【摘要】： 重組表位疫苗(Recombinant epitope vaccine)研制和開發(fā)過程主要包括構(gòu)建表達、制備及活性研究等幾個階段。圍繞以上三個方面,針對重組表位疫苗CZ-1、HSP65-MUC1和HSP65-HER2進行了以下研究:1、使用分子生物學軟件對AsiaⅠ型口蹄疫病毒的VP1上的B細胞表位和Th細胞表位進行了多參數(shù)預測,根據(jù)預測結(jié)果在大腸桿菌內(nèi)構(gòu)建表達了由相同B細胞表位及Th細胞表位以串聯(lián)模式組成口蹄疫重組表位疫苗CZ-1,采用層析法純化、復性后,對其免疫豚鼠后產(chǎn)生中和抗體的滴度進行了測定;2、解決了HSP65-MUC1的降解問題,建立了重組表位疫苗HSP65-MUC1的實驗室規(guī)模純化工藝,并將純化工藝放大至中試規(guī)模后,且對純化后的HSP65-MUC1原液凍干品進行了一系列的質(zhì)量檢測;3、表達并純化了重組表位疫苗HSP65-HER2,采用小鼠B16/HER2黑色素瘤的腹腔荷瘤動物模型研究其生物學活性,并對其作用機制進行了初步探索。 本研究的意義在于,構(gòu)建、表達、純化獲得了重組表位疫苗CZ-1,并對其生物學活性進行了研究,證實其有望開發(fā)成預防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗,并為其他同類型的重組表位疫苗的開發(fā)提供了思路;解決了HSP65-MUC1在制備過程中易降解的技術(shù)難題,建立了HSP65-MUC1的中試工藝,為進一步臨床試驗及商業(yè)化應(yīng)用建立了堅實的基礎(chǔ);通過小鼠體內(nèi)抑瘤實驗,證實了HSP65-HER2與CpG ODN聯(lián)合應(yīng)用對HER2陽性腫瘤細胞生長抑制作用,為進一步的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The research and development of recombinant epitope vaccine (Recombinant epitope vaccine) mainly includes construction, expression, preparation and activity research. Around the above three aspects, the following studies were carried out on recombinant epitope vaccines CZ-1,HSP65-MUC1 and HSP65-HER2: 1. The B cell epitopes and Th cell epitopes on VP1 of Asia type I foot-and-mouth disease virus were predicted by molecular biology software. According to the predicted results, the recombinant epitope vaccine CZ-1, composed of the same B cell epitope and Th cell epitope was constructed and expressed in E. coli. After purification by chromatography and renaturation, the titer of neutralizing antibody produced by immunizing guinea pigs was determined. 2. The degradation problem of HSP65-MUC1 was solved, and the laboratory scale purification process of recombinant epitope vaccine HSP65-MUC1 was established, and the purification process was enlarged to the pilot scale, and a series of quality tests were carried out on the purified HSP65-MUC1 freeze-dried products. 3. The recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was expressed and purified. The biological activity of the recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was studied in the abdominal cavity tumor-bearing animal model of mouse B16/HER2 melanoma, and its mechanism was preliminarily explored. The significance of this study is to construct, express and purify the recombinant epitope vaccine CZ-1, and study its biological activity, which proves that it is expected to be developed into a new type of vaccine to prevent Asia I FDMV infection, and provides ideas for the development of other recombinant epitope vaccines of the same type. The technical problems of easy degradation of HSP65-MUC1 in the preparation process were solved, and the pilot-scale test process of HSP65-MUC1 was established, which established a solid foundation for further clinical trial and commercial application, and confirmed the inhibitory effect of HSP65-HER2 and CpG ODN on the growth of HER2 positive tumor cells through in vivo tumor inhibition test, which laid a foundation for further research.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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