【摘要】： 富氫水對(duì)大鼠腸缺血再灌注損傷以及四氯化碳誘導(dǎo)的肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制 背景：腸缺血再灌注(intestinal ischemia-reperfusion, IIR)損傷和藥物／化學(xué)性肝損傷(drug/chemical induced liver injury)是燒傷科以及危重病領(lǐng)域常見(jiàn)的兩個(gè)臨床問(wèn)題。嚴(yán)重?zé)齻�、急性失血、休克、膿毒癥、腸梗阻、腸系膜血栓等因素常常引起腸缺血再灌注損傷,ⅡR可導(dǎo)致腸動(dòng)力不足,通透性增加,粘膜屏障功能受損,ⅡR不僅引起腸道的局部損傷,尚可引發(fā)全身炎癥反應(yīng)和遠(yuǎn)隔器官的損傷,是引起多器官功能障礙綜合征(MODS)的重要原因。藥物／化學(xué)性肝損傷也是臨床常見(jiàn)并且棘手的問(wèn)題之一,隨著藥物的不斷開(kāi)發(fā)利用,隨之而來(lái)的副作用也不斷增加。另外,肝臟作為體內(nèi)最大的代謝和解毒器官,常常受到多種不同外源性以及內(nèi)源性因素的損傷,保肝護(hù)肝成為細(xì)胞保護(hù)策略的首要任務(wù)。四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)是一種親肝的細(xì)胞毒性物質(zhì),CCl4誘導(dǎo)的肝損傷模型被廣泛用作藥物／化學(xué)性肝損傷的首選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,此外,CCl4還是工業(yè)生產(chǎn)中常用的化合物,CCl4中毒的處理也是危重病與急救醫(yī)學(xué)的重要內(nèi)容之一 在腸缺血再灌注損傷以及的四氯化碳誘導(dǎo)的化學(xué)性肝損傷的致病過(guò)程中,氧化應(yīng)激起到了非常重要的作用�；钚匝踝杂苫拇罅慨a(chǎn)生和激活作用是這兩種模型共同的發(fā)病機(jī)制之一�；钚匝踝杂苫腔顫姷难踝杂苫c具有氧自由基反應(yīng)特性的其他含氧物質(zhì)的總稱(chēng),包括超氧陰離子自由基(·O2-)、過(guò)氧化氫(H2O2)、羥自由基(·OH)以及單線態(tài)氧(102)等。過(guò)量產(chǎn)生的氧自由基會(huì)導(dǎo)致DNA、脂質(zhì)和蛋白的氧化損傷,其中·OH的毒性最強(qiáng),并且到目前為止還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物體內(nèi)內(nèi)源性針對(duì)·OH的清除途徑。近來(lái),Ohsawa等發(fā)現(xiàn)了氫氣分子可選擇性清除細(xì)胞體系中的·OH,動(dòng)物呼吸氣體中一定濃度的氫氣可以有效緩解腦缺血再灌注損傷。因此,本研究開(kāi)發(fā)了更為安全和方便使用的氫飽和的生理鹽水,這里稱(chēng)為富氫水,以腸缺血再灌注損傷以及的四氯化碳誘導(dǎo)的肝損傷為研究對(duì)象,觀察富氫水是否具有保護(hù)作用并探討其機(jī)制。 方法：(一)將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、模型組(I/R)、富氫水處理組(I/R+H2)以及富氮水處理組(I/R+N2)。用無(wú)創(chuàng)小血管夾夾閉腸系膜上動(dòng)脈(superior mesenteric artery, SMA) 45 min,松開(kāi)血管夾再灌注120 min,建立腸缺血再灌注損傷模型。再灌注開(kāi)始10 min前,于靜脈分別注射5 ml/kg生理鹽水、氫飽和生理鹽水以及氮飽和生理鹽水。再灌注結(jié)束后,取血和小腸組織。檢測(cè)如下指標(biāo)： 1)HE染色和病理學(xué)檢查； 2)血清二胺氧化酶(diamine oxidase, DAO),組織丙二醛(malondialdehyde, MDA)、蛋白質(zhì)羰基(protein carbonyl, PC)和髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase, MPO); 3)血清腫瘤壞死因子-a(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6) (二)將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組(control)、模型對(duì)照組(CCl4+N2)、富氫水處理組(CCl4+H2)。大鼠腹腔單次注射CCl4/橄欖油混合液(v：v=l：1)2 ml/kg bw制作急性肝損傷模型(生存分析實(shí)驗(yàn)大鼠腹腔注射CCl4/橄欖油混合液7.5 ml/kg bw)。在CCl4注射前10 min以及注射后每3小時(shí)腹腔分別給予5 ml/kg生理鹽水、氮飽和生理鹽水以及氫飽和生理鹽水。CCl4注射12hr后,取血和肝組織檢測(cè)如下指標(biāo)(MAPK信號(hào)分子檢測(cè)在CCl4注射3hr后取材)： 1)HE染色和病理學(xué)檢查； 2)血清AST、ALT、LDH活性和DBIL、TBIL水平； 3)TUNEL組織化學(xué)檢查和組織Caspase-3活性； 4)組織丙二醛(malondialdehyde, MDA)和谷胱甘肽(Glutathione, GSH); 5)血清腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α); 6)組織MAP激酶信號(hào)分子：JNK、ERK和p38 MAPK磷酸化水平。 結(jié)果：(一)腸缺血再灌注后,組織學(xué)檢查可見(jiàn)明顯粘膜損傷,Chiu氏評(píng)分顯著增加。血清DAO活性,小腸組織MDA、PC、MPO含量,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平顯著增高。富氫水處理可以顯著緩解小腸病理學(xué)損傷,并顯著抑制以上指標(biāo)的升高,而富氮水處理組與模型組未見(jiàn)明顯差別。 (二)富氫水處理可以顯著延長(zhǎng)大鼠CCl4中毒后的生存時(shí)間,減輕CCl4引起的大鼠肝臟病理學(xué)損傷,顯著減少氣球樣變性細(xì)胞數(shù)量；顯著降低CCl4引起的血清AST、ALT、LDH活性和DBIL、TBIL水平升高；顯著減少CCl4引起的肝細(xì)胞凋亡,降低肝組織Caspase-3活性；顯著抑制CCl4引起的肝組織MDA含量、血清TNF-a水平增高以及肝組織GSH含量的下降；顯著降低肝組織JNK、ERK和p38MAPK磷酸化水平。 結(jié)論：1)富氫水可以有效減輕腸缺血再灌注損傷,其保護(hù)作用可能與富氫水減輕再灌注損傷引起的氧化應(yīng)激,緩解中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和降低炎性因子升高等機(jī)制有關(guān)。 2)富氫水可以有效減輕CCl4誘導(dǎo)的肝損傷,其保護(hù)作用可能與富氫水抑制CCl4引起的肝細(xì)胞凋亡、減輕CCl4引起的氧化應(yīng)激、降低TNF-α升高以及抑制MAP激酶信號(hào)通路激活等機(jī)制有關(guān)。 3)本研究開(kāi)發(fā)并應(yīng)用了富氫鹽水用于靜脈注射和腹腔注射的新途徑,為氫氣的應(yīng)用范圍、作用機(jī)制、給藥方式、臨床應(yīng)用前景提供了新的參考依據(jù),并為燒傷常見(jiàn)臨床危重病救治提供了新的可能策略和方向。
【圖文】：

l2.30士0.19，P<0.05);而富氮水處理組與眼組相比小腸組織MDA含量無(wú)明顯差異 (2.15士 0.25vs.2.30士0.19，p>0.05)。(圖1.3)

P<0.01);富氫水處理顯著降低了缺血再灌注引起的小腸組織Mpo活性升高(115.24士 11.67vs.215.7士13.81，，P<0.05);而富氮水處理未能顯著降低小腸組織Mpo活性(210.56士18.7vs.215.7士13.81，p>0.05)(圖1.5)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉璐璐;皺紋盤(pán)鮑性腺核苷化學(xué)成分及護(hù)肝活性研究[D];中國(guó)海洋大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2567437