xì)胞細(xì)胞因子(Th)1/Th2平衡的影響,探討滋養(yǎng)細(xì)胞源性影響T細(xì)胞的效應(yīng)分子。 材料與方法:分離早孕胎盤(pán)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞,制備滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基,供淋巴細(xì)胞培養(yǎng)用。分離、純化健康未孕婦女T淋巴細(xì)胞。以植物血凝素刺激T淋巴細(xì)胞,~3H—胸腺嘧啶摻入法測(cè)定T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng),酶聯(lián)免疫吸附分析法測(cè)定淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子,放射免疫分析法測(cè)定培養(yǎng)基雌二醇、孕酮、人絨毛膜促性腺激素和人胎盤(pán)生乳素濃度。高效液相分析測(cè)定培養(yǎng)基中色氨酸濃度。建立早孕絨毛組織培養(yǎng),制備絨毛組織條件培養(yǎng)基,經(jīng)濃縮、電泳、切膠、膠內(nèi)酶解和脫鹽等處理,鳥(niǎo)槍策略串聯(lián)質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)譜。質(zhì)譜測(cè)序數(shù)據(jù)查人蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù),查庫(kù)結(jié)果進(jìn)行GOA分類(lèi),并查PUBMED醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)庫(kù)、復(fù)習(xí)文獻(xiàn)。 結(jié)果:(1)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基中檢測(cè)到人絨毛膜促性腺激素、人胎盤(pán)生乳素、雌二醇和孕酮,而對(duì)照培養(yǎng)基中未檢測(cè)到4種激素。對(duì)照培養(yǎng)基的色氨酸濃度為19.01±1.04μmol/L,條件培養(yǎng)基為3.79±0.45μmol/L,當(dāng)制備條件培養(yǎng)基時(shí)添加特異性吲哚胺2,3雙氧化酶(IDO)抑制物1-甲基色氨酸,條件培養(yǎng)基中色氨酸濃度為15.40±2.66μmol/L。(2)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基顯著抑制T淋巴細(xì)胞~3H—胸腺嘧啶摻入率,隨著淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中條件培養(yǎng)基含量的增加,淋巴細(xì)胞~3H—胸腺嘧啶摻入率逐步降低;制備條件培養(yǎng)基時(shí)添加特異性抑制劑1-甲基色氨酸抑制IDO活性或者向條件培養(yǎng)基添加色氨酸至生理濃度均顯著減弱條件培養(yǎng)基對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用,淋巴細(xì)胞~3H—胸腺嘧啶的摻入率得到部分恢復(fù)。(3)、滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基顯著減少淋巴細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子(TNF)α,并顯著增加淋巴細(xì)胞產(chǎn)生白介素(IL)-10。輔助T細(xì)胞1(Th1)/Th2比值即TNF-α/IL-10比值顯著降低。(4)、根據(jù)質(zhì)譜數(shù)據(jù)檢索人類(lèi)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)得到1869個(gè)肽段,對(duì)應(yīng)548個(gè)蛋白質(zhì)。經(jīng)GOA分類(lèi)分析,在總共548個(gè)蛋白質(zhì)中,細(xì)胞內(nèi)/膜蛋白質(zhì)285個(gè),占52%:細(xì)胞外蛋白質(zhì)72個(gè),占13%;細(xì)胞定位不明的蛋白質(zhì)127個(gè),占23%;其它蛋白質(zhì)64個(gè),占12%。(5)、在總共72個(gè)細(xì)胞外蛋白質(zhì)中,血漿蛋白質(zhì)31個(gè),占43%;細(xì)胞外基質(zhì)蛋白21個(gè),占29%;滋養(yǎng)細(xì)胞源性蛋白質(zhì)7個(gè),占10%;來(lái)源不明的蛋白質(zhì)13個(gè),占18%。(6)、10種蛋白質(zhì)對(duì)T淋巴細(xì)胞具有抑制作用:人絨毛膜促性腺激素、人胎盤(pán)生乳素、妊娠特異性β1糖蛋白、甲胎蛋白、glycodelin、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2、thrombospondin-1、色素上皮衍生因子、巨噬細(xì)胞遷移抑制因子和galectin-1。 結(jié)論:滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物抑制T淋巴細(xì)胞增殖,增加T淋巴細(xì)胞IL-10產(chǎn)生,減少TNF-α產(chǎn)生,降低Th1/Th2比值。IDO介導(dǎo)的選擇性快速降解色氨酸是滋養(yǎng)細(xì)胞抑制T淋巴細(xì)胞增殖的機(jī)制之一。滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基是多種免疫調(diào)節(jié)物的混合體,其免疫抑制作用是這些免疫調(diào)節(jié)物協(xié)同作用的結(jié)果。
【圖文】：

滋養(yǎng)細(xì)胞條件培養(yǎng)基顯著減少淋巴細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子。(110.26士15· 09pg/mlVS22.00士 0.58pg/ml，p二0.02)，并顯著增加淋巴細(xì)胞產(chǎn)生白介素一10(21.94士 0.54pg/mlvs46.30士 3.39pg/ml，P<0.001)。圖2。輔助T細(xì)胞1(Thl)/ThZ比值即TNF一a/IL一10t匕值顯著降低(5.03士 0.69VS0.48士 0.01

素一10(21.94士 0.54pg/mlvs46.30士 3.39pg/ml，，P<0.001)。圖2。輔助T細(xì)胞1(Thl)/ThZ比值即TNF一a/IL一10t匕值顯著降低(5.03士 0.69VS0.48士 0.01，P<0.001)。圖3。二二“0廠二廠一~一一-—門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)門(mén)
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2568384