【摘要】：目的：在體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)的條件,探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的部分生物學(xué)特性,為進(jìn)一步深入研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的誘導(dǎo)分化和應(yīng)用打下基礎(chǔ)。用單純皰疹病毒1型(HSV-1)感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察單純皰疹病毒1型感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及在其上形成潛伏感染的情況,揭示單純皰疹病毒1型對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的影響。 方法：在無(wú)菌條件下,剝離大鼠股骨、脛骨,自大鼠股骨、脛骨抽取骨髓液,用淋巴細(xì)胞分離液分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,分別采用常規(guī)培養(yǎng)液及含礦化液的培養(yǎng)液兩組進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),對(duì)第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行酶動(dòng)力學(xué)法堿性磷酸酶(ALP)含量檢測(cè)及細(xì)胞鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色,觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)鈣結(jié)節(jié)形成情況,以此做骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞鑒定；用HSV-1感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察病毒致細(xì)胞病變(CPE)；建立骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的HSV-1潛伏感染模型。提取總DNA, PCR法擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)的HSV-1特異性片段,檢測(cè)HSV-1感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及潛伏感染。 結(jié)果：兩組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞其培養(yǎng)液中的ALP含量不斷升高,經(jīng)過(guò)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),礦化液誘導(dǎo)組第3,6,9天的ALP水平較正常對(duì)照組均明顯升高(P0.05)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)14天礦化液誘導(dǎo)后,細(xì)胞表現(xiàn)出成骨細(xì)胞特性,在體外長(zhǎng)期不傳代培養(yǎng)時(shí)可形成鈣結(jié)節(jié)。HSV-1感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變(CPE), PCR法證實(shí)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞內(nèi)存在HSV-1的特異性片段。HSV-1潛伏感染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變(CPE),骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳至第7代,仍可測(cè)到HSV-1的基因片段,表明骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有可能形成HSV-1的潛伏感染。 結(jié)論：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下,增殖能力很強(qiáng),可以向成骨細(xì)胞方向分化,可作為組織工程學(xué)的種子細(xì)胞。可以說(shuō)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有易獲得、易培養(yǎng)、低免疫原性、易于外源基因的轉(zhuǎn)入和表達(dá)等特性,已成為具有細(xì)胞治療和基因治療臨床疾病潛在實(shí)用價(jià)值的有效載體。HSV-1可以在體外感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并有形成潛伏感染的趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)在臨床上應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞移植、基因治療及器官移植,指導(dǎo)臨床用藥,提高移植術(shù)后病人生活質(zhì)量和生存率,可提供一定的依據(jù)。
【圖文】：

圖l貼壁第三天的BMSCsxl00圖2貼壁第四天的BMSCs火100Fig.1BMSCseulturedforthirddayX100Fig.2BMSCseulturedforfourthdayx1OO

3.誘導(dǎo)14d的BMSCs形態(tài)觀察細(xì)胞加入礦化液誘導(dǎo)后生長(zhǎng)較前明顯減慢，逐漸變?yōu)榱⒎叫巍㈠F形或梭形。誘導(dǎo)14d的BMScs，形態(tài)上呈現(xiàn)“鋪路石狀”，重疊生長(zhǎng)呈“鈣結(jié)節(jié)”樣(見(jiàn)圖5)。圖5礦化液誘導(dǎo)14d后的BMSCs(x100) Fig.5BMSCsredueedbymineralizedliquidfor14thday4.鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色結(jié)果茜素紅染色是一種對(duì)鈣質(zhì)的特異性染色，BMSCS經(jīng)礦化液誘導(dǎo)，，可形成鈣
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2520299