【摘要】：目的研究抗衰老Klotho蛋白對高糖作用下人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(HUVECs)凋亡和衰老的抑制作用及其機制。方法培養(yǎng)HUVECs細胞,設(shè)置C組(加同體積PBS培養(yǎng)基)、L組(加含低濃度5.5 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)基)、H組(加含高濃度33.3 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)基)、K1組(加含0.1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)基)、K2組(加含1μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)基)、K3組(加含10μmol/L Klotho+33.3 mmol/L葡萄糖組培養(yǎng)基),分別處理48 h。SA-β-半乳糖苷酶染色法檢測各組HUVECs細胞衰老情況;RT-PCR方法檢測各組HUVECs中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA的表達情況;流式細胞術(shù)檢測各組HUVECs的細胞凋亡率;Western-blot法檢測各組HUVECs中凋亡相關(guān)蛋白p53、Bax、Bcl-2表達情況。結(jié)果與PBS對照組相比,高濃度葡萄糖組中HUVECs細胞中SA-β-半乳糖苷酶染色陽性率顯著上升(P0.05),端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA表達顯著下降(P0.05)。而當不同濃度Klotho蛋白和高糖同時作用HUVECs時,細胞中SA-β-半乳糖苷酶染色陽性率逐漸下降(P0.05),端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA表達則逐漸上升(P0.05);高濃度葡萄糖組中HUVECs細胞凋亡率顯著上升(P0.05),抑制凋亡Bcl-2蛋白表達顯著下降(P0.05),而促進凋亡Bax、p53蛋白表達顯著上升(P0.05)。不同濃度Klotho蛋白和高糖同時作用HUVECs時,細胞凋亡率逐漸降低(P0.05),抑制凋亡Bcl-2蛋白表達顯著上升(P0.05),而促進凋亡Bax、p53蛋白表達顯著下降(P0.05)。結(jié)論抗衰老Klotho蛋白能夠抑制高糖誘導的HUVECs細胞衰老和凋亡,并通過誘導人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶mRNA、Bcl-2蛋白表達,抑制Bax、p53蛋白表達發(fā)揮作用。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of anti-aging Klotho protein on apoptosis and aging of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by high glucose and its mechanism. Methods HUVECs cells were cultured and set up in group C (), L group with PBS medium of the same volume (), H group containing low concentration of 5.5 mmol/L glucose) (supplemented with high concentration of 33. 3 mmol/L glucose group). K1 group (supplemented with 0.1 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), K2 group (containing 1 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), K3 group (containing 10 渭 mol / L Klotho 33. 3 mmol/L glucose group), The senescence of HUVECs cells in each group was detected by SAA-尾-galactosidase staining for 48 h. The expression of human telomerase reverse transcriptase mRNA in HUVECs was detected by RT-PCR, the apoptosis rate of HUVECs in each group was detected by flow cytometry, and the expression of apoptosis-related protein p53, Bcl and Bcl-2 in HUVECs was detected by Western-blot assay. Results compared with PBS control group, the positive rate of SA- 尾-galactosidase staining in HUVECs cells in high concentration glucose group was significantly increased (P 0.05), and the expression of telomerase reverse transcriptase mRNA was significantly decreased (P 0.05). When HUVECs was treated with different concentrations of Klotho protein and high glucose at the same time, the positive rate of SA- 尾-galactosidase staining decreased gradually (P 0.05), and the expression of telomerase reverse transcriptase mRNA increased gradually (P 0.05). In the high concentration glucose group, the apoptosis rate of HUVECs cells was significantly increased (P 0.05), the expression of Bcl-2 protein was significantly decreased (P 0.05), and the expression of apoptosis Bax,p53 protein was significantly increased (P 0.05). When HUVECs was treated with different concentrations of Klotho protein and high glucose at the same time, the apoptosis rate decreased gradually (P 0.05), the expression of Bcl-2 protein increased significantly (P 0.05), while the expression of Bax,p53 protein decreased significantly (P 0.05). Conclusion Anti-aging Klotho protein can inhibit the senescence and apoptosis of HUVECs cells induced by high glucose, and inhibit the expression of Bax,p53 protein by inducing the expression of human telomerase reverse transcriptase mRNA,Bcl-2 protein.
【作者單位】： 三峽大學仁和醫(yī)院ICU科;三峽大學仁和醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【基金】：湖北省教育廳自然科學研究計劃重點項目(編號:D20091308)
【分類號】：R363

【參考文獻】

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