【摘要】： 將成體干細胞定向誘導分化為卵母樣生殖細胞,將會促進卵子發(fā)生的相關(guān)研究。根據(jù)報道,羊水干細胞具有在體外自發(fā)分化為包括外胚層、中胚層和內(nèi)胚層的三個胚層類型細胞的能力。然而,羊水干細胞是否具有發(fā)育成生殖細胞的潛能尚未得到證實。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)從產(chǎn)前20-38周的人羊水中分離得到一株人羊水干細胞系,在一定的誘導條件下可以分化為卵母樣細胞,并且表達多種生殖細胞相關(guān)的標記基因。本研究還發(fā)現(xiàn)分化過程中形成的少量形態(tài)明顯特殊的細胞,可進一步發(fā)育到更加成熟的生殖樣細胞。 實驗中采用有限稀釋法,從孕中期的羊水中分離純化了一株羊水干細胞系。染色體核型分析的結(jié)果顯示其表現(xiàn)為XX型染色體,隨后又進一步對該細胞系的特異標志基因進行了鑒定。為了更好地觀察誘導細胞在體外的分化及增殖過程,我們在前期工作中構(gòu)建了pBMP15-EGFP載體。當在添加了豬卵泡液的條件培養(yǎng)基中誘導人羊水干細胞時,我們觀察到了一些形態(tài)明顯特殊的細胞,外面包圍著類似透明帶樣的光環(huán)。誘導過程中羊水干細胞可以聚集形成體積較大的懸浮的三維類胚體結(jié)構(gòu),并且這些類胚體堿性磷酸酶染色呈強陽性。此外在分化過程中,這些細胞還表達很多生殖細胞相關(guān)的標志基因,例如Oct4, Dazl, Stella, GDF9, CD117, SCP3 , ZP1, ZP2以及ZP3基因。當轉(zhuǎn)染構(gòu)建的pBMP15 -EGFP載體時,這些細胞進一步分化成綠色熒光蛋白陽性的卵母樣細胞。對羊水干細胞進行進一步誘導后,我們發(fā)現(xiàn)其中的一些圓形細胞可以自發(fā)分化成類似孤雌囊胚的結(jié)構(gòu),直徑大約在50 - 60μm左右。 將成體干細胞誘導分化為生殖樣細胞的研究,尤其是在人羊水干細胞領(lǐng)域進行的相關(guān)探索,或許可以提供一個體外的研究模型,來解決早期生殖細胞發(fā)育形成中的一些問題。
[Abstract]:Differentiation of adult stem cells into oocyte-like germ cells will promote the study of oogenesis. According to the report, amniotic fluid stem cells have the ability to spontaneously differentiate into three embryoid types including ectoderm, mesoderm and endoderm in vitro. However, whether amniotic fluid stem cells have the potential to develop into germ cells has not been confirmed. In this study, we found that a human amniotic fluid stem cell line was isolated from human amniotic fluid 20 and 38 weeks before delivery, and could differentiate into oocyte-like cells under certain induction conditions, and expressed a variety of germ cell-related marker genes. In this study, we also found that a small number of cells formed in the process of differentiation can be further developed into more mature reproductive-like cells. A amniotic fluid stem cell line was isolated and purified from amniotic fluid of second trimester by limited dilution method. Chromosome karyotype analysis showed that it was a XXtype chromosome, and the specific marker gene of the cell line was further identified. In order to better observe the differentiation and proliferation of induced cells in vitro, we constructed the pBMP15-EGFP vector in the previous work. When human amniotic fluid stem cells were induced in conditioned medium supplemented with porcine follicular fluid, some cells with distinct morphology were observed, surrounded by a halo similar to a hyaline band. During induction, amniotic fluid stem cells could aggregate to form a large suspended three-dimensional embryoid structure, and these embryoid bodies were strongly positive for alkaline phosphatase staining. In addition, many germ cell-related marker genes, such as Oct4, Dazl, Stella, GDF9, CD117, SCP3, ZP1, ZP2 and ZP3 genes, are expressed in these cells during differentiation. When the constructed pBMP15-EGFP vector was transfected, these cells further differentiated into green fluorescent protein-positive oocyte-like cells. After further induction of amniotic fluid stem cells, we found that some of the circular cells could spontaneously differentiate into parthenogenetic blastocysts with a diameter of about 50-60 渭 m. Studies on the induction and differentiation of adult stem cells into reproductive-like cells, especially in the field of human amniotic fluid stem cells, may provide an in vitro research model to solve some problems in the early development of germ cells.
【學位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

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