【摘要】： 目的:利用肝癌細胞(Bel-7404)、大腸癌細胞(Caco-2)和宮頸癌細胞(Hela)及其培養(yǎng)上述三種細胞的上清液,在體外對泡球蚴進行培養(yǎng),建立穩(wěn)定的體外培養(yǎng)模型,觀察泡球蚴的在體外的細胞親和性及生長、發(fā)育過程。方法:培養(yǎng)肝癌細胞(Bel-7404)、大腸癌細胞(Caco-2)和宮頸癌細胞(Hela),留取細胞上清液。取泡球蚴組織,分別與上述三種細胞及含三種細胞培養(yǎng)上清的DMEM完全培養(yǎng)基于37℃5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)38d。實驗期間對囊泡進行計數,觀察囊泡生長情況,記錄囊泡最大、最小直徑,繪制生長曲線。培養(yǎng)結束后,取培養(yǎng)囊泡囊液進行蛋白定量。利用SDS-PAGE技術觀察囊液中蛋白條帶特征。結果:泡球蚴與三種細胞及其上清液中均能共同生長,呈出芽生殖方式,囊泡直徑0.5～5.0 mm;囊液蛋白含量分別為:肝癌細胞,3.8mg/ml;肝癌細胞上清液,1.1mg/ml;大腸癌細胞,3.2mg/ml;大腸癌細胞上清液,1.2mg/ml;宮頸癌細胞,2.5mg/ml;宮頸癌細胞上清液,3.8mg/ml。泡球蚴在體外與不同的細胞共培養(yǎng)的初期生長特點基本相似:均在培養(yǎng)初期呈較快速性生長(1～15d);生長中期可見一平臺期(15～26d);但后期肝癌細胞及其上清液內培養(yǎng)泡球蚴囊泡保持一個較穩(wěn)定囊泡數量,而其他結果則表現(xiàn)為逐漸減少。并對肝癌細胞上清液所培養(yǎng)的泡球蚴囊壁DNA經PCR擴增出Em特異性200bp條帶。SDS-PAGE觀察體內外培養(yǎng)囊液中蛋白在14、47-66kd處有相似條帶。結論:1)泡球蚴體外生長因素可不依賴培養(yǎng)細胞本身;2)由于體外與動物體內的培養(yǎng)環(huán)境的不同,及不同的共培養(yǎng)細胞可能引起囊泡內囊液的蛋白含量有所差異;3)泡球蚴在體外與肝癌細胞及其上清液的親和性與其它二種細胞略有不同;4)體內、外培養(yǎng)的囊泡含有相似蛋白;5)利用肝癌細胞、大腸癌細胞和宮頸癌細胞及其上清液建立泡球蚴體外培養(yǎng)模型具有一定的可行性,但可能存在一定的差異性。
[Abstract]:Aim: to establish a stable culture model of alveolar cercariae in vitro by using liver cancer cell (Bel-7404), colorectal cancer cell (Caco-2) and cervical cancer cell line (Hela) and the culture medium of these three kinds of cells in vitro, and to observe the cell affinity, growth and development of alveolar cercaria in vitro. Methods: liver cancer cells (Bel-7404), colorectal cancer cells (Caco-2) and cervical cancer cells (Hela), were cultured. The tissue of Echinococcus follicularis was completely cultured with the above three kinds of cells and DMEM containing three kinds of cell culture respectively, based on the culture in 37 鈩，

本文編號：2504724