【摘要】： 近年來研究表明Treg細(xì)胞是一種免疫抑制性細(xì)胞,主要通過分泌一些抑制性細(xì)胞因子和表達(dá)其它一些抑制性的共刺激性分子從而抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞免疫應(yīng)答,在維持免疫耐受中扮演著重要的角色,其數(shù)量的缺乏或功能的紊亂會導(dǎo)致各種自身免疫性疾病的發(fā)生。 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種臨床上多發(fā)的慢性自身免疫性疾病,以多關(guān)節(jié),對稱性炎癥及漸進(jìn)性軟骨和骨破壞為主要特征,主要累及關(guān)節(jié),尤以多見于手、足小關(guān)節(jié),病變可侵入相鄰的滑膜、軟骨和骨,該病如不及時診治,可發(fā)展為不可逆關(guān)節(jié)畸形,最終導(dǎo)致殘疾。 IL-1是一種參與RA發(fā)病的重要的細(xì)胞因子。在類風(fēng)關(guān)發(fā)病過程中,多種細(xì)胞來源的IL-1可以在關(guān)節(jié)炎癥部位刺激單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞以及T、B淋巴細(xì)胞的活化,促進(jìn)成纖維細(xì)胞增殖,活化破骨細(xì)胞,導(dǎo)致軟骨降解增加,在組織損傷中起重要作用。 IL-1受體拮抗劑能競爭結(jié)合IL-1RI而不參與轉(zhuǎn)導(dǎo)信號,從而阻斷IL-1a和IL-1β的生物效應(yīng)。目前有很多報道,已經(jīng)將IL-1受體拮抗劑(IL-1ra)運用于臨床治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人,可以減輕患者的癥狀和體征。但是目前有多項臨床數(shù)據(jù)表明IL-1受體拮抗劑治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人時,出現(xiàn)了很多新問題,大部分患者出現(xiàn)較為嚴(yán)重的局部反應(yīng),更有研究表明使用該藥物長期治療后時出現(xiàn)病情的反復(fù)加重。 在本研究的體內(nèi)實驗中,我們成功建立膠原誘導(dǎo)的類風(fēng)關(guān)小鼠模型,觀察了rhIL-1ra對CIA小鼠治療作用。在體外實驗中,我們研究了rmIL-1β及rhIL-1ra對DC體外誘導(dǎo)CD4+CD25+T細(xì)胞增殖的影響,以及工L-1β對TGF-β誘導(dǎo)的CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化發(fā)育的影響。 第一部分體內(nèi)研究IL-1ra對CIA小鼠的治療作用 在本部分研究中,我們首先根據(jù)文獻(xiàn)方法成功建立了了小鼠CIA模型。簡而言之,我們以雞的Ⅱ型膠原作為抗原,第0天,先將溶于冰醋酸的4mg/mlⅡ型膠原與完全弗氏佐劑以1：1比例乳化后,于每只DBA/1小鼠尾根部皮下免疫100μl乳化好的2mg/ml的Ⅱ型膠原,再于第21天進(jìn)行加強免疫,將上述膠原溶液與不完全弗氏佐劑以1：1比例乳化后,再次于小鼠尾根部厘米處進(jìn)行皮下注射100μl乳化好的2mg/ml的Ⅱ型膠原。根據(jù)CIA的臨床標(biāo)準(zhǔn)評分：0分：關(guān)節(jié)正常；1分：關(guān)節(jié)輕微紅腫；2分：關(guān)節(jié)紅腫嚴(yán)重,累及整個關(guān)節(jié)；3分：爪子或關(guān)節(jié)功能障礙,關(guān)節(jié)僵硬。每只小鼠的關(guān)節(jié)炎癥的總評分為四肢的總和,每只小鼠的最高分值為12分,關(guān)節(jié)總評分大于1的小鼠為建模成功。 根據(jù)實驗?zāi)康?將CIA小鼠隨即分為3組,設(shè)IL-Ira治療組、PBS治療對照組和BSA蛋白治療對照組。IL-1ra治療組于初次免疫后的第33天起連續(xù)20天,給CIA小鼠皮下注射IL-1ra100μg/只,對照組以注射等量的PBS或BSA蛋白。 本實驗建立的CIA小鼠,初次免疫后第27天起發(fā)病,33天左右達(dá)到發(fā)病高峰。CIA小鼠的發(fā)病率為80%,平均關(guān)節(jié)指數(shù)為6分。關(guān)節(jié)表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性多關(guān)節(jié)炎,急性期表現(xiàn)為首先腳趾皮膚輕微發(fā)紅,然后累及到足掌和踝關(guān)節(jié),皮膚腫脹充血嚴(yán)重,晚期導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形,活動明顯受限。病理表現(xiàn)為增生性滑膜炎,血管翳形成,細(xì)胞纖維化,關(guān)節(jié)軟骨和骨組織破壞。 臨床關(guān)節(jié)評分及病理切片結(jié)果可以看出,IL-1ra治療初期降低了CIA的關(guān)節(jié)腫脹程度,抑制炎性細(xì)胞浸潤,血管翳形成,減輕關(guān)節(jié)軟骨和骨的破壞。但是后期關(guān)節(jié)腫脹程度加劇,組織病理檢查結(jié)果發(fā)現(xiàn)關(guān)節(jié)軟骨和骨組織的破壞。在CIA急性期,IL-1ra治療后,CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例并沒有增加。結(jié)果表明IL-1ra治療后期癥狀反復(fù)加重,與Treg細(xì)胞的分化與發(fā)育受損密切相關(guān)。 第二部分體外研究IL-1對CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖影響 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分化發(fā)育障礙及功能失常是導(dǎo)致自身免疫性疾病發(fā)生的主要機制之一。根據(jù)其發(fā)育來源,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞分為來源于胸腺的天然調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及由胸腺外經(jīng)持續(xù)性抗原及IL-10.TGF-β等細(xì)胞因子刺激的條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生的誘導(dǎo)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。DC作為專職性抗原提呈細(xì)胞,不僅參與了初始型T細(xì)胞的免疫活化過程,而且還可以控制其分化為不同的細(xì)胞亞群。最近的研究結(jié)果表明,DC參與誘導(dǎo)了天然Treg的自穩(wěn)性增殖。 本研究中我們發(fā)現(xiàn),無論是成熟DC和不成熟DC在體外共培養(yǎng)體系中,均能刺激CD4+CD25+Treg細(xì)胞的增殖,而且成熟DC刺激Treg細(xì)胞增殖能力更強。當(dāng)采用射線照射后成熟DC后,可部分抑制其刺激Treg細(xì)胞的增殖效應(yīng)。該實驗結(jié)果表明,DC刺激Treg細(xì)胞增殖一方面依賴于細(xì)胞-細(xì)胞間的直接接觸。另一方面也與成熟DC分泌的多種細(xì)胞因子作用密切相關(guān)。成熟DC可分泌較高水平的前炎性細(xì)胞因子,如IL-1β,IL-6.IL-2和TGF-β。在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)體系中,我們發(fā)現(xiàn)加入低濃度的IL-1β后,imDC促進(jìn)CD4+CD25+T細(xì)胞的增殖的能力增強；加入10μg/mlIL-1ra后,IL-1ra抑制了mDC促進(jìn)CD4+CD25+T細(xì)胞的增殖能力。表明低濃度的IL-1可能作為一種Treg細(xì)胞的促生長因子,參與了DC對Treg細(xì)胞的促增殖效應(yīng)過程。 此外,在本實驗中,我們還建立了一個體外TGF-β誘導(dǎo)CD4+CD25T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞體系。TGF-β誘導(dǎo)的這群調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可高表達(dá)FoxP3,并能顯著抑制反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞的分裂增殖。當(dāng)我們在該體系中加入IL-1β時,發(fā)現(xiàn)其能協(xié)同TGF-β促進(jìn)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化發(fā)育。 總之,我們之前的實驗結(jié)果表明,在CIA急性期,IL-1ra治療初期CD4+CD25+ Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例減少也許與后期關(guān)節(jié)癥狀反復(fù)加重相關(guān)。結(jié)果提示IL-1作為體內(nèi)重要的T細(xì)胞生長因子,參與了Treg細(xì)胞的分化發(fā)育。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 呂厚山,孫鐵錚,藥立波,張育軍;Role of protein tyrosine kinase in IL-1β induced activation of mitogen- activated protein kinase in fibroblast-like synoviocytes of rheumatoid arthritis[J];Chinese Medical Journal;2000年10期

2 鐘翠平,李威震,呂麗娜,錢詩光;轉(zhuǎn)化生長因子β1基因修飾的小鼠樹突狀細(xì)胞在移植體內(nèi)的遷移與生存[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;1999年03期

，

本文編號：2496325