【摘要】：背景:研究已證實肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染可提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植效果,但其具體機(jī)制尚未完全明確。目的:探討肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染對缺氧、無血清培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3表達(dá)及細(xì)胞遷移的影響。方法:1貼壁法體外分離、擴(kuò)增培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。用x-gal染色法檢測含肝細(xì)胞生長因子基因的重組腺病毒對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的感染率。2在缺氧、無血清條件下培養(yǎng)0,3,6,9,12 h,采用RT-PCR及Western blot測定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)。3骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞缺氧、無血清培養(yǎng)6 h,采用RT-PCR及Western blot測定HGF、c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)。4細(xì)胞遷移劃痕法觀察缺氧、無血清培養(yǎng)6 h后肝細(xì)胞生長因子轉(zhuǎn)染對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果與結(jié)論:1重組腺病毒對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染率與病毒感染復(fù)數(shù)具有量效關(guān)系,病毒感染復(fù)數(shù)為150時細(xì)胞的感染率達(dá)96.4%。2隨著缺氧時間的延長骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞Bax、Bcl-2表達(dá)逐漸升高(P0.05),缺氧6 h時Bax/Bcl-2比值、Caspase-3蛋白達(dá)到最小(P0.05)。3缺氧及無血清培養(yǎng)6 h后,與對照組及空載體組相比,Ad-HGF組HGF、c-Met、Bcl-2表達(dá)增高,而Bax、Caspase-3表達(dá)下降(P0.05),對照組與空載體組差異無顯著性意義(P0.05)。4Ad-HGF組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在缺氧培養(yǎng)6 h后,遷移率比對照組及空載體組高(P0.05)。結(jié)果表明肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染上調(diào)缺氧、無血清培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞c-Met、Bcl-2表達(dá),下調(diào)Bax、Caspase-3表達(dá),增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞遷移能力。
[Abstract]:Background: it has been proved that hepatocyte growth factor gene transfection can improve the effect of bone marrow mesenchymal stem cell transplantation, but the specific mechanism is not completely clear. Aim: to investigate the effects of hepatocyte growth factor gene transfection on expression and cell migration of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) in hypoxia and serum-free culture. Methods: 1 Bone marrow mesenchymal stem cells were isolated and cultured by adherent method in vitro. X-gal staining was used to detect the infection rate of recombinant adenovirus containing hepatocyte growth factor gene on bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs). 2 cultured for 0, 3, 6, 9, 12 h under hypoxia and serum-free conditions. The expression of Bax,Bcl-2,Caspase-3 in bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) was determined by RT-PCR and Western blot. 3BMSCs were exposed to hypoxia and cultured for 6 hours without serum. HGF,c-Met,Bax,Bcl-2, was measured by RT-PCR and Western blot. The effect of hepatocyte growth factor transfection on the migration of bone marrow mesenchymal stem cells was observed after 6 hours of serum-free culture. The expression of Caspase-3 was observed by 4 cell migration scratch method. Results and conclusion: 1 the transfection rate of recombinant adenovirus to bone marrow mesenchymal stem cells was dose-dependent with the number of virus infection. When the number of virus infection was 150, the cell infection rate reached 96.4%. With the prolongation of hypoxia time, the expression of Bax,Bcl-2 in bone marrow mesenchymal stem cells increased gradually (P0.05), and the ratio of Bax/Bcl-2 was increased at 6 h after hypoxia. Caspase-3 protein reached the minimum (P0.05) .3After hypoxia and serum-free culture for 6 hours, the expression of HGF,c-Met,Bcl-2 in Ad-HGF group was higher than that in control group and empty vector group, while the expression of Bax,Caspase-3 was decreased (P0.05). The migration rate of bone marrow mesenchymal stem cells in Ad-HGF group was higher than that in control group and empty vector group after 6 hours of hypoxia culture (P0.05). 4 the migration rate of bone marrow mesenchymal stem cells in Ad-MSCs group was higher than that in control group and empty vector group (P0.05). The results showed that hepatocyte growth factor gene transfection could upregulate hypoxia, increase the migration ability of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) by up-regulating the expression of c, Bcl-2 and down-regulating the expression of Bax,Caspase-3 in serum-free cultured bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs).
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科高血壓研究所;福建省立醫(yī)院北院福建省老年醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：福建省衛(wèi)生廳青年基金(2011-1-32,2011-1-15) 福建省自然科學(xué)基金(2014J01433)~~
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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2 裴艷;徐亞偉;侯磊;于學(xué)靖;;骨髓干細(xì)胞介導(dǎo)的人肝細(xì)胞生長因子基因轉(zhuǎn)染在兔心肌梗死組織中的表達(dá)[J];臨床心血管病雜志;2008年01期

3 蔡文欽;蘇津自;俞登及;;腎上腺髓質(zhì)素基因轉(zhuǎn)染改善缺氧培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的抗凋亡能力[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年32期

4 林茂海;蘇津自;蔡文欽;鄭禮裕;許昌聲;王華軍;;攜帶腎上腺髓質(zhì)素基因腺病毒體外轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其蛋白的表達(dá)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年23期

5 林美萍;胡雨;張文文;李培蕾;許昌聲;蘇津自;林明;;人肝細(xì)胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對大鼠心肌纖維化的影響[J];中華高血壓雜志;2011年01期

6 蘇津自;蔡文欽;林美萍;林茂海;林明;;基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植對心肌病心力衰竭大鼠心功能和心臟纖維化的影響[J];中國應(yīng)用生理學(xué)雜志;2009年04期

7 Shikha Snigdha;Erica D Smith;G Aleph Prieto;Carl W Cotman;;Caspase-3 activation as a bifurcation point between plasticity and cell death[J];Neuroscience Bulletin;2012年01期

【共引文獻(xiàn)】

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1 許靜;蒲傳強(qiáng);;Fas/FasL在神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用的研究進(jìn)展[J];國際神經(jīng)病學(xué)神經(jīng)外科學(xué)雜志;2013年03期

2 劉芳婷;李建;李向南;徐盛w\0;向正華;袁紅斌;;氫分子對H_2O_2體外誘導(dǎo)氧化損傷大鼠脊髓神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2014年03期

3 華臻;楊俊鋒;潘婭嵐;劉明明;王建偉;;補(bǔ)腎中藥促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年09期

4 朱德星;宋莉;;肝細(xì)胞生長因子基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年04期

5 馬爽;張威;郭陽;;5-氮雜-2'-脫氧胞苷對膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251凋亡的調(diào)節(jié)[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2013年01期

6 馬爽;翟志勇;郭陽;;曲古霉素A促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系凋亡[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2013年03期

7 吳云飛;吳云飛;鄭維銀;李焰;;Caspase-3在血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[J];西南軍醫(yī);2013年04期

8 董芳;李富軍;哈小琴;呂同德;賈慶華;;肝細(xì)胞生長因子對冠心病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2010年12期

9 CHEN YiHuan;TENG XiaoMei;CHEN WeiQian;YANG JunJie;YANG ZiYing;YU YunSheng;SHEN ZhenYa;;Timing of transplantation of autologous bone marrow derived mesenchymal stem cells for treating myocardial infarction[J];Science China(Life Sciences);2014年02期

10 方寧;王鈺瑩;陳代雄;余麗梅;章濤;趙春華;;靜脈移植人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞改善大鼠心肌梗死后心功能[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年12期

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2 趙秋潔;乳汁球微粒表皮生長因子8在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制中的研究[D];山東大學(xué);2012年

3 朱淑云;水飛薊籽仁蛋白和油的主要特性與生物活性研究[D];江蘇大學(xué);2013年

4 陳秋鈴;Nodosin對惡性膠質(zhì)瘤的作用及其機(jī)制研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 孫靜;基于心肌保護(hù)作用的中藥活性成分及分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

6 李佩P;超聲聯(lián)合微泡促HGF修飾BMSCs靶向歸巢抗腎纖維化的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

7 農(nóng)耀明;膜片鉗原位檢測HCN4基因修飾的MSCs移植至大鼠心臟后的細(xì)胞電生理變化[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

8 熊承杰;人巨噬細(xì)胞移動抑制因子及其受體在椎間盤退變過程中的表達(dá)及其功能研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 劉劍鋒;Exendin-4聯(lián)合脂肪來源干細(xì)胞移植治療急性心梗的作用及機(jī)制研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2013年

10 王耀軍;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）對嵌合體形成及大鼠異體復(fù)合組織成活影響的免疫機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

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2 王芳兵;腎上腺髓質(zhì)素基因轉(zhuǎn)染的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞缺氧共培養(yǎng)對新生大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

3 鮑勇;重組腺病毒—肝細(xì)胞生長因子治療對自發(fā)性高血壓大鼠左心室心肌纖維化及心功能的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

4 陶長桂;重組腺病毒—肝細(xì)胞生長因子基因治療延緩自發(fā)性高血壓大鼠心室重構(gòu)及對炎癥的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2012年

5 燕琳;異氟醚單獨或聯(lián)合咪達(dá)唑侖對7日齡大鼠大腦Caspase-3表達(dá)的影響[D];華中科技大學(xué);2012年

6 楊繼濤;低能激光照射對大鼠梗死心肌組織中氧自由基和心室重塑的影響[D];鄭州大學(xué);2013年

7 于巖;負(fù)壓引流法對于靜脈淤血皮瓣治療作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 程洋;富含F(xiàn)uc蘋果果膠多糖提取與理化特性及活性研究[D];西北大學(xué);2013年

9 翟文斌;不同劑量MSCs移植促進(jìn)大鼠任意皮瓣成活的實驗研究[D];延安大學(xué);2013年

10 劉濤;高齡和青年大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心肌梗死的影響研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

【二級參考文獻(xiàn)】

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2 劉煜昊;方五旺;葉飛;房佰俊;王峰;陳紹良;趙春華;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療豬急性心肌梗死[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年04期

3 朱志勇;周慶國;魏毅東;魏經(jīng)漢;;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植治療大鼠急性心肌梗死的實驗研究[J];臨床心血管病雜志;2006年03期

4 楊國凱;林明;陳書尚;許昌聲;;靜脈移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞改善心肌病心力衰竭大鼠的心功能[J];中國臨床康復(fù);2006年13期

5 蔡文欽;蘇津自;俞登及;;腎上腺髓質(zhì)素基因轉(zhuǎn)染改善缺氧培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的抗凋亡能力[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年32期

6 林茂海;蘇津自;許昌聲;;腎上腺髓質(zhì)素基因轉(zhuǎn)染增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對心肌梗死大鼠心室重構(gòu)及心功能的影響[J];中國病理生理雜志;2009年09期

7 林明;林美萍;陳書尚;許昌聲;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭[J];中華高血壓雜志;2007年08期

8 韓曉鵬;;腎上腺髓質(zhì)素的研究進(jìn)展[J];中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2009年S2期

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2 郭樹華，，賀福初，吳祖澤;肝細(xì)胞生長因子結(jié)構(gòu)與功能的相關(guān)性研究[J];高技術(shù)通訊;1994年04期

3 哈小琴,郭樹華,吳祖澤;肝細(xì)胞生長因子是一個強(qiáng)的腎營養(yǎng)因子[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2000年04期

4 李可洲,黎介壽;肝細(xì)胞生長因子的生物學(xué)作用[J];腸外與腸內(nèi)營養(yǎng);2000年02期

5 冷建杭;肝細(xì)胞生長因子生物學(xué)作用研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);2000年01期

6 嵇揚,張潤婕,王亞南;一種促肝細(xì)胞生長因子活性測定方法[J];中國生化藥物雜志;2001年01期

7 俞水亮,楊復(fù)華;肝細(xì)胞生長因子的分子生物學(xué)研究[J];生物工程學(xué)報;2002年01期

8 孫國鳳;;鹿兒島大學(xué)高度精制肝細(xì)胞生長因子[J];生物技術(shù)通報;1989年06期

9 林凌,湯國枝;肝細(xì)胞生長因子[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;1994年01期

10 王立生，劉福陸，賀福初，吳祖澤;純化肝細(xì)胞生長因子對肝癌細(xì)胞的增殖刺激作用[J];高技術(shù)通訊;1995年08期

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2 宋衛(wèi)青;呂維紅;陳華波;;內(nèi)毒素誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡及肝細(xì)胞生長因子的抑制作用[A];第五次全國中青年檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

3 張盛潔;陳萍;葉景佳;曹江;;肝細(xì)胞生長因子激活因子抑制因子-1的表達(dá)調(diào)控研究[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細(xì)胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

4 況應(yīng)敏;馬超龍;曾仲;劉濤;范振磊;;肝細(xì)胞生長因子在老年親屬供腎移植中的作用[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

5 哈小琴;;減毒沙門氏菌介導(dǎo)肝細(xì)胞生長因子基因?qū)π∈竺庖叩挠绊慬A];第六屆全國免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2008年

6 王雁;尚濤;;肝細(xì)胞生長因子和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶與妊娠高血壓綜合征血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的研究[A];第八次全國婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

7 賀芳;鄔力祥;劉發(fā)益;曹莉;楊麗娟;周p

本文編號：2462142