【摘要】： 雜色曲霉素(Sterigmatocystin, ST)是由雜色曲霉、構(gòu)巢曲霉等產(chǎn)生的一種具有致癌性的代謝產(chǎn)物。雜色曲霉素產(chǎn)生菌及ST在世界各地糧食及飼料中的污染比較普遍,甚至在潮濕居所的地毯中也檢出了ST的污染。研究表明,飼喂含有ST的飼料或灌喂ST均可誘發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺腺癌的發(fā)生。ST可以誘發(fā)體外培養(yǎng)人胚胃粘膜細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。除致癌作用外,ST對(duì)免疫細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞因子分泌、抗原遞呈等均有一定影響。 免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外界因素侵害的重要屏障,許多致病因素可通過(guò)削弱甚至摧毀機(jī)體的免疫功能而致病。某些致癌因素也可通過(guò)直接和間接作用造成機(jī)體免疫細(xì)胞改變,特別是免疫監(jiān)視機(jī)能的改變而發(fā)揮致癌作用。目前有關(guān)ST誘發(fā)免疫損傷的機(jī)制研究多集中在淋巴細(xì)胞細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞因子分泌等直接的免疫反應(yīng)方面,對(duì)免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞的研究甚少。因此,在整體水平和細(xì)胞水平上探討給予ST作用對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的影響及其機(jī)制對(duì)進(jìn)一步揭示ST的致癌機(jī)理和其它生物效應(yīng)具有一定學(xué)術(shù)意義。 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分,在防止自身免疫,保持機(jī)體的自身耐受性中發(fā)揮著決定性作用,但同時(shí)也具有減弱機(jī)體對(duì)腫瘤和感染免疫反應(yīng)的作用。FoxP3陽(yáng)性表達(dá)是鑒定調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的重要標(biāo)志。樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)是機(jī)體免疫系統(tǒng)中一種重要的抗原遞呈細(xì)胞(APC),可與T、B和NK細(xì)胞相互作用,并促進(jìn)其激活、分化和產(chǎn)生效應(yīng);誘導(dǎo)或調(diào)節(jié)初級(jí)或次級(jí)免疫反應(yīng)。漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDCs)是樹(shù)突狀細(xì)胞家族中的成員之一,在慢性炎癥及自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(calcineurin, CaN)是Ca2+依賴的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的關(guān)鍵蛋白,在體內(nèi)參與了多種淋巴細(xì)胞的激活;皮膚T細(xì)胞趨化因子27 (Ccl27)是腫瘤相關(guān)T淋巴細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)因子,它們的活性變化與多種皮膚疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 迄今為止,文獻(xiàn)中尚未見(jiàn)有關(guān)ST對(duì)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞,以及對(duì)CaN和Ccl27表達(dá)影響的報(bào)道。為進(jìn)一步探討ST對(duì)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的影響及其可能機(jī)制,本研究在前期實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,在整體水平上觀察了ST急性作用對(duì)BALB/c小鼠外周血、胸腺、脾臟和皮膚中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和CD123+/BDCA2+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的影響,以及小鼠皮膚中CaN和Ccl27表達(dá)變化;在細(xì)胞水平上研究了ST急性作用對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的影響,同時(shí)探討了MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在ST影響FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞中的作用。 本研究論文共分為三個(gè)部分: 1雜色曲霉素對(duì)BALB/c小鼠外周血及免疫器官中免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞的影響研究 目的:探討腹腔注射ST對(duì)BALB/c小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞及免疫器官中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的影響。 方法:按照3μg/kg、30μg/kg、300μg/kg、3000μg/kg經(jīng)腹腔注射一次性給予雄性BALB/c小鼠ST處理,眼球放血收集小鼠外周靜脈全血,采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離小鼠外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞;處死小鼠,胸腺、脾臟組織完整取材。采用FCM檢測(cè)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞、胸腺和脾臟內(nèi)CD4+、CD8+和FoxP3+T淋巴細(xì)胞百分率;免疫組化檢測(cè)小鼠胸腺和脾臟內(nèi)FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及CD123+/BDCA2+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量變化情況;蛋白免疫印跡和RT-PCR方法檢測(cè)FoxP3、CD123和BDCA2在蛋白和mRNA水平的影響。 結(jié)果: 1.1 ST對(duì)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+、CD8+和FoxP3+T淋巴細(xì)胞的影響 FCM檢測(cè)結(jié)果顯示,ST處理24 h,與溶劑對(duì)照組相比,不同劑量ST對(duì)小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞百分率均沒(méi)有明顯影響。但隨ST濃度的增加,FoxP3+T淋巴細(xì)胞百分率呈逐漸增高的趨勢(shì)(r=0.862, n=5, P0.01)。 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,給予ST作用24 h后,與溶劑對(duì)照組相比,小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3 mRNA表達(dá)明顯升高(P0.05);并且與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.944, n=5, P0.01)。 1.2 ST對(duì)小鼠胸腺和脾臟內(nèi)FoxP3+T淋巴細(xì)胞的影響 FCM檢測(cè)結(jié)果顯示,ST處理24 h,與溶劑對(duì)照組相比,不同劑量ST對(duì)小鼠胸腺CD4+ T淋巴細(xì)胞百分率沒(méi)有明顯影響,但小劑量ST(3μg/kg)處理組小鼠胸腺CD8+ T淋巴細(xì)胞百分率可見(jiàn)明顯下降(P0.05)。3和30μg/kg ST處理組脾臟CD4+和CD8+ T淋巴細(xì)胞百分率均有明顯升高(P0.05)。而300μg/kg和3000μg/kg ST處理組胸腺和脾臟CD4+和CD8+ T淋巴細(xì)胞百分率均無(wú)明顯變化。但各不同劑量ST處理均可明顯提高胸腺和脾臟FoxP3+ T淋巴細(xì)胞的百分率,隨ST濃度的增加,胸腺和脾臟FoxP3+T淋巴細(xì)胞百分率呈逐漸增高的趨勢(shì)(P0.05)。 免疫組化結(jié)果顯示,ST 30μg/kg、300μg/kg和3000μg/kg劑量組胸腺內(nèi)淋巴細(xì)胞FoxP3+T淋巴細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)明顯高于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(P0.05);ST各處理組脾臟內(nèi)FoxP3+ T淋巴細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)也均明顯高于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(P0.05)。在0～3000μg/kg ST濃度范圍內(nèi),胸腺和脾臟FoxP3+T淋巴細(xì)胞數(shù)與ST處理濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(胸腺: r=0.831, n=5, P0.01;脾: r=0.873, n=5, P0.01)。 Western印跡檢測(cè)結(jié)果顯示,與溶劑對(duì)照組相比,在0～3000μg/kg ST濃度范圍內(nèi),胸腺和脾臟淋巴細(xì)胞FoxP3表達(dá)量逐漸升高,與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(胸腺: r=0.658, n=5, P0.01;脾: r=0.621, n=5, P0.01)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,給予ST作用24 h后,小鼠胸腺和脾臟淋巴細(xì)胞FoxP3 mRNA表達(dá)明顯升高(P0.05)。 1.3 ST對(duì)小鼠胸腺和脾臟內(nèi)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的影響 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,30、300和3000μg/kg ST組胸腺細(xì)胞CD123陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)明顯低于溶劑對(duì)照組(P0.05);而在脾臟細(xì)胞CD123陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)明顯高于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(P0.05);ST中、高劑量處理組胸腺細(xì)胞BDCA2陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)明顯低于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(P0.05);而各ST處理組脾臟細(xì)胞BDCA2陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)均明顯高于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(P0.05);小鼠胸腺和脾臟CD123+和BDCA2+細(xì)胞數(shù)的變化與ST的處理濃度存在明顯劑量依賴關(guān)系。 Western印跡檢測(cè)結(jié)果顯示,與溶劑對(duì)照組相比,在0～3000μg/kg ST濃度范圍內(nèi),胸腺淋巴細(xì)胞CD123和BDCA2蛋白的表達(dá)量逐漸降低,并與ST濃度呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(CD123: r=-0.825, n=5, P0.01; BDCA2:r=-0.831, n=5, P0.01);而脾臟淋巴細(xì)胞CD123和BDCA2蛋白的表達(dá)量則逐漸升高(CD123: r=0.819, n=5, P0.01; BDCA2: r=0.756, n=5, P0.01)。 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,給予ST作用24 h后,小鼠胸腺細(xì)胞CD123 mRNA表達(dá)較溶劑對(duì)照組明顯降低(P0.05),并與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=-0.944, n=5, P0.01);而脾臟細(xì)胞的CD123 mRNA則均較溶劑對(duì)照組明顯升高(P0.05),并與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.906, n=5, P0.01)。 可見(jiàn)ST對(duì)胸腺和脾臟漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的影響具有器官特異性,不同器官影響不同。 2 ST對(duì)小鼠皮膚組織CaN、Ccl27表達(dá)以及FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞影響的研究 目的:探討一次性腹腔注射給予ST對(duì)小鼠皮膚組織CaN和Ccl27表達(dá),以及FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的影響。 方法:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型同前一部分,全層皮膚1×1cm2取材。取部分皮膚組織4%多聚甲醛固定4 h后,常規(guī)石蠟切片制備,按S-P法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)小鼠皮膚組織CaN+、Ccl27+、FoxP3+細(xì)胞數(shù)量變化;取100 mg皮膚組織加入500μL蛋白裂解液,提取皮膚組織總蛋白,Western blot方法檢測(cè)CaN、Ccl27、FoxP3蛋白的表達(dá);部分皮膚組織液氮凍存,提取組織RNA,RT-PCR方法檢測(cè)CaN、Ccl27、FoxP3 mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果: 2.1皮膚組織病理學(xué)變化 病理形態(tài)學(xué)觀察可見(jiàn)各ST處理組動(dòng)物與溶劑對(duì)照組相比,皮膚組織結(jié)構(gòu)均無(wú)明顯病理性改變。 2.2 ST對(duì)小鼠皮膚組織細(xì)胞CaN和Ccl27表達(dá)的影響 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,30、300和3000μg/kg組CaN陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)明顯高于溶劑對(duì)照組(P0.05),并且與ST的處理濃度存在劑量依賴關(guān)系(r=0.752, n=5, P0.01);而Ccl27陽(yáng)性標(biāo)記指數(shù)與相應(yīng)溶劑對(duì)照組相比,均沒(méi)有明顯差別。 Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,與溶劑對(duì)照組相比,隨著ST處理濃度的增加,CaN蛋白表達(dá)逐漸升高,其中30,300,3000μg/kg ST組蛋白表達(dá)升高尤為明顯(P0.05),并與ST的處理濃度存在正相關(guān)關(guān)系(r=0.931, n=5, P0.01)。同時(shí),ST 30,300和3000μg/kg處理后相對(duì)Ccl27蛋白相對(duì)表達(dá)量與溶劑對(duì)照組相比有升高趨勢(shì),但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,給予ST作用24h后,小鼠表皮細(xì)胞CaN mRNA的表達(dá)明顯高于溶劑對(duì)照組,并且與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.843, n=5, P0.01);但Ccl27 mRNA的表達(dá)沒(méi)有明顯變化。 2.3 ST對(duì)小鼠皮膚內(nèi)FoxP3+T淋巴細(xì)胞的影響 免疫組化染色結(jié)果表明,ST 300μg/kg和3000μg/kg處理組FoxP3+T淋巴細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)分別為3.30±0.675和4.70±0.949,明顯高于相應(yīng)溶劑對(duì)照組(1.40±0.966, P0.05),并且在ST 0～3000μg/kg濃度范圍內(nèi),隨著ST處理濃度的升高,FoxP3+T淋巴細(xì)胞標(biāo)記指數(shù)也逐漸增高(r=0.757, n=5, P0.01)。 Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,腹腔給予ST作用24 h后,小鼠皮膚組織FoxP3蛋白的表達(dá)量明顯升高(P0.05),并與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.781, n=5, P0.01)。 RT-PCR檢測(cè)結(jié)果表明,給予ST作用24 h后,小鼠皮膚組織FoxP3 mRNA的表達(dá)明顯升高(P0.05),并與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.749, n=5, P0.01)。 3雜色曲霉素對(duì)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的影響及其可能的機(jī)制研究 目的:探討一次性給予ST處理對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的影響及其可能的機(jī)制 方法: 采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離人外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞(HPBMCs),培養(yǎng)48 h后,用10% 1640培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為(1~2)×108個(gè)/L,接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。更換2%低血清1640培養(yǎng)基,實(shí)驗(yàn)組分別給予ST 100μg/L、500μg/L、1000μg/L和2000μg/L處理,溶劑對(duì)照組和對(duì)照組分別給予DMSO (0.2 mL/L)和生理鹽水處理,繼續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)24 h。收集細(xì)胞,采用FCM方法檢測(cè)HPBMCs中CD4+、CD8+和FoxP3+T淋巴細(xì)胞百分率;采用Western blot方法檢測(cè)HPBMCs中FoxP3、JNK、ERK、p38蛋白表達(dá)情況和JNK、ERK和p38的磷酸化水平。采用RT-PCR方法檢測(cè)HPBMCs中FoxP3、JNK、ERK和p38 mRNA的表達(dá)情況。 取培養(yǎng)48 h后HPBMCs用10% 1640調(diào)整細(xì)胞濃度為(1~2)×108個(gè)/L,接種于接種于培養(yǎng)瓶。實(shí)驗(yàn)分為5組,即對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、ST處理組、阻斷劑組和阻斷劑預(yù)處理+ST處理組。細(xì)胞培養(yǎng)24 h后,更換2%低血清1640培養(yǎng)基,阻斷劑組分別加入MAPK特異性阻斷劑SP600125 (1μM)、PD98059 (50μM)和SB203580 (0.5μM)。30 min后ST處理組和阻斷劑預(yù)處理+ST處理組分別給予1000μg/L ST,溶劑對(duì)照組和對(duì)照組給予DMSO (0.1 mL/L)和生理鹽水處理。HPBMCs培養(yǎng)24 h后離心收細(xì)胞,采用Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白表達(dá)和JNK、ERK、p38磷酸化水平。采用RT-PCR方法檢測(cè)HPBMCs中FoxP3 mRNA的表達(dá)情況。 結(jié)果: 3.1 ST對(duì)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+、CD8+和FoxP3+T淋巴細(xì)胞影響 FCM檢測(cè)結(jié)果顯示,ST處理24 h后,與溶劑對(duì)照組相比,不同劑量ST對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞百分率均沒(méi)有明顯影響。但ST處理可明顯提高FoxP3+T淋巴細(xì)胞的百分率,并且在0～2000μg/L濃度范圍內(nèi),隨著ST濃度的增加,FoxP3+T淋巴細(xì)胞百分率呈逐漸增高的趨勢(shì)(r=0.920, n=3, P0.01)。 3.2體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3蛋白表達(dá)的變化情況 Western檢測(cè)結(jié)果表明,在0～2000μg/L ST濃度范圍內(nèi),隨著ST處理濃度的升高,細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白表達(dá)逐漸升高(r=0.868, n=3, P0.01)。 3.3體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3 mRNA的變化情況 RT-PCR檢測(cè)表明,給予ST作用24 h后,與溶劑對(duì)照組相比,體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞FoxP3 mRNA表達(dá)明顯升高(P0.05);并且與ST濃度有明顯劑量依賴關(guān)系(r=0.793, n=3, P0.01)。 3.4 ST對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響 3.4.1 ST對(duì)細(xì)胞內(nèi)JNK、ERK和p38表達(dá)的影響 Western檢測(cè)結(jié)果表明,與溶劑對(duì)照組相比,不同濃度ST作用于人外周血單個(gè)核細(xì)胞24 h,對(duì)細(xì)胞內(nèi)JNK、ERK和p38蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯影響。但在0～2000μg/L ST濃度范圍內(nèi),隨著ST處理濃度的升高,細(xì)胞內(nèi)JNK和ERK的磷酸化水平也逐漸升高(JNK: r=0.831, n=3, P0.01;ERK: r=0.687, n=3, P0.01),而p38的磷酸化水平則隨著ST處理濃度升高而逐漸降低(r=-0.661, n=3, P0.01)。 RT-PCR結(jié)果顯示,與溶劑對(duì)照組相比,不同濃度ST作用24 h,對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)JNK、ERK和p38 mRNA的表達(dá)也沒(méi)有明顯影響。 3.4.2 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路特異性阻斷劑對(duì)ST誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)JNK、ERK和p38表達(dá)變化的影響 Western檢測(cè)結(jié)果表明,SP600125和PD98059分別能夠明顯阻斷ST誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)JNK和ERK的磷酸化水平升高作用(P0.05)。1000μg/L ST和SB203580 (0.5μM)單獨(dú)處理,均可明顯抑制細(xì)胞內(nèi)p38的磷酸化水平(P0.05),0.5μM SB203580預(yù)處理可使1000μg/L ST誘導(dǎo)的p38的磷酸化水平降低更顯著(P0.05)。 3.5 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)通路對(duì)ST誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增多的影響 3.5.1 JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活對(duì)ST誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增多的影響 Western檢測(cè)結(jié)果表明, SP600125預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白的表達(dá)則明顯高于溶劑對(duì)照組(P0.05),而與1000μg/L ST處理組沒(méi)有明顯差別(P0.05)。 RT-PCR結(jié)果顯示,SP600125預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3 mRNA的表達(dá)與1000μg/L ST處理組也沒(méi)有明顯差別(P0.05),同樣明顯高于溶劑對(duì)照組(P0.05)。 結(jié)果提示,SP600125預(yù)處理對(duì)ST誘導(dǎo)的FoxP3在蛋白和mRNA水平表達(dá)升高的作用沒(méi)有明顯影響。 3.5.2 ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活對(duì)ST誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增多的影響 Western檢測(cè)結(jié)果表明,PD98059預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白的表達(dá)較1000μg/L ST處理組明顯降低(P0.05),而與溶劑對(duì)照組沒(méi)有差別(P0.05)。 RT-PCR結(jié)果顯示,PD98059預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3 mRNA的表達(dá)也明顯低于1000μg/L ST處理組(P0.05),而與溶劑對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異(P0.05)。 結(jié)果提示,PD98059預(yù)處理可以阻斷ST誘導(dǎo)的FoxP3在蛋白和mRNA水平表達(dá)升高的作用。 3.5.3 p38信號(hào)傳導(dǎo)通路的受抑制對(duì)ST誘導(dǎo)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞增多的影響 Western檢測(cè)結(jié)果表明,與溶劑對(duì)照組相比,SB203580處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白的表達(dá)量明顯升高(P0.05),SB203580預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3蛋白的表達(dá)也明顯高于溶劑對(duì)照組,同時(shí)較1000μg/L ST處理組也明顯升高(P0.05)。 RT-PCR結(jié)果顯示,SB203580預(yù)處理+1000μg/L ST處理組細(xì)胞內(nèi)FoxP3 mRNA的表達(dá)明顯高于1000μg/L ST處理組和溶劑對(duì)照組(P0.05)。 結(jié)果提示,SB203580預(yù)處理可以促進(jìn)ST誘導(dǎo)的FoxP3在蛋白和mRNA水平表達(dá)升高的作用。 結(jié)論: 1.一次腹腔注射ST處理24 h,可使BALB/c小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增多,并且上調(diào)FoxP3在mRNA水平的表達(dá)。 2.一次腹腔注射ST處理24 h,可使BALB/c小鼠胸腺和脾臟內(nèi)FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增多,并且上調(diào)FoxP3在蛋白和mRNA水平的表達(dá)。 3.腹腔注射ST對(duì)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的影響具有器官特異性�？墒笲ALB/c小鼠胸腺內(nèi)CD123+/BDCA2+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)明顯減少,而脾臟內(nèi)CD123+/BDCA2+漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)明顯增多。同時(shí)可以下調(diào)BALB/c小鼠胸腺內(nèi)CD123和BDCA2蛋白及CD123 mRNA的表達(dá);而上調(diào)小鼠脾臟內(nèi)CD123和BDCA2蛋白及CD123 mRNA的表達(dá)。 4.一次腹腔注射ST處理24 h,可使BALB/c小鼠皮膚CaN在蛋白和mRNA水平上的表達(dá)增高;但對(duì)Ccl27的表達(dá)沒(méi)有明顯影響。 5.一次腹腔注射ST處理24 h,可使BALB/c小鼠皮膚FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞增多,并且上調(diào)FoxP3在蛋白和mRNA水平上的表達(dá)。 6.一次性給予ST處理24 h,可使體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增多,并且上調(diào)FoxP3在蛋白和mRNA水平的表達(dá)。 7.一次性給予ST處理24 h,可以激活體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞JNK和ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,同時(shí)抑制p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。 8.給予JNK特異性阻斷劑SP600125預(yù)處理對(duì)ST誘導(dǎo)FoxP3的表達(dá)升高沒(méi)有影響;給予ERK特異性阻斷劑PD98059預(yù)處理可以阻斷ST對(duì)FoxP3表達(dá)升高作用;給予p38特異性阻斷劑SB203580預(yù)處理對(duì)ST誘導(dǎo)的FoxP3表達(dá)升高有明顯的協(xié)同作用。ERK和p38信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與介導(dǎo)ST誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞中FoxP3表達(dá)升高的作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃向華,張祥宏,嚴(yán)霞,尹桂然,譚延偉,李月紅,劉艷麗,楊建柱,王俊靈,王鳳榮;雜色曲霉素對(duì)體外培養(yǎng)人外周血白細(xì)胞介素Ⅱ分泌影響的研究[J];衛(wèi)生研究;2002年02期

2 謝同欣，張祥宏，，嚴(yán)霞，王鳳榮;雜色曲霉素體外對(duì)人胃粘膜的致癌作用[J];腫瘤防治研究;1996年06期

3 邢凌霄,張祥宏,李月紅,左連富,嚴(yán)霞,王俊靈,王鳳榮;雜色曲霉素對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞TAP1及LMP2基因表達(dá)的影響[J];中國(guó)腫瘤臨床;2004年04期

本文編號(hào)：2568166