【摘要】： 我們前期發(fā)現(xiàn),組胺在小鼠、豚鼠、犬、猴等多種動物的交感神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛分布;刺激交感神經(jīng)末梢能夠使組胺(HA)和去甲腎上腺素(NE)共同從交感神經(jīng)釋放。這些結(jié)果強烈提示,組胺可能是一種與NE共存的交感神經(jīng)遞質(zhì)。 機體的大部分血管主要受交感神經(jīng)支配,既然組胺在交感神經(jīng)內(nèi)存在并能從其神經(jīng)末梢釋放,交感組胺在血管上是否可以介導一定的突觸前及突觸后效應呢?為了回答這一問題,本實驗采用離體兔耳恒壓灌流模型,觀察不同的組胺受體拮抗劑對電刺激引起的血管收縮的影響;并建立了優(yōu)化的高效液相色譜電化學方法檢測灌流液中的HA和NE,以確證交感組胺的釋放。實驗的目的是初步探討交感組胺對血管舒縮功能的影響,并進一步證明交感組胺的遞質(zhì)特性。 1高效液相色譜電化學法同時測定組胺和去甲腎上腺素的方法優(yōu)化 為同時檢測組胺和去甲腎上腺素的釋放含量,我們對已有的高效液相色譜電化學檢測方法進行了改進,不但克服了原方法步驟繁瑣、操作不便等不足,還提高了檢測靈敏度。本方法以鄰苯二甲醛(OPA)和2-巰基乙醇(2-ME)按適當比例配制的混合溶液作為衍生試劑,對HA和NE進行柱前衍生,并分別以3-甲基-組胺(3-M-His)和3,4-二羥基芐胺(DHBA)作為HA和NE的內(nèi)標。同時考察了衍生條件如衍生反應pH值、衍生試劑中2-ME的含量、衍生反應時間,以及色譜條件如檢測電位等對目標峰響應值的影響。測定組胺的工作曲線回歸方程為Y = 0.868 X - 0.1233,3-M-His為100 ng/ml,相關系數(shù)γ= 0.9992,線性范圍為0.25~10 ng/ml。測定去甲腎上腺素的工作曲線回歸方程為Y = 0.0832 X - 0.1601,DHBA為500 ng/ml,相關系數(shù)γ= 0.9995,線性范圍為2.5~100 ng/ml。HA和NE的檢出限分別為0.125 ng/ml和1.25 ng/ml。本法操作簡便,靈敏度高。 2交感神經(jīng)源性組胺釋放對電刺激條件下兔耳血管舒縮功能的影響 使用離體灌流的完整兔耳,研究不同頻率的交感神經(jīng)刺激引起的組胺釋放對血管舒縮功能的影響。對耳后神經(jīng)分別給予10 Hz、20 Hz和40 Hz的電刺激,并在恒壓灌流條件下,觀察不同的組胺受體拮抗劑對灌流液流速的影響。灌流液的流速在一定程度上可反映血管的舒縮狀態(tài)。結(jié)果顯示:三種刺激頻率均能引起恒壓灌流兔耳的流出液流速下降;H1受體拮抗劑氯苯那敏能夠部分拮抗20 Hz及40 Hz電刺激引起的流速降低效應(P㩳0.05);應用肥大細胞脫顆粒劑化合物48/80耗竭肥大細胞中的組胺后,H1受體拮抗劑仍能抑制電刺激引起的流速降低。相反,H2受體拮抗劑西咪替丁能增強電刺激引起的流速降低效應,且只針對更高的刺激頻率(40 Hz,P㩳0.05)。此外,在H3受體拮抗劑噻普酰胺的作用下,三種頻率的電刺激所引起的血管收縮都更為顯著(P㩳0.05)。預先耗竭肥大細胞來源的組胺,仍能檢測到電刺激引起的組胺釋放,且其與NE為共同釋放。10 Hz時檢測到的組胺為0.52±0.71 pmol/ml,20 Hz為3.23±0.94 pmol/ml,40Hz時為4.76±1.17 pmol/ml,隨著刺激頻率的增加組胺的釋放量也有所增加(P㩳0.01, 20 Hz vs 10 Hz; P㩳0.05, 40 Hz vs 20 Hz)。結(jié)果提示,實驗中的電刺激能夠引起組胺釋放,這種釋放來自于交感神經(jīng)而非肥大細胞,組胺的釋放量有一定的頻率依賴性。不同條件下,通過激動不同的組胺受體,交感組胺能分別介導突觸前調(diào)節(jié)、突觸后血管收縮或舒張效應。 結(jié)論:(1)組胺能夠從支配兔耳血管的交感神經(jīng)末梢釋放;(2)交感神經(jīng)來源的組胺能夠通過激動突觸前組胺H3受體負反饋調(diào)節(jié)刺激交感神經(jīng)引起的血管收縮;(3)在不同條件下,交感組胺能夠通過激動血管上的H1或H2受體分別介導血管的收縮與舒張。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R341

【共引文獻】

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本文編號：2561395