發(fā)布時(shí)間：2019-11-04 14:40

【摘要】： 目的: 1.探討骨骼肌源性干細(xì)胞體外分離純化、培養(yǎng)、鑒定的方法,研究骨骼肌源性干細(xì)胞的生物學(xué)特性,為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 2.評(píng)估不同濃度的大腦神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)在體外誘導(dǎo)骨骼肌肌源性干細(xì)胞后,肌源性干細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的能力;并鑒定分化后的神經(jīng)樣細(xì)胞,為以后的神經(jīng)組織工程提供種子細(xì)胞。 方法: 1.采用Ⅺ型膠原酶和胰蛋白酶二步消化法獲取大鼠骨骼肌肌源性干細(xì)胞,微孔尼龍網(wǎng)純化肌源性干細(xì)胞后進(jìn)行體外原代和傳代培養(yǎng)。觀察細(xì)胞的形態(tài),通過(guò)生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞融合率等指標(biāo)研究骨骼肌源性干細(xì)胞的增殖與分化能力,利用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和免疫熒光染色對(duì)所獲得的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 2.體外提取純度較高的肌源性干細(xì)胞后,采用bFGF、EGF誘導(dǎo)肌源性干細(xì)胞成細(xì)胞球樣細(xì)胞團(tuán),在貼壁的情況下,用不同濃度的大腦神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)誘導(dǎo)分化,并檢測(cè)GFAP的表達(dá)。 結(jié)果: 1.二步消化法適用于骨骼肌肌源性干細(xì)胞細(xì)胞的獲取。通過(guò)不同直徑的微孔尼龍過(guò)濾網(wǎng)(11um,20um,30um,41um)純化骨骼肌肌源性干細(xì)胞。在生長(zhǎng)培養(yǎng)基作用下,細(xì)胞增殖旺盛:在分化培養(yǎng)基條件下,細(xì)胞分化良好,可融合成肌管。Desmin和CD_(34)免疫細(xì)胞化學(xué)染色呈陽(yáng)性。 2.次代細(xì)胞在肌源性干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液中大部分貼壁生長(zhǎng),少數(shù)懸浮、成團(tuán)。懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)較快,7～15 d出現(xiàn)神經(jīng)球樣細(xì)胞團(tuán),神經(jīng)球轉(zhuǎn)入預(yù)涂有多聚賴氨酸的24孔板后,加入不同濃度的BDNF,細(xì)胞逐漸貼壁生長(zhǎng),呈多種細(xì)胞形態(tài):兩極長(zhǎng)的梭形細(xì)胞;有2～3個(gè)長(zhǎng)突起的多角形細(xì)胞;突起多而短的多角形細(xì)胞;不規(guī)則形態(tài)細(xì)胞再作GFAP免疫組化染色,GFAP(+)。GFAP陽(yáng)性率隨BDNF濃度的升高而增加。 結(jié)論: 1.體外培養(yǎng)的骨骼肌肌源性干細(xì)胞具有良好的增殖與分化能力,微孔尼龍網(wǎng)過(guò)濾可純化骨骼肌肌源性干細(xì)胞�？刂蒲宓臐舛�,可調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖與分化,骨骼肌肌源性干細(xì)胞適用于組織工程和基因治療。 2.BDNF作用于骨骼肌肌源性干細(xì)胞,可使細(xì)胞向神經(jīng)樣細(xì)胞方向分化;骨骼肌肌源性干細(xì)胞不僅為骨缺損修復(fù)、肌萎縮、心肌梗死、壓力性尿失禁等的治療帶來(lái)新的曙光,還可用來(lái)移植治療神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。
【圖文】：

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文附圖圖1一1.剛分離出的肌源性干細(xì)胞 (X100)圖1一2.第3天完全貼壁的肌源性干細(xì)胞(X200)圖1一3.第4天肌源性干細(xì)胞伸出多個(gè)突起 (X200)

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文附圖圖1一1.剛分離出的肌源性干細(xì)胞 (X100)圖1一2.第3天完全貼壁的肌源性干細(xì)胞(X200)圖1一3.第4天肌源性干細(xì)胞伸出多個(gè)突起 (X200)
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2555689