【摘要】：目的：在體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs),建立骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離、培養(yǎng)的條件,探討骨髓間充質(zhì)干細胞的部分生物學特性,為進一步深入研究骨髓間充質(zhì)干細胞的誘導分化和應用打下基礎(chǔ)。用單純皰疹病毒1型(HSV-1)感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,觀察單純皰疹病毒1型感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞及在其上形成潛伏感染的情況,揭示單純皰疹病毒1型對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的影響。 方法：在無菌條件下,剝離大鼠股骨、脛骨,自大鼠股骨、脛骨抽取骨髓液,用淋巴細胞分離液分離骨髓間充質(zhì)干細胞,分別采用常規(guī)培養(yǎng)液及含礦化液的培養(yǎng)液兩組進行細胞培養(yǎng),對第3代骨髓間充質(zhì)干細胞進行酶動力學法堿性磷酸酶(ALP)含量檢測及細胞鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色,觀察骨髓間充質(zhì)干細胞在體外長期培養(yǎng)時鈣結(jié)節(jié)形成情況,以此做骨髓間充質(zhì)干細胞鑒定；用HSV-1感染骨髓間充質(zhì)干細胞,觀察病毒致細胞病變(CPE)；建立骨髓間充質(zhì)干細胞的HSV-1潛伏感染模型。提取總DNA, PCR法擴增骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)的HSV-1特異性片段,檢測HSV-1感染骨髓間充質(zhì)干細胞及潛伏感染。 結(jié)果：兩組骨髓間充質(zhì)干細胞其培養(yǎng)液中的ALP含量不斷升高,經(jīng)過兩獨立樣本t檢驗,礦化液誘導組第3,6,9天的ALP水平較正常對照組均明顯升高(P0.05)。骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)過14天礦化液誘導后,細胞表現(xiàn)出成骨細胞特性,在體外長期不傳代培養(yǎng)時可形成鈣結(jié)節(jié)。HSV-1感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,出現(xiàn)典型的細胞病變(CPE), PCR法證實骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)存在HSV-1的特異性片段。HSV-1潛伏感染的骨髓間充質(zhì)干細胞,未出現(xiàn)明顯的細胞病變(CPE),骨髓間充質(zhì)干細胞傳至第7代,仍可測到HSV-1的基因片段,表明骨髓間充質(zhì)干細胞有可能形成HSV-1的潛伏感染。 結(jié)論：大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞在體外適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下,增殖能力很強,可以向成骨細胞方向分化,可作為組織工程學的種子細胞。可以說骨髓間充質(zhì)干細胞具有易獲得、易培養(yǎng)、低免疫原性、易于外源基因的轉(zhuǎn)入和表達等特性,已成為具有細胞治療和基因治療臨床疾病潛在實用價值的有效載體。HSV-1可以在體外感染大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞并有形成潛伏感染的趨勢。本實驗對在臨床上應用骨髓間充質(zhì)干細胞進行細胞移植、基因治療及器官移植,指導臨床用藥,提高移植術(shù)后病人生活質(zhì)量和生存率,可提供一定的依據(jù)。
【圖文】：

圖l貼壁第三天的BMSCsxl00圖2貼壁第四天的BMSCs火100Fig.1BMSCseulturedforthirddayX100Fig.2BMSCseulturedforfourthdayx1OO

3.誘導14d的BMSCs形態(tài)觀察細胞加入礦化液誘導后生長較前明顯減慢，逐漸變?yōu)榱⒎叫�、錐形或梭形。誘導14d的BMScs，形態(tài)上呈現(xiàn)“鋪路石狀”，重疊生長呈“鈣結(jié)節(jié)”樣(見圖5)。圖5礦化液誘導14d后的BMSCs(x100) Fig.5BMSCsredueedbymineralizedliquidfor14thday4.鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色結(jié)果茜素紅染色是一種對鈣質(zhì)的特異性染色，BMSCS經(jīng)礦化液誘導，，可形成鈣
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：2520299